鸭坦布苏病毒病灭活疫苗生产工艺的优化研究

为提升鸭坦布苏病毒病灭活疫苗的产品质量,在全悬浮培养工艺生产病毒液的基础上,对病毒纯化工艺和佐剂进行研究。试验结果显示,采用新纯化工艺,通过深层过滤和超滤的方式处理抗原,抗原损失不超过0.2个滴度,抗原总蛋白下降到0.50mg/mL以下,有效去除80%以上杂蛋白;采用2种油佐剂(佐剂A和佐剂B)和1种水性佐剂(佐剂C)进行试验,佐剂B疫苗单次免疫后21日鸭坦布苏病毒HI抗体几何平均值达1∶320,攻毒保护率达10/10;进口佐剂B为优选佐剂,安全性和免疫效果均表现良好。

猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗耐热保护技术的研究

疫苗保护剂及其冻干工艺是影响疫苗效果的重要因素,对疫苗保存、运输及免疫效果有很大影响。为提高疫苗质量,在常规保护剂(明胶、蔗糖)基础上添加卡波姆、聚乙二醇和聚乙烯吡咯烷酮等基质,组成新型保护剂,分别在病毒液保存和疫苗冻干过程添加,并评价其病毒保护效果。结果表明:在半成品病毒液储存时加入10%新型保护剂,可使半成品保存期由原来的2个月延长至12个月。采用新型保护剂制备的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗,溶解性显著优于常规保护剂活疫苗,保存期由原来-20℃保存18个月提高到2~8℃保存36个月,且病毒活性及攻毒保护效力均优于原工艺产品,实现了储运过程中疫苗的冷藏储运,提升了疫苗的应用效果。

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗冻干工艺研究

为提高鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗生产效率,该试验对冻干保护剂组方、冻干参数和冻干曲线进行优化研究。试验结果显示:优选工艺制备的疫苗冻干损失及37℃10d耐老化损失均在0.3个滴度以内,并且冻干时缩短17h,因此,优选工艺制备的鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗热稳定性较好、生产效率较高。

实验性鸭肿头病败血症病理研究

近年来，四川、重庆、云南、贵州等地出现了一种具有发病急、传播快、死亡率高等特点的一种新型、烈性鸭病毒性传染病，各种年龄、各种品种鸭均易感，发病率和死亡率均可达80％以上，以肿头、全身败血为主要特征。试验人工感染鸭肿头败血症病毒，观察其临床症状、各器官的病理组织变化，现报道如下：

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)安全和效力的临床评价

为进一步了解鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)在生产中的使用效果,我们对该产品的临床安全和效力进行了评价。临床试验结果表明,鸭坦布苏病毒病灭活疫苗安全且有效。试验分为两个处理组:1)安全试验组,免疫后21d注射部位疫苗无残留,且该疫苗免疫对雏鸭体重、种鸭的产蛋率和孵化率均无明显影响;2)效力试验组,免疫鸭的ELISA抗体免疫后14d开始转阳,免疫后28d、60d、90d、120d和135d的阳性率均不低于90%。免疫后28d和135d的攻毒保护率均不低于80%。

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗生产工艺的研究

本研究对鸭坦布苏病毒灭活疫苗HB株生产工艺进行了筛选,通过不同接毒量和不同收获时间等相关试验,优化了规模化生产工艺,即鸭胚成纤维细胞按体积分数0.5%接种DTMUV HB株毒种,接毒后84h收获病毒液,收获毒液病毒含量达10^(7.1)TCID_(50)/0.1ml。

鸭出血性卵巢炎实验感染模型的建立

【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21、28、34 d采血和剖检鸭,应用固定病毒稀释血清的方法测定血清中和抗体,取卵泡膜、肝脏、脾脏和脑组织进行病毒分离,对主要组织脏器进行病理学检查。【结果】攻毒后3、4、5d采食量均显著下降(下降80%),6d采食量恢复至约正常量的50%,11d恢复到正常水平;攻毒后3、4、5d产蛋量出现明显下降,6、7、8d鸭群未见产蛋,36d发病鸭群的产蛋率恢复到60%,39d鸭群的产蛋率达到80%。攻毒后5d 3只(3/3)鸭的卵泡膜和肝脏均可以分离到病毒,7d 2只(2/2)鸭的卵泡膜中均分离到病毒,1只鸭(1/2)脾脏和脑组织中均分离到病毒,9d 1只鸭(1/2)的卵泡膜中分离到病毒,21d和28d卵泡膜病毒分离结果均为阴性。感染鸭的卵巢变性、变形,卵泡膜充血、出血;卵巢、肝脏、脑、脾等组织和脏器均出现以网状细胞(巨噬细胞)增生为主的病理变化,表现为急性出血性卵巢炎、间质性肝炎、非化脓性脑炎、坏死性脾炎、间质性肾炎和轻度的心肌炎。感染后3周可检测出低效价的中和抗体。【结论】实验感染鸭出血性卵巢炎病毒后可引起急性出血性卵巢炎,利用产蛋北京鸭建立的鸭出血性卵巢炎模型,可用于评价抗病毒药物和疫苗的研究。

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫产生期和持续期的试验

评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫16日龄北京鸭的效力、免疫产生期和持续期。利用实验室制备的3批鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(201401、201402和201403批),以0.5 mL/只的剂量分别经肌肉或皮下注射途径免疫16日龄DTMUV抗体阴性北京鸭,首次免疫后14 d按照同样的剂量和途径进行二次免疫。分别于首免后14 d,二次免疫后7、14、42、60d和100 d采血分离血清,用ELISA方法检测抗体。采血后以0.5 mL/只含500 DID50的剂量经胸部肌肉注射鸭坦布苏病毒进行攻毒,攻毒后2 d采血,分离血清进行病毒分离。3个批次疫苗免疫16日龄北京鸭,二次免疫后7 d均可检测到血清抗体,至60 d检测时抗体阳性率在80%以上。三批疫苗二次免疫后7 d即对试验鸭产生保护,保护率可达到60%以上,其中皮下注射途径的免疫持续期为60 d,肌肉注射途径的免疫持续期为100 d。鸭坦布苏病毒病灭活疫苗对16日龄北京鸭采用二次免疫的程序可获得良好的保护效果,胸部肌肉注射途径优于皮下注射途径。

鸭坦布苏病毒病卵巢病变标准的判定

【目的】了解产蛋鸭感染鸭坦布苏病毒后卵巢病变产生的进程和卵巢病变规律,为采用产蛋鸭卵巢病理变化检查法进行疫苗效力检验提供依据。【方法】70只260日龄产蛋樱桃谷鸭,以0.5m L/只(含100DID50)的剂量经胸部肌肉接种鸭坦布苏病毒(HB株)强毒。观察试验鸭的临床症状,统计每日产蛋数和采食量。攻毒后2 d,每只鸭经翅静脉采血,分离血清,经卵黄囊途径接种5枚6日龄SPF鸡胚,每胚0.1m L。接种后置37℃条件下继续孵化,24 h死亡鸡胚弃去。采用RT-PCR方法测定24—72 h死亡鸡胚的DTMUV核酸,将1/5或以上鸡胚死亡且DTMUV核酸阳性的鸭判为DTMUV感染鸭。攻毒后4—10 d,每日剖杀10只鸭,观察和分析生殖系统病变。统计病变率,检查输卵管内是否有蛋,卵泡是否变形、出血和破裂,依据病变率和病变,确定检查内容和病变卵巢的判定时间和标准。【结果】(1)攻毒后3、4、5、6 d,鸭几乎不采食,产蛋数明显下降。攻毒后7 d,鸭精神状况好转;攻毒后8 d,采食量开始回升。(2)70只鸭中,除1只鸭的病毒分离结果为阴性外,其余69只鸭的病毒分离结果均为阳性,病毒分离阳性率为98.6%(69/70)。(3)攻毒后4—10 d,共64只产蛋期鸭的生殖器官可以判定。(4)攻毒后4、5、6、7、8、9和10 d,卵巢病变率分别为66.7%(6/9)、100%(10/10)、100%(10/10)、100%(9/9)、100%(9/9)、100%(9/9)和100%(8/8)。(5)除攻毒后4 d有2只鸭输卵管中有蛋外,其余62只鸭输卵管中均无蛋,无蛋率为96.9%(62/64)。(6)攻毒后4—10 d,96.9%(62/64)鸭的卵泡变形,96.9%(62/64)鸭的卵泡出血,95.3%(61/64)鸭的卵泡变形和出血,34.4%(22/64)卵泡破裂。【结论】(1)确定卵巢病理变化检查时间为攻毒后7—8 d;(2)具有变形或出血病变之一,判病变卵泡。输卵管内无蛋且有3个及以上病变卵泡,判为病变卵巢。

鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的初步应用

为了开发鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒,研究利用灭活纯化的鸭坦布苏病毒(DTMUV)FX2010株作为包被抗原,由瑞普(保定)生物药业有限公司连续制备了5批次鸭坦布苏病毒间接ELISA抗体检测试剂盒中试产品。该试剂盒对禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭细小病毒、Ⅰ型鸭肝炎病毒、鸭呼肠孤病毒阳性血清和5份SPF阴性质控血清进行的检测均无交叉反应,表明具有较好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数为1.5%~4.2%和2.2%~5.3%,表明产品具有很好的稳定性。应用该试剂盒及中和试验对300份疑似DTMUV阳性血清样品进行检测,结果显示:二者阳性样品符合率为90.12%,阴性样品符合率为93.6%,总符合率为92.7%。研究结果表明,该试剂盒具有操作简便、敏感性高和特异性强的特点,可以为鸭坦布苏病毒病的快速诊断及其流行病学调查提供有力的工具。

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响。结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显。但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果。另外,25℃、2~8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求。因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2~8℃下长期保存。

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测方法的建立

为了提高鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒活疫苗毒价检测效率,本试验尝试建立了一种不添加琼脂的蚀斑计数法。分析了影响蚀斑测定的因素,确定了细胞最佳接种密度为1.0×106个/m L,病毒液的稀释倍数为1×104和5×104,蚀斑计数时间为接毒后4 d。该方法操作简单,测定条件均一,可控性强,批间误差小,缩短了鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒毒价的测定周期。

狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒的初步应用

以灭活纯化的狂犬病毒SRV9株作为包被抗原，制备了5批次狂犬病毒ELISA抗体检测试剂盒中试产品。与FAVN法、商品化进口试剂盒相比，该试剂盒与二者总符合率为90.80%和94.25%，且敏感性较高。5批次试剂盒批内变异系数为1.47%~8.34%，批间变异系数为2.05%~8.64%，说明该试剂盒重复性良好，可用于血清中狂犬病毒抗体常规检测。

一株鸡传染性喉气管炎病毒的分离鉴定

从山西省大同市某养鸡场采集临床疑似鸡传染性喉气管炎的病鸡喉头气管,接种鸡胚绒毛尿囊膜分离病毒,获得6株分离毒,经PCR鉴定为传染性喉气管炎病毒,血凝试验结果显示3株有血凝性,剩余3株经常见外源病毒PCR检测,结果显示1株无常见外源。以分离毒人工感染SPF鸡,于攻毒后3d出现传染性喉气管炎的典型临床症状,剖检亦可见喉头气管黏膜岀血,气管中大量黏液渗出等病理变化,且从发病鸡的喉头内重新分离到鸡传染性喉气管炎病毒。

鸡传染性支气管炎活疫苗生产工艺研究

鸡传染性支气管炎（ Infectious bronchitis,IB） 是由冠状病毒科冠状病毒属的传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种急性﹑高度接触性传染病,给养禽业带来巨大的经济损失,疫苗免疫是防控该病的有效手段。本文对可能影响鸡传染性支气管炎活疫苗毒液效价的几个主要生产工艺参数进行优化试验,以期提高批次间毒液效价稳定性,

猪细小病毒病灭活疫苗的安全性和抗体消长规律的研究

猪细小病毒病是由细小病毒科猪细小病毒（PPV）感染猪引起的胚胎感染及死亡，而母猪并不表现明显症状的猪繁殖障碍性疾病。妊娠前期的母猪易感染，主要引起母猪流产、胎儿死亡、胎儿畸形、木乃伊胎、弱胎及不孕等，同时还可引起仔猪发生皮炎和腹泻，与猪圆环病毒协同感染是导致断奶仔猪多系统衰竭综合症的主要原因之一。

猪瘟耐热保护剂活疫苗生产工艺研究

一、实验材料1.种毒。猪瘟兔化弱毒株购自中国兽医药品监察所。2.毒液。按2000年版《兽用生物制品规程》（以下简称《规程》）载“猪瘟活疫苗制造及检验规程（I）”方法制备毒液，病毒效价不低于105RID/ml。3.保护剂。耐热保护剂以甘氨酸、蔗糖和聚乙烯吡咯烷酮为基础，优选制备。4.对照疫苗。按《规程》生产常规的猪瘟活疫苗，批号S2017。5.实验动物。效检用兔为健康大耳白兔，体重1.5～2.5 kg；试验猪，3月龄，体重约3.5 kg，选购自河北顺平某村，经检验无猪瘟中和抗体。

猪瘟活疫苗的品质提升研究

为了提高猪瘟活疫苗的产品质量,本研究采用改良保护剂分别与猪瘟组织毒和猪瘟细胞毒进行冻干试验,成功试制2种猪瘟活疫苗。试制的2种猪瘟活疫苗,性状和溶解情况良好,室温保存2 d和溶解后室温放置4 h对产品效价变化不明显,均达到规程标准要求。

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒概述

在研究与分析我国近年来犬狂犬病流行情况、疫苗使用现状和市场需求等诸多因素的基础上,瑞普生物与浙江大学再次合作,成功研制出犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒-“锐清”。该产品是农业部批准的三类新兽药【《新兽药注册证书》证号：（2016）新兽药证字71号】,已获得农业部核发的兽药生产批准文号【兽药生字030388829】,目前已成功上市。

鸡新城疫活疫苗稀释后室温放置不同时间对疫苗效价的影响

为了指导临床上正确使用鸡新城疫活疫苗，我们选择普通的牛奶蔗糖保护剂和耐热保护剂冻干的两种疫苗，分别用稀释液溶解后，在室温放置不同时间，检测疫苗效价。结果显示室温存放时间对牛奶蔗糖保护剂冻干的疫苗影响较大，对耐热保护剂冻干的疫苗影响较小。