长期体外反搏对高胆固醇血症猪血管内皮细胞的保护作用及机制

目的:探讨体外反搏对高胆固醇血症猪血管内皮细胞的保护作用及机制。方法:选雄性乳猪12头用高脂喂养建立动脉粥样硬化模型,对模型猪进行32h体外反搏治疗。用cDNA基因芯片对猪的动脉血管内皮细胞基因表达谱进行量化分析。结果:腹主动脉苏丹Ⅲ染色图像定量分析,高脂组:7.84%±2.37%;高脂加反搏组:1.26%±0.36%。两组差异有显著性意义(P<0.05)。冠状动脉左旋支内膜1:500扫描电镜显示:高脂+反搏组内膜的血管内皮细胞排列有序,细胞呈梭型排列与血流方向一致,表面光滑;高脂组血管内膜细胞排列紊乱,表面不光滑,有大量脱落细胞。显著改变的基因:芯片1(反搏组Cy3/高脂组Cy5):锌指蛋白0.33、MAP4K30.13、长链脂肪酸合成酶0.35、神经介素B受体0.19、GPX-13.26、整合素β10.06、CTGF0.28、eNOS3.1、VCAM-10.50;芯片2(高脂组Cy3/正常组Cy5):锌指蛋白23.06、MAP4K36.75、长链脂肪酸合成酶2.71、神经介素B受体6.68、GPX-10.63、整合素β16.29、CTGF2.45。结论:长期体外反搏可以改善内皮形态与功能,增加内皮细胞抗氧化作用,下调内皮细胞机械性刺激感应蛋白基因的表达,降低血管內皮细胞对LDL的摄取,及下调炎症因子相关基因的表达,起到抗动脉粥样硬化的作用。

慢性体外反搏对高脂饲养猪动脉内皮细胞基因表达的影响

目的探讨慢性体外反搏对高脂饲养猪动脉内皮细胞基因表达的影响。方法选雄性乳猪22头用高脂喂养建立动脉粥样硬化模型,对模型猪进行36h体外反搏治疗。对冠状动脉作透射电镜检查。对腹主动脉作苏丹III染色,分析脂质浸润阳性率。用基因芯片分析猪的胸主动脉内皮细胞基因的表达。结果透射电镜显示,高脂组冠状动脉内皮细胞下层可见巨噬细胞和分化的泡沫细胞,正常组、高脂加反搏组内皮细胞下层完整。正常组和高脂加反搏组与高脂组腹主动脉苏丹III染色阳性率有显著差异(P<0.05)。芯片检测显示,与正常组相比,高脂组整合素β1、CTGF上调;与高脂组相比,反搏组整合素β1、CTGF,和VCAM-1下调,eNOS上调。结论慢性体外反搏可以下调动脉内皮细胞整合素β1、CTGF和VCAM-1基因的表达,降低动脉內皮细胞对脂质的摄取,改善动脉内皮功能,起到抗动脉粥样硬化的作用。

体外反搏对减轻高脂饲养猪产生动脉粥样硬化的实验研究

目的探讨体外反搏对减轻高脂饲养猪产生动脉粥样硬化的效果及机制。方法选雄性乳猪16头,用高脂喂养建立动脉粥样硬化模型,对模型猪进行36h体外反搏治疗。对腹主动脉作苏丹Ⅲ染色,分析脂质浸润阳性率;用基因芯片分析猪的动脉血管内皮细胞基因的表达。结果腹主动脉苏丹Ⅲ染色图像定量分析阳性率,高脂组为6.49%±0.84%,高脂加反搏组为2.29%±0.46%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。发现改变的基因:芯片1(反搏组Cy3/高脂组Cy5):整合素β10.06、CTGF0.28;芯片2(反搏组Cy3/高脂组Cy5):整合素β10.62、CTGF0.39。结论体外反搏可以下调内皮细胞整合素β1、CTGF基因的表达,降低血管內皮细胞对脂质的摄取,起到抗动脉粥样硬化的作用。

体外反搏治疗血清对培养内皮细胞基因表达的影响

目的探讨经体外反搏治疗的冠心病患者血清对血管内皮细胞基因表达的调控效应。方法分别取接受体外反搏治疗的冠心病患者1、24和36h时间点的血清,用于培养人脐静脉血管内皮细胞。用cDNA基因芯片检测3个治疗时点反搏前、后血管内皮细胞基因表达谱。结果反搏前后比较,有10个基因(核转录因子、真核转录启动因子-4、平滑肌的肌球蛋白重链、α2-肌动蛋白、微管蛋白β肽链、组织相容蛋白G、黑色素黏附分子、神经介素B受体、蛋白激酶4K2、血小板凝血酶敏感蛋白-1)的表达在3个治疗时点上出现显著改变。在1h点均为上调,在24h、36h时点均为下调。结论体外反搏治疗冠心病患者血清对血管内皮细胞的炎症反应、细胞凋亡相关基因表达有调控效应,并随体外反搏治疗时间的增加呈抑制其表达的趋势。

抗DNA酶B滴度测定在风湿性心脏病诊断中的价值

目的 探讨抗 DNA酶 B检测用于风湿性心脏病诊断的价值。方法 检测 43例风湿性心脏病伴活动性风湿热 ,39例风湿性心脏病不伴风湿热活动和 40例非风湿性心脏病 (对照组 )病人血清的抗 DNA酶 B抗体 ,并进行对比。结果 风湿性心脏病伴活动性风湿热组 ,风湿性心脏病不伴风湿热组和对照组抗 DNA酶 B阳性率分别为81.4% ,2 0 .1%和 5 % ,与对照组比较 ,前两组的 P值分别为 <0 .0 0 1和 <0 .0 5。结论 抗 DNA酶

Micro、RA—50两种半自动生化分析仪性能比较

半自动生化分析仪是近年来出现的一种较先进的医学检测仪器.其应用范围较广,实用价值也较大.目前国内外生产该类仪器的厂家比较多,如何从众多的仪器中选购较为理想的产品,作者以国家计量检定规程对两种较为畅销的半自动生化分析仪的主要性能进行比较和分析.

血管紧张素-(1-7)对心肌肥厚的影响及其与细胞外信号调节激酶的关系

目的:探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对压力负荷性心肌肥厚的影响及其与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的关系。方法:采用腹主动脉缩窄术复制心脏压力负荷增高大鼠模型。75只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、Ang-(1-7)治疗组。在腹主动脉缩窄术后1d开始,Ang-(1-7)治疗组大鼠,经置入式微量泵持续颈静脉给予Ang-(1-7)(25μg.kg-1.h-1);假手术组及模型对照组经微量泵只给予同量的生理盐水。各组分别于术后1周、术后4周处死部分大鼠,检测左心室重量/体重比、血浆及心肌血管紧张素Ⅱ浓度,并采用免疫印迹方法检测大鼠心肌中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平。结果:术后1周和4周,腹主动脉缩窄均导致心肌血管紧张素Ⅱ浓度升高、左心室重量/体重比增加,也导致了心肌中p-ERK1/2表达增高;血管紧张素-(1-7)治疗未改变腹主动脉缩窄对心肌血管紧张素Ⅱ浓度的影响,但能明显减轻腹主动脉缩窄所诱导增高的左心室重量/体重比和心肌中p-ERK1/2表达水平。结论:外源性Ang-(1-7)可减轻压力负荷增高所致的心肌肥厚,这一作用可能与它抑制心肌p-ERK1/2表达有关。

广州地区1571例胎儿地中海贫血产前基因型与血液学特征分析

目的：研究胎儿地中海贫血（地贫）的发生率及基因型分布，了解胎儿中、重型地贫的检出率，探讨地贫胎儿的血液学指标特点。方法：收集2011年8月到2015年8月在我院分子诊断室进行产前地贫基因检测的病例共1571例，其中根据孕周不同分为绒毛（9-11周）143例、羊水（16-20周）1064例和脐血（20-38周）364例。用XE4000i血细胞分析仪对脐血进行血液学指标（MCV、MCH、Hb）检测。用Gap—PCR技术检测缺失型α-地贫，反向斑点杂交技术（RDB—PCR）检测β-地贫和非缺失型地贫，可疑标本通过测序确定。结果：在1571例胎儿中，检测出正常胎儿621例（39．53％），异常胎儿950例（60．47％），其中α-地贫641例（40．80％），β-地贫258例（16．42％），α复合β地贫51例（3．25％）。检出中、重型α-地贫胎儿149例（9．48％），中、重型β-地贫胎儿44例（2．80％），总中、重型地贫的检出率高达12．29％。正常胎儿组的MCV为（113．25±9．20）fl，MCH为（37．71±2．70）Pg，Hb为（128．42±22．25）g／L，与正常胎儿组相比，α-地贫1纯合子组（-SEA／-SEA）、α-地贫1杂合子组（-SEA／αα）和HbH病的MCV、MCH、Hb明显降低（P〈0．05），静止型地贫组（-α3．7／αα、-α4．2／αα）和α复合β地贫的MCV、MCH明显降低（P〈0．05），非缺失型α-地贫组的MCH、Hb明显降低（P〈0．05），β-地贫各项血液学指标结果与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：α-地贫胎儿血液学指征变化明显，而β-地贫在胎儿期表现隐匿，因此对胎儿进行产前地贫基因检测是非常有必要的，尤其双方都是同型α-地贫或β-地贫夫妇，这样可有效地预防中、重型地贫胎儿的出生，控制地贫的发生率。不同基因型的胎儿血液学指标有不同特点，检测胎儿血象对于患病胎儿的产前筛查及产前诊断有一定的补充意义。

PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的应用价值

目的:探讨PCR-流式荧光杂交技术在地中海贫血产前基因诊断中的临床价值。方法:选取2016年1月-2019年8月在中山大学附属第一医院进行常规产前检查或优生遗传咨询的孕妇及其配偶1 001例,受检夫妻双方均为地中海贫血基因携带者,适时抽取羊水等样本,提取基因组DNA,采用PCR-流式荧光杂交技术和传统多重Gap-PCR和PCR-RDB技术对样本进行α和β-地中海贫血基因平行检测,分析基因诊断结果,评估两者在地中海贫血基因诊断中的一致性。结果:2种方法均检出正常基因型389 (占38.86%,389/1001)例,异常基因型59种,共612 (占61.14%,612/1001)例,包括α-地中海贫血416例、β-地中海贫血162例和αβ-复合地中海贫血34例。α-地中海贫血基因型主要为--SEA、-α3.7和-α4.2;β-地中海贫血中检出Cd41-42突变频率最高,其次是IVS-Ⅱ-654和CD17。检出罕见型HKαα/--SEA1例。与Gap-PCR和PCR-RDB技术相比,PCR-流式荧光杂交法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,这2种检测方法结果一致性很好。结论:PCR-流式荧光杂交技术操作简便快速,与传统技术联合平行检测有助于提高地中海贫血孕妇产前诊断的准确性。

血管紧张素-(1-7)对压力负荷增高大鼠心肌胶原网络重塑的影响

目的 探讨血管紧张素 ( 17)〔Ang ( 17)〕对压力负荷增高大鼠心肌胶原网络重塑的影响。方法 腹主动脉缩窄术制备压力负荷增高大鼠模型 ,75只 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Ang ( 17)治疗组 ( 2 5 μg· kg- 1· h- 1 ,持续静脉给药 )。各组分别于术后 1周和 4周处死部分大鼠 ,检测左心室质量 /体质量比以及心肌胶原容积分数 ,并采用逆转录聚合酶链反应检测左心室心肌 、 型胶原 m RNA的表达水平。结果 与假手术组比较 ,模型组和 Ang ( 17)治疗组术后 1周 、 型胶原 m RNA表达均明显增高 ,Ang ( 17)治疗组增高的幅度明显低于模型组 ;模型组和 Ang ( 17)治疗组术后 4周的左心室质量 /体质量比、心肌胶原容积分数均高于假手术组 ,但 Ang ( 17)治疗组上述指标低于模型组。结论 给予外源性Ang ( 17)能减轻压力负荷增高所致的心肌胶原网络重塑。

微泡造影剂超声辐照介导自杀基因系统治疗肝癌实验研究

目的探讨微泡造影剂超声辐照介导自杀基因系统治疗体内肝癌肿瘤的作用。方法采用小鼠肝癌瘤体内直接注射KDR-TK、AFP-TK基因和微泡造影剂SonoVue后加以超声辐照的介导方式,并通过给予GCV和5-FC两种前药,观察肿瘤生长体积、抑瘤率、生存时间、肿瘤细胞凋亡指标。结果 (1)治疗组小鼠皮下肝癌移植瘤体生长体积与对照组之间差异无统计学意义,但治疗组的抑瘤率有增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)治疗组与对照组小鼠生存时间差异均无统计学意义(P>0.05);(3)治疗组诱导肿瘤组织内的细胞凋亡增多,与对照组差异有统计学意义(P<0.05);(4)各组除针道外,肿瘤组织内未见明显坏死。结论微泡造影剂超声辐照介导自杀基因治疗系统具有抑制小鼠体内肝癌实体瘤的生长速率的趋势,可能的机制是诱导肿瘤细胞凋亡。

全反式维甲酸和1,25-二羟维生素D_3联合应用对大肠癌细胞的分化诱导作用

目的 : 观察联合使用全反式维甲酸 (all trans retinoicacid ,ATRA)和 1,2 5 二羟维生素D3 对大肠癌细胞株LoVo的影响。方法 :以MTT法测定细胞生长 ,碱性磷酸酶 (alkalinephosphatases ,ALP)比活性检测细胞分化。结果 :ATAR和 1,2 5 二羟维生素D3 对LoVo生长的抑制作用在一定浓度范围内呈时间浓度依赖关系 ,联合用药时抑制作用增强。经药物作用细胞后肠型ALP逐渐升高。结论 :联合使用ATRA和 1,2 5 二羟维生素D3

慢性增强型体外反搏对高胆固醇血症猪血管内皮细胞凋亡的影响

【目的】探讨慢性增强型体外反搏对高胆固醇血症猪主动脉血管内皮细胞凋亡的影响。【方法】18头雄性乳猪随机分为正常饲养组(n=6),高脂饲养组(n=6)及高脂饲养+反搏组(n=6)。后2组复制高胆固醇血症猪模型并对高脂饲养+反搏组进行为时36h的慢性增强型体外反搏,收集3组动物主动脉血管内皮细胞,TUNEL法测定其主动脉血管内皮细胞的凋亡指数。【结果】与正常饲养组相比,高脂饲养组和高脂饲养+反搏组血清总胆固醇和低密度脂蛋白明显升高。主动脉血管内皮细胞凋亡指数在正常饲养组为(127±36)‰,在高脂饲养组为(237±23)‰,在高脂饲养+反搏组为(177±12)‰,高脂饲养组和高脂饲养+反搏组较正常饲养组明显升高(P<0.05),高脂饲养+反搏组较高脂饲养组明显降低(P<0.05)。【结论】高胆固醇血症刺激血管内皮细胞凋亡,慢性增强型体外反搏通过减轻血管内皮细胞凋亡拮抗高胆固醇脂血症对血管内皮的损伤作用。

慢性体外反搏对高胆固醇血症猪动脉内皮细胞的影响

目的探讨慢性增强型体外反博(EECP)能否在体修复高胆固醇血症引起的猪动脉内皮细胞(ECs)损伤。方法高胆固醇血症猪反搏36h后,取前降支进行扫描电镜检查,收集胸主动脉ECs进行蛋白质组学检查。结果高脂组冠脉ECs排列不规则、大量脱落、斑块形成,反搏组ECs呈流线型排列、脱落程度显著减轻;与高脂组相比,在反搏组的ECs检测到6种高表达的蛋白。结论慢性EECP可能通过调节ECs蛋白表达,改善ECs粘附性和代谢及减轻ECs内皮凋亡,从而修复高胆固醇血症对动脉内皮形态和功能的损伤。

DJ-1蛋白在喉鳞状细胞癌与Hep-2细胞系表达

【目的】探讨DJ-1基因在喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞系中的表达特征。【方法】采用间接免疫荧光方法,检测15例喉鳞状细胞癌手术切除癌组织、癌旁组织、正常黏膜标本和Hep-2细胞系的DJ-1蛋白。【结果】喉鳞状细胞癌组织与Hep-2细胞系中DJ-1蛋白均有表达;DJ-1蛋白在喉鳞状细胞癌组织的表达水平分别高于癌旁组织、正常黏膜组织,差异有统计学意义(F=8.098,P=0.002);低分化喉癌较高分化喉癌的DJ-1水平增高,差异有统计学意义(t=3.099,P=0.008);喉癌的临床分期和年龄与DJ-1蛋白的表达没有相关性(t=0.476,P=0.642;t=0.019,P=0.985)。【结论】喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞系中均有DJ-1蛋白的表达,喉鳞癌组织内的表达高于癌旁组织和黏膜组织;DJ-1基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达可能提示它参与了喉癌的发生发展的有关过程,为基因治疗提供了理论基础。

原发性高血压患者红细胞Mg^(2+)/Na^+交换速率的研究

目的：探讨国人原发性高血压（EH）患者红细胞Mg2+／Na+交换速率（VNDmax）、红细胞镁含量（EMC）及其与血压的关系。方法：原子吸收光谱火焰法。结果：（1）EH组的VNDmax显著高于正常对照组（分别为155．3±15．2和96．8±13．2μm·L-1，P＜0．05），而EMC显著低于对照组（分别为2．03±0．06和2．16±0．04mmol／L，P＜0．05）；（2）EH组的VNDmax与舒张压显著相关（r＝0．4872，P＜0．05）。结论：EH患者VNDmax明显升高，可能是造成EMC低下的原因，在疾病的发生和发展中起一定作用。

降低大鼠心肌梗死模型死亡率的方法

目的探讨降低大鼠心肌梗死模型死亡率的影响因素。方法结扎180只Wistar雄性大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型,分析麻醉药品、气管插管方法、结扎部位的高低及术后护理等因素对大鼠死亡率的影响,并取心脏组织行HE染色、氯化四唑(tetrazolium chloride,TTC)染色确认模型成功建立。结果水合氯醛麻醉死亡率15%,戊巴比妥钠麻醉死亡率35%,差异有统计学意义(P<0.05);经口气管插管大鼠死亡率10%,经气管切开插管死亡率29.4%,差异有统计学意义(P<0.05);有术后护理大鼠死亡率5.9%,无术后护理大鼠死亡率22.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。而结扎部位的不同对大鼠手术死亡率及手术成功率亦有明显的影响。结论本研究显示麻醉药品、气管插管方法、结扎部位的高低及术后护理等因素均对梗死模型的死亡率有影响,选择合适的麻醉药品和剂量以及气管插管方法,正确的结扎部位及适当的术后护理等可明显降低制作大鼠心肌梗死模型死亡率。

人脐血单个核细胞移植对大鼠急性心肌梗死后血管再生的作用

【目的】探讨人脐血单个核细胞移植对急性心肌梗死后血管再生的作用。【方法】雄性Wistar大鼠60只随机分为对照组(心肌梗死)和移植组(心肌梗死+细胞移植)各30只。结扎冠状动脉左前降支制作大鼠急性心肌梗死模型,以羟乙基淀粉沉淀加密度梯度离心的方法制备人脐血单个核细胞,并以5-溴脱氧尿核苷(BrdU)标记细胞。移植组大鼠模型制作成功后即在梗死区周边注射经分离并标记的人脐血单个核细胞混悬液(2×105/μL),在对照组相同位置注入等量达尔伯克必需培养基(DMEM)。移植4周后用左心导管检测血流动力学改变,并取心脏组织行抗第Ⅷ因子(vWF)和BrdU免疫组化染色,观察毛细血管密度、移植细胞成活情况。并分别在移植后第4天、第7天、第14天、第28天取梗死周边区组织作血管内皮生长因子(VEGF)RT-PCR的半定量研究。【结果】移植组移植的单个核细胞可在梗死心肌内存活。移植组比对照组心功能明显改善,左心室舒张末压(LVEDP)明显降低(21.08±8.10)mmHgvs(30.82±9.59)mmHg,P<0.05;左心室内压力最大上升速率(+dp/dtmax)明显增快(4.29±1.27)mmHg/msvs(3.24±0.75)mmHg/ms,P<0.05;最大下降速率(-dp/dtmax)亦显著提高(3.71±0.79)mmHg/msvs(3.00±0.49)mmHg/ms,P<0.05。移植组梗死区周边毛细血管数显著增加(5.7±0.3)/HPvs(2.3±0.4)/HP,P<0.01。VEGFmRNA表达在移植组于第7天明显增加,并持续至第28天,对照组于第4天及第7天可见少量表达,第14天与第28天明显减弱,两组差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】人脐血干细胞在未使用免疫抑制剂的条件下可成功移植到大鼠急性心肌梗死区,改善急性心肌梗死大鼠心功能,促进新生血管形成。

慢性增强体外反搏猪模型的建立

目的初步建立猪慢性体外反搏模型。方法12头猪,戊巴比妥钠(≤30mg/kg·b.w.)和速眠新Ⅱ(≤0.1ml/kg·b.w.)联合麻醉,取侧卧位,0.025～0.04MPa/cm2的压力进行反搏,2h/次,隔日1次,共计36h。结果所有动物均成功完成了反搏,联合应用戊巴比妥钠和速眠新Ⅱ取得了良好麻醉效果,减少了各自的用量,且对动物的脏器功能没有产生不良影响。结论成功建立了猪慢性体外反搏模型,在猪慢性体外反搏时我们推荐戊巴比妥钠与速眠新Ⅱ联合麻醉。

人脐血单个核细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能及左室重构的影响

背景:以往心肌梗死后心肌修复实验多集中于骨髓干细胞,甚少报道涉及富含造血干细胞、间充质干细胞及内皮祖细胞的脐血干细胞,而以其作为种子细胞的可行性及安全性尚未确定。目的:探讨人脐血单个核细胞移植对急性心肌梗死大鼠心功能和左室重构的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-11/2007-09在中山大学动物试验中心完成。材料:脐血来源于足月分娩的健康产妇,由中山大学附属第一医院产科提供。Wistar雄性大鼠45只,随机分为假手术组、模型组、细胞移植组,15只/组。方法:采用羟乙基淀粉沉淀联合ficoll-paque密度梯度离心法体外分离培养人脐血单个核细胞,移植前细胞行BrdU标记。模型组、细胞移植组大鼠结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,造模成功后,细胞移植组在梗死区周边注射脐血单个核细胞悬液,模型组注射DMEM培养基,培养4周。假手术组仅开胸并在左前降支下过线。主要观察指标:通过超声心动图评价心脏结构,以左心导管检测血流动力学改变,采用苏木精-伊红染色、Masson染色和BrdU免疫组化染色观察心肌组织病理学变化、心肌胶原含量变化及移植细胞存活情况。结果:与模型组比较,细胞移植组左室壁厚度增加,室壁活动度明显改善,左室舒张末期内径缩小,球形指数增大,左室舒张末压显著下降,左室内压最大上升/下降速率明显增快,差异均有显著性意义(P<0.05)。假手术组心肌细胞间仅见少量胶原纤维,呈条索状与心肌纤维平行排列;与模型组比较,细胞移植组心肌细胞肿胀程度及排列情况均有所改善,细胞移植组胶原容积分数明显降低(t=3.81,P=0.001)。模型组梗死区及其周边和假手术组均未检测到BrdU阳性细胞,细胞移植组胞核呈BrdU阳性的细胞散在分布于梗死区,部分阳性细胞参与到血管壁的组成。结论:在未使用免疫抑制剂的条件下,人脐血单个核细胞可成功移植到大鼠心肌梗死区,且短期内具有改善心功能、抑制梗死后心肌重构的作用。