可缓释富血小板血浆生长因子的新型自组装多肽水凝胶制备及性能表征

背景:富血小板血浆水凝胶由于生长因子的突发释放与伤口部位蛋白酶的快速清除,导致生长因子在伤口部位的停留时间较短,近年来研究者关注利用水凝胶材料包封富血小板血浆,以改善富血小板血浆水凝胶的不足。目的:制备自组装多肽-富血小板血浆水凝胶,探究其对富血小板血浆生物活性因子释放的影响。方法:采用固相合成法合成自组装多肽,以D-PBS配制成溶液。将不同体积的多肽溶液分别与富血小板血浆、氯化钙/凝血酶溶液混合制备水凝胶,使体系中多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察成水凝胶状态,并体外检测富血小板血浆中生长因子释放情况。将质量分数1%多肽溶液与质量分数1%人血清白蛋白溶液混合激发多肽自组装,使多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察液体流动状态,并检测自组装多肽的流变力学性能。通过扫描电镜与透射电镜观察多肽(质量分数分别为0.1%,0.001%)-人血清白蛋白溶液的微观结构。结果与结论:①不同体积多肽溶液与富血小板血浆均可形成水凝胶,与富血小板血浆水凝胶相比,0.1%,0.3%多肽-富血小板血浆凝胶可缓解表皮生长因子、血管内皮生长因子的突发释放,延长释放时间至48 h。②添加人血清白蛋白后,0.1%多肽组仍呈流动液体,0.3%多肽组呈半液体状态,0.5%多肽组激发自组装形成水凝胶,确定富血小板血浆中人血清白蛋白可激发多肽自组装;随着多肽质量分数的提高,自组装多肽的存储模量越高,越容易成胶。③透射电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽纳米纤维较短且无序堆积;添加人血清白蛋白后,多肽纳米纤维明显变长,并且相互交联成束,形成致密的纤维网络结构。扫描电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽呈无序堆积的片状结构;添加人血清白蛋白后,多肽自组装成相互交联且有序密集排列的多孔状结构。④结果显示,新型自组装多肽可由富血小板血浆激发自组装,根据人血清白蛋白与多肽的比例可精准调节自组装效果,且多肽对富血小板血浆生长因子有缓释作用,可作为一种新型的生物材料应用于组织修复。

大鼠富血小板血浆制备方法的改良及质量检测

目的:优化一次离心法制备大鼠富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)的实验方案。方法:用肝素钠抗凝管收集经颈动脉插管获取的大鼠动脉血后分装入无菌EP管中,使用生理盐水调整红细胞浓度后,于不同条件下(200、220、240×g离心8、10、12 min等)制备大鼠PRP,随后利用血细胞分析仪及流式细胞仪分别对抗凝全血及PRP进行细胞计数和质量评价,比较不同组间的差异。结果:大鼠全血抗凝后调整红细胞浓度至(5.5-6.5)×10^(12)/L时有利于PRP的提取。当以220×g离心10 min时,血小板回收率最高[(53.52±0.63)%]。且提取出的PRP凋亡情况和血小板活化水平与全血无明显差异(P>0.05)。提取的PRP中生长因子释放水平较全血显著升高(P<0.05)。结论:降低红细胞混入量是提高PRP提取效率的关键,本研究成功改良了大鼠PRP的制备方法,血小板的回收率高且质量稳定。

汽车专业教育模式的现状分析与创新研究

本文重点分析了现代中职学校汽车专业的教学现状及存在的问题，从职业教学理念、重点教学环节的创新、全新评价模式的构建等方面提出了关于该专业具体创新的思考。

影响人外周血单个核细胞4℃保存效果的因素分析

目的:分析4℃无血清条件下人外周血单个核细胞保存效果及其相关影响因素。方法:采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,使用不同细胞密度、添加人血清白蛋白、葡萄糖等条件对其进行4℃保存,并检测保存72 h内细胞的存活率、细胞数量、活细胞数量和细胞表型。结果:随保存时间延长,人外周血单个核细胞数量逐步下降(r=0.982),与(5-6)×10^(6)/ml细胞密度相比较,细胞保存密度为(1-2)×10^(6)/ml时细胞数量下降趋势减缓;添加人血清白蛋白和葡萄糖可有效提升人外周血单个核细胞的存活率,其中,2%人血清白蛋白保存效果更优;淋巴细胞亚群的分析结果表明,相较于对照组,添加人血清白蛋白和葡萄糖后NK细胞和T细胞数量下降趋势明显减缓。结论:(1-2)×10^(6)/ml的细胞密度、2%人血清白蛋白更适合PBMC的保存,5%葡萄糖可提升人外周血单个核细胞的4℃保存效果。

小鼠冰冻血小板制备方法的建立及其质量评价

目的建立小鼠冰冻血小板(CPP)制备方法,并对制备的小鼠CPP进行质量评价。方法采用心脏采血方式获取小鼠全血后,用14%CPDA-1抗凝并分装入无菌离心管中,以离心力300×g、离心时间8 min的条件提取小鼠富血小板血浆(PRP),对PRP提取时的适宜离心体积进行探索以提高血小板回收率。采用Valeri“无清洗”方法对小鼠血小板进行-80℃冰冻储存,通过血小板计数、流式细胞分析、血小板聚集等评价CPP质量。结果全血离心体积为2.0 ml时血小板回收率最高,可达40%左右,且全血分层良好。相比新鲜血小板(FP),CPP冻存48 h后,血小板计数(PLT)无明显改变,血小板压积(PCT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)升高;血小板活化水平及凋亡率显著升高;血小板聚集率下降至40%左右。结论成功建立小鼠CPP制备方法,且制备的小鼠CPP质量良好,其测定指标的变化趋势与人源CPP相应指标的变化趋势相符。

中职汽车维修与检测专业教学探析

近年来,随着经济的发展和社会的不断进步,汽车不断增多,使我国对汽车维修与检测方面的专业技术人才的需求越来越大。因此,中职汽车维修与检测专业人才的培养也越来越受到重视。本文主要对中职汽车维修与检测专业教学的现状及提升策略进行探讨,以促进中职院校的发展。