下调miR-454增强食管鳞癌细胞对顺铂敏感性的作用及机制

目的探讨miR-454在食管鳞癌细胞对顺铂敏感性中的作用及分子机制。方法采用递增药物浓度-间歇冲击作用的方法构建顺铂食管鳞癌耐药细胞株EC109/DPP;采用实时荧光定量PCR检测miR-454在食管癌细胞EC109和EC109/DPP细胞中的表达差异;噻唑蓝(MTT)法检测miR-454沉默对EC109/DPP细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响;Western blot检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、AKT蛋白的表达水平。结果EC109/DPP细胞中miR-454表达水平较EC109细胞显著升高;下调miR-454后可显著提高EC109/DPP细胞的增殖活性及顺铂敏感性;下调miR-454后EC109/DPP细胞中PPARγ蛋白水平显著升高,而AKT蛋白表达水平显著降低。结论下调miR-454表达可增强EC109/DPP细胞对顺铂的敏感性,其作用机制可能与影响PPARγ、AKT蛋白表达有关。

可手术治疗的135例肺鳞癌患者预后的影响因素分析

目的探讨可手术的肺鳞癌患者预后的相关因素。方法回顾性分析2016年1月至2018年8月郑州大学第一附属医院收治的135例术后肺鳞癌患者的临床资料,研究影响患者总生存期(OS)的相关因素。结果单因素分析显示,吸烟史、体重指数、手术方式、术后TNM分期、术后T分期、淋巴结转移、辅助化疗、辅助化疗周期与患者的OS相关。多因素分析发现,术后T分期、是否有淋巴结转移、体重指数、是否辅助化疗及辅助化疗周期是影响肺鳞癌患者OS的独立危险因素。结论肺鳞癌患者的预后较差,手术加辅助化疗的治疗方式可提高患者的预后,辅助化疗周期在4~6个周期最佳,术后T分期、淋巴结转移、体重指数都是肺鳞癌患者预后的重要指标。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对食管鳞癌化疗敏感性影响的研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮对食管鳞癌化疗敏感性的影响。方法MTT法检测罗格列酮、顺铂、罗格列酮联合顺铂两者联用对食管鳞癌EC109细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术检测罗格列酮、顺铂、罗格列酮联合顺铂对EC109细胞细胞周期分布的影响。建立EC109细胞裸小鼠移植瘤模型,观察连续灌胃(罗格列酮、顺铂、罗格列酮联合顺铂)对小鼠肿瘤体积和抑制率的影响。结果罗格列酮可显著增强顺铂对EC109细胞的抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性。细胞周期分布分析结果显示罗格列酮联合顺铂可使EC109细胞S期细胞显著增多。罗格列酮、顺铂、罗格列酮联合顺铂对EC109细胞裸鼠移植瘤的抑制率分别为40.21%、52.84%、75.22%,罗格列酮联合顺铂组小鼠肿瘤体积显著减小。结论PPAR-γ激动剂罗格列酮能够显著增强顺铂对食管鳞癌的化疗敏感性,其机制可能主要与S期细胞周期阻滞有关。

长链非编码RNA反义RNA 1靶向微小RNA-501-3p对食管癌细胞恶性生物学行为影响的实验研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)胸腺生成素反义RNA 1(TMPO-AS1)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法2016年6月至2019年12月,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测20例食管癌组织和癌旁组织中lncRNA TMPO-AS1和微小RNA(miR)-501-3p的水平,食管癌Eca109细胞分为lncRNA TMPO-AS1干扰组(转染si-NC和si-TMPO-AS1);miR-501-3p过表达组(转染miR-NC和miR-501-3p);lncRNA TMPO-AS1过表达组(转染pcDNA和pcDNA-TMPO-AS1);lncRNA TMPO-AS1和miR-501-3p共抑制组(转染si-TMPO-AS1+anti-miR-NC和si-TMPO-AS1+anti-miR-501-3p)。噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术和Transwell实验分别检测食管癌Eca109细胞增殖、凋亡率、细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证lncRNA TMPO-AS1与miR-501-3p的调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差进行分析。结果食管癌组织组中的lncRNA TMPO-AS1水平(2.64±0.26)高于癌旁组织(1.00±0.09,t=26.657,P<0.05),miR-501-3p水平(0.44±0.04)低于癌旁组织(1.00±0.07,t=31.063,P<0.05);干扰lncRNA TMPO-AS1的Eca109细胞24 h增殖(0.36±0.03)低于si-NC组(0.39±0.03,t=2.121,P<0.05),48 h增殖(0.45±0.04)低于si-NC组(0.75±0.07,t=11.163,P<0.05),72 h增殖(0.57±0.05)低于si-NC组(1.16±0.09,t=17.191,P<0.05),迁移细胞数[(54.14±5.65)个]低于si-NC组[(113.02±9.87)个,t=15.531,P<0.05],侵袭细胞数[(47.69±5.01)个]低于si-NC组[(96.32±9.88)个,t=13.169,P<0.05],细胞凋亡率[(22.15±2.22)%]高于si-NC组[(6.98±0.69)%,t=19.576,P<0.05];过表达miR-501-3p的Eca109细胞48 h增殖(0.51±0.05)低于miR-NC组(0.77±0.07,t=9.067,P<0.05),72 h增殖(0.65±0.06)低于miR-NC组(1.15±0.09,t=13.867,P<0.05),迁移细胞数[(61.23±6.33)个]低于miR-NC组[(115.25±9.25)个,t=14.458,P<0.05],侵袭细胞数[(53.14±5.33)]低于miR-NC组[(98.32±8.47)个,t=13.543,P<0.05],细胞凋亡[(19.58±1.74)%]高于miR-NC组[(7.23±0.77)%,t=19.471,P<0.05],差异均有统计学意义。结论lncRNA TMPO-AS1通过靶向miR-501-3p促进食管癌细胞的恶性生物学行为,可被视为食管癌患者的潜在治疗靶标。

微小RNA-454通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/蛋白激酶B轴对食管癌细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-454对食管癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法将转染anti-miR-454、anti-miR-NC的ECA109细胞(中国科学院上海细胞库)设为anti-miR-454组、anti-miR-NC组。噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对ECA109细胞增殖抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50);蛋白质印迹法(Western blot)实验检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。多样本计量资料比较采用单因素方差分析,两两样本比较采用SNK-q检验。结果anti-miR-454组IC50值低于anti-miR-NC组[(0.41±0.05)μg/ml比(0.82±0.08)μg/ml,P<0.01];MTT实验显示,细胞中miR-454下调后,不同顺铂浓度对ECA109细胞增殖抑制率显著升高;Western blot实验显示,细胞中miR-454下调后,PI3K、mTOR、p70S6K蛋白相对表达量,p-Akt/Akt显著降低。结论下调miR-454表达可增强食管癌ECA109细胞顺铂敏感性,推测与其靶向上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达、抑制Akt信号通路有关。