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藤茶提取物对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制及相关淋巴肿瘤细胞生长活性的影响
1
作者
张宏赐
何嘉伟
+2 位作者
何吉甜
肖岚泽
李晓娟
《山东中医药大学学报》
2024年第6期699-707,共9页
目的:观察藤茶水提取物(AGE)对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解复制的影响,检测AGE抗KSHV相关淋巴瘤的安全性和细胞特异性,探索其可能的细胞通路机制。方法:采用组织型纤溶酶原激活剂(TPA)诱导人卡波式肉瘤相关疱疹病毒感染细胞系(BCB...
目的:观察藤茶水提取物(AGE)对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解复制的影响,检测AGE抗KSHV相关淋巴瘤的安全性和细胞特异性,探索其可能的细胞通路机制。方法:采用组织型纤溶酶原激活剂(TPA)诱导人卡波式肉瘤相关疱疹病毒感染细胞系(BCBL-1)中的KSHV裂解复制,用AGE制备的低、中、高浓度溶液处理48~72 h,随后收集细胞样品,逆转录PCR(RT-PCR)检测KSHV潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45以及晚期基因K8.1的转录水平;实时荧光定量PCR检测KSHV子代病毒含量;蛋白质免疫印迹法(WB)检测KSHV潜伏蛋白LANA、裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达及KSHV裂解复制中相关信号通路蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 MAPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活化水平;噻唑蓝比色法(MTT)检测AGE对BCBL-1和正常外周血单个核细胞(PBMC)的细胞毒性。结果:与对照组比较,低浓度AGE对潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45的转录无明显抑制作用,对晚期基因K8.1的转录具有轻微的抑制作用(P<0.05);中浓度AGE对LANA、RTA和ORF45的转录具有轻微的抑制作用,并显著抑制K8.1的转录(P<0.05,P<0.01);高浓度AGE对LANA、RTA的转录无明显抑制作用,但显著抑制即时早期基因ORF45和晚期基因K8.1的转录(P<0.01)。20μg/mL浓度AGE能抑制73%子代KSHV颗粒的产生。与对照组比较,低、中、高浓度AGE对潜伏蛋白LANA的表达抑制均不明显,但对裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达均有不同程度的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001),且呈剂量依赖性抑制。低、中、高浓度的AGE对Akt的磷酸化均没有明显的抑制作用,但对mTOR(2448)、ERK1/2和p38 MAPK(180/182)的磷酸化均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.001)。100μg/mL的AGE显著抑制BCBL-1细胞的生长,最大细胞抑制率为67.7%,AGE对PBMC最大细胞抑制率为37.0%。BCBL-1细胞在潜伏期和裂解期的半数毒性浓度(CC50)分别为(25.7±0.5)μg/mL和(31.8±8.6)μg/mL,AGE对KSHV子代产生的半数抑制浓度(IC50)抑制作用小于10μg/mL,PBMC的CC50为49.54μg/mL。结论:高效低毒的天然植物药藤茶是潜在的治疗KSHV感染和相关淋巴瘤的有效药物来源,其抗KSHV作用可能与抑制ERK/MAPK/mTOR通路活化有关。
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关键词
藤茶
卡波西肉瘤相关疱疹病毒
裂解复制
淋巴瘤
ERK/MAPK/mTOR通路
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职称材料
题名
藤茶提取物对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制及相关淋巴肿瘤细胞生长活性的影响
1
作者
张宏赐
何嘉伟
何吉甜
肖岚泽
李晓娟
机构
湖北中医药大学
出处
《山东中医药大学学报》
2024年第6期699-707,共9页
基金
湖北省自然科学基金项目(编号:2023AFD109)。
文摘
目的:观察藤茶水提取物(AGE)对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)裂解复制的影响,检测AGE抗KSHV相关淋巴瘤的安全性和细胞特异性,探索其可能的细胞通路机制。方法:采用组织型纤溶酶原激活剂(TPA)诱导人卡波式肉瘤相关疱疹病毒感染细胞系(BCBL-1)中的KSHV裂解复制,用AGE制备的低、中、高浓度溶液处理48~72 h,随后收集细胞样品,逆转录PCR(RT-PCR)检测KSHV潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45以及晚期基因K8.1的转录水平;实时荧光定量PCR检测KSHV子代病毒含量;蛋白质免疫印迹法(WB)检测KSHV潜伏蛋白LANA、裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达及KSHV裂解复制中相关信号通路蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38 MAPK)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活化水平;噻唑蓝比色法(MTT)检测AGE对BCBL-1和正常外周血单个核细胞(PBMC)的细胞毒性。结果:与对照组比较,低浓度AGE对潜伏基因LANA、即时早期基因RTA和ORF45的转录无明显抑制作用,对晚期基因K8.1的转录具有轻微的抑制作用(P<0.05);中浓度AGE对LANA、RTA和ORF45的转录具有轻微的抑制作用,并显著抑制K8.1的转录(P<0.05,P<0.01);高浓度AGE对LANA、RTA的转录无明显抑制作用,但显著抑制即时早期基因ORF45和晚期基因K8.1的转录(P<0.01)。20μg/mL浓度AGE能抑制73%子代KSHV颗粒的产生。与对照组比较,低、中、高浓度AGE对潜伏蛋白LANA的表达抑制均不明显,但对裂解蛋白RTA、ORF45和K8.1的表达均有不同程度的抑制作用(P<0.05,P<0.01,P<0.001),且呈剂量依赖性抑制。低、中、高浓度的AGE对Akt的磷酸化均没有明显的抑制作用,但对mTOR(2448)、ERK1/2和p38 MAPK(180/182)的磷酸化均有明显抑制作用(P<0.01,P<0.001)。100μg/mL的AGE显著抑制BCBL-1细胞的生长,最大细胞抑制率为67.7%,AGE对PBMC最大细胞抑制率为37.0%。BCBL-1细胞在潜伏期和裂解期的半数毒性浓度(CC50)分别为(25.7±0.5)μg/mL和(31.8±8.6)μg/mL,AGE对KSHV子代产生的半数抑制浓度(IC50)抑制作用小于10μg/mL,PBMC的CC50为49.54μg/mL。结论:高效低毒的天然植物药藤茶是潜在的治疗KSHV感染和相关淋巴瘤的有效药物来源,其抗KSHV作用可能与抑制ERK/MAPK/mTOR通路活化有关。
关键词
藤茶
卡波西肉瘤相关疱疹病毒
裂解复制
淋巴瘤
ERK/MAPK/mTOR通路
Keywords
Tengcha(Ampelopsis Grossedentata)
Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus
lytic replication
lymphoma
ERK/MAPK/mTOR signal pathway
分类号
R285 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
藤茶提取物对卡波西肉瘤相关疱疹病毒裂解复制及相关淋巴肿瘤细胞生长活性的影响
张宏赐
何嘉伟
何吉甜
肖岚泽
李晓娟
《山东中医药大学学报》
2024
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