抗SARS抗体独特型单链抗体的筛选及鉴定

目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(AId)。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000 bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。

武汉地区原发性高血压代谢综合征与CYP11B2-344T/C基因多态性关系的探讨

目的:探讨武汉地区原发性高血压(EH)代谢综合征(MS)与醛固酮合成酶(CYP11B2)基因-344C/T多态性的关系。方法:701例武汉地区汉族人群分为3组,其中血压正常对照组303例,EH伴MS组189例,EH不伴MS组209例。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测3组人群CYP11B2-344T/C基因多态性。结果:(1)EH不伴MS组CYP11B2基因CC+TC基因型频率明显高于血压正常对照组。(2)CYP11B2TT基因型EH伴MS组的血压水平明显高于其它基因型。结论:EH不伴MS与CYP11B2基因多态性相关;EH伴MS患者血压水平与CYP11B2基因TT基因型明显相关。

冠心病患者血清同型半胱氨酸及超敏C反应蛋白的检测

目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、B型脑钠肽（BNP）等心肌指标与冠心病（CHD）的关系。方法测定180例CHD患者,男115例,女65例,年龄41-75岁,平均（54.2±9.0）岁,其中心肌梗死（AMI）58例,不稳定型心绞痛（UAP）62例,稳定型心绞痛（SAP）60例;健康体检者40例,男20例,女20例,平均年龄（52.3±8.8）岁。生化常规检测心肌标志物肌钙蛋白I、肌红蛋白、Hcy、hs-CRP、BNP等相关指标。结果 CHD患者Hcy、hs-CRP、BNP及相关心肌标志物明显高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）,而AMI组、UAP组明显高于SAP组,差异也有统计学意义（P〈0.01）。结论对CHD患者进行Hcy、hs-CRP、BNP的有效监测,将有助于了解病程,并进行有效控制。

Graves病患者血清细胞因子水平和甲状腺功能指标的检测分析

目的:探讨弥漫性毒性甲状腺肿(GravesDisease,GD)对人体血清白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF)水平的影响。方法:采用放射免疫技术,检测135例GD患者治疗前后的IL-2、IL-8、TNF水平。结果:GD治疗前IL-2水平均低于治疗后和正常对照组,而IL-8、TNF水平在治疗后降低,且组间比较具有显著性意义(P<0.01)。对GD未治疗组血清中IL-2、IL-8、TNF与FT3、FT4、TSH进行相关性分析,结果显示IL-2与FT3、FT4呈显著负相关(P均<0.01);IL-8、TNF与FT3、FT4、TSH均无相关性(P均>0.05)。结论:IL-2、IL-8、TNF参与GD的发生与发展过程,与GD的免疫紊乱与功能状态异常间存在十分重要的内在联系。

抗人转铁蛋白受体单克隆抗体体外抗瘤效应研究

目的:探讨抗人转铁蛋白受体(TfR)单克隆抗体(mAb)体外抗瘤效应。方法:采用CFSE染色、PI-AnnexinⅤ染色和PI染色,通过流式细胞术分析抗人TfR mAb对高表达的人肝癌细胞系HepG2和人乳腺癌细胞系MCF-7增殖、凋亡和周期的影响;通过MTT法检测抗人TfR mAb联合化疗药物对HepG2和MCF-7细胞增殖的抑制作用。结果:抗人TfRmAb能抑制HepG2和MCF-7细胞的增殖,并诱导其凋亡和S期阻滞;与化疗药物联用可增强其对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结论:抗人TfR mAb具有良好的体外抗瘤效应。

CD4^+CD25^+调节性T细胞移植对自身免疫性脑脊髓膜炎大鼠的保护作用

目的观察输注CD4^+CD25^+调节性T细胞对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)模型大鼠后脑和脊髓组织的保护作用及相关机制。方法取SD大鼠30只,随机均分为空白对照组、模型组(实验性自身免疫性脑脊髓炎模型)和实验组(CD4^+CD25^+调节性T细胞输注),对EAE大鼠进行神经功能评分及体质量测量,通过病理学HE染色和免疫组化观察脑和脊髓炎症浸润,实时荧光定量PCR(qPCR)检测鼠脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23和Foxp3 m RNA水平表达。结果实验组SD大鼠神经功能评分明显改善,体质量明显增加;与模型组比较,实验组神经症状和病理改变减轻,鼠脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23 mRNA表达下降,而Foxp3 mRNA表达增加(P<0.05)。结论 CD4^+CD25^+调节性T细胞通过调节免疫系统的脑和脊髓IFN-γ、IL-17、IL-23和Foxp3 mRNA水平的表达对EAE起保护作用。

胭脂红酸人工抗原合成及多克隆抗体的制备

为了快速高效检测食品中胭脂红酸含量,本研究通过羟基二咪唑法制备了胭脂红酸人工抗原;通过免疫新西兰大耳白兔获得了胭脂红酸抗血清,经硫酸铵沉淀法分离纯化获得抗胭脂红酸多克隆抗体;利用棋盘滴定法检测了抗体效价,并探究了溶液pH值、离子强度和有机溶剂对ELISA反应的影响,优化出最佳ELISA反应条件;在最佳反应条件下,建立了胭脂红酸的间接竞争ELISA抑制曲线。紫外光谱扫描结果显示,免疫抗原(CA-BSA)和检测抗原(CA-OVA)均与载体蛋白成功偶联;经分离纯化获得的胭脂红酸多克隆抗体效价为1:16000;检测抗原最佳浓度为1μg/m L、ELISA反应最适缓冲液为pH7.4、含50mmol/L Na^+且无甲醇的磷酸盐缓冲液;间接竞争ELISA标准曲线的线性范围为7.8～1150ng/mL,检测限为1ng/mL,灵敏度IC_(50)值为95.2ng/mL。本研究为开发CA快速检测试剂盒对食品中胭脂红酸含量的大量快速测定奠定了基础。

胭脂红酸ELISA检测试剂盒的制备及应用

为了快速高效检测肉类食品中胭脂红酸含量,制备了胭脂红酸ELISA检测试剂盒,检测了市售肉类样品中胭脂红酸含量,并通过高效液相色谱法进行了验证。结果显示试剂盒的检测限为1 ng/mL,线性范围7.8~1 150 ng/mL,灵敏度IC50值为95.2 ng/mL;该试剂盒中的检测抗体对胭脂红的交叉反应率为108.7%,但与其他4种色素添加剂均未见交叉反应。检测市售肉类样品的批内回收率在79.1%~103.1%之间,批间回收率在81.6%~98.8%之间;批内、批间试验的相对标准偏差基本小于10%,且与HPLC方法具有良好的一致性(R2=0.927),说明该试剂盒具有灵敏、准确、简便、快速的特点,为胭脂红酸免疫学快速检测方法的建立提供了技术基础。

ACEI/D基因多态性与武汉地区原发性高血压代谢综合征关系的探讨

目的:探讨武汉地区原发性高血压(EH)代谢综合征(MS)与血管紧张素转换酶(ACE)基因插入/缺失(I/D)多态性的关系。方法:701例武汉地区汉族人群分为3组,其中血压正常对照组303人,EH患者398例,其中EH患者中符合代谢综合征者189例,不伴随代谢综合组209例。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法测定3组人群中ACEI/D基因多态性。结果:①ACE各基因型频率在正常对照组与EH(包括MS与非MS组)组间差异无统计学意义;②ACEII基因型EH合并MS患者的胆固醇水平明显高于DD基因型。结论:ACE基因多态性与武汉地区原发性高血压无关,但D等位基因频率明显低于某些西方国家人群;对于EH合并代谢综合征的患者,其胆固醇水平和ACEII基因型明显相关。

武汉地区成人代谢综合征患病率及相关因素

对参加健康体检的武汉市区成年居民2057人的资料进行了分析,以了解武汉地区部分20岁以上人群代谢综合征的患病率及与部分相关因素的关系,结果表明代谢综合征的总患病率为10．74%,其中男性患病率为13．47%,女性患病率为4．99%。代谢综合征的患病率随血甘油三酯、血尿酸、胰岛素抵抗指数和年龄的增加而增加。

人IL-35单克隆抗体制备及其在定量ELISA检测方法中的应用

为了建立人白细胞介素-35 (IL-35)的定量ELISA检测方法,RT-PCR克隆了人IL-35的IL-27EBI3亚基和IL-12p35亚基的编码基因,在大肠杆菌中实现了2个亚基的高效表达。以大肠杆菌表达的IL-27EBI3和IL-12p35重组蛋白作为免疫原,免疫BaLb/c小鼠,选取阳性血清小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选和克隆,获得了稳定分泌抗IL-27EBI3和抗IL-12p35单克隆抗体的杂交瘤细胞株。在效价测定和特异性鉴定的基础上,进一步筛选出一株能稳定分泌抗IL-27EBI3单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B11和一株能稳定分泌抗IL-12p35单克隆抗体杂交瘤细胞株3A10,亚类鉴定两株单抗均为IgG1。应用单抗3B11和3A10建立了IL-35双抗夹心定量ELISA检测方法,借助生物素-亲和素放大效应,该方法检测IL-35线性范围为3.12–200pg/mL,最低检测限为1.26pg/mL,与多种其他抗原的交叉反应率为0.1%,批内相对标准偏差(RSD)为5.1%–5.6%,批间RSD为5.6%–7.2%,添加回收率为89%–103%,达到定量分析的要求,为进一步组装IL-35定量ELISA检测试剂盒打下了基础。