荧光定量RT-PCR快速检测B型流感病毒的研究

目的:利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测B型流感病毒的方法。方法:根据B型流感病毒HA基因的相对保守序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立相对定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与普通RT-PCR法进行比较。结果:B型流感病毒检测反应的灵敏度为5.0×10-6TCID50,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为107.8%,5种非B型流感病毒病原体检测均为阴性,说明此方法具有很好的稳定性、重现性和特异性。结论:本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测B型流感病毒,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。

深圳市首例人感染H5N1病毒病例的实验室诊断及分子特点分析

对深圳首例疑似人禽流感病人的标本,进行了RT-PCR、Real-timePCR检测及病毒分离培养、血清中和试验、抗原比检测及发病早期不同病程多份标本的病毒载量分析;对分离物进行了HA基因、NA基因及M基因的核酸检测。结果表明:患者气管吸出物的H5N1亚型和A型流感病毒的特异核酸均呈阳性,并通过细胞培养分离到禽流感病毒A/Guangdong/2/06(H5N1)株。气管吸取物病毒载量随着病程延长逐渐减少,而血清中和抗体水平逐渐上升达到1:160之后又缓缓下降。A/Guangdong/2/06株8个片段的核苷酸序列显示,其与2005～2006年中国南部的禽流感分离株高度同源,与越南、泰国、印度尼西亚等分离到的禽流感分离株存在明显的差异。

深圳市2010年从业人员健康体检质量分析

目的分析深圳市2010年从业人员健康体检结果,发现存在的问题,为从业人员健康体检工作的可持续发展提供参考依据。方法分析深圳市2010年从业人员健康体检中伤寒、痢疾、活动性肺结核和化脓性或渗出性皮肤病的检出率,采用SAS 8.1进行χ2检验。结果共有784 711名从业人员进行了健康体检,2680人患有上述疾病,检出率为34.15/万人,其中活动性肺结核654人,检出率为8.33/万人;化脓性或渗出性皮肤病1690人,检出率为21.54/万人;痢疾187人,检出率为2.38/万人;伤寒149人,检出率为1.90/万人。不同地区(χ2=713.22,P<0.01)、不同病种(χ2=1123.57,P<0.01)和不同机构(χ2=61.70,P<0.01)之间的4种传染病检出率的差异均具有统计学意义。结论深圳市的从业人员健康体检机构发展不平衡,肠道致病菌的检出率普遍较低,需进一步加强。

深圳市一般人群HGV和TTV感染的研究

为探讨深圳市一般人群中HGV和TTV感染状况及其影响因素。方法采用随机抽样法选取研究对象 ,对HGV感染的检测先用ELISA法检测样本中的抗 -HGV ,对其中阳性样本再用反转录PCR(RT -PCR)进行检测 ;TTVDNA则采用巢式PCR方法检测。结果表明 ,深圳市一般人群中HGVRNA和TTVDNA阳性率分别为 2 33%和 14 77% ,男女阳性率HGVRNA为 2 4 5%和2 2 0 % ,TTVDNA阳性率为 17 86%和 12 0 %。年龄组间HGVRNA及TTVDNA阳性率差异均无显著性 ;单因素和Logistic回归分析未显示肝炎病史、近期手术史、注射史、拔牙史及乙型肝炎疫苗接种史等因素与HGV及TTV感染有关 ;HBsAg、抗 -HBS和抗 -HBc与HGV及TTV感染无统计学意义。不同职业人群中HGVRNA阳性率以中学生和教师较高 ;TTVDNA阳性率则以税务干部和教师高于其他人群 ,因此证明 ,深圳市一般人群中HGV和TTV感染率较高 。

深圳市不同人群和鸡群感染禽流感病毒H9N2亚型状况研究

目的分析禽流感病毒H9N2亚型毒株在深圳市不同人群和鸡群中的感染状况。方法采用常规的鸡胚双腔法分离流感病毒;采用红细胞凝集抑制试验(HI)和中和试验测定流感病毒抗体。结果从深圳市农贸市场300只鸡只样本中分离到27株H9N2亚型流感病毒,其抗体阳性率为7%,但未能从人群中分离到H9N2亚型流感病毒。人群血清中其抗体阳性率与职业高度相关,与鸡只密切接触的人群明显高于非密切接触的人群。结论禽流感病毒H9N2亚型对人群和鸡群均易感,可通过近距离的密切接触传播;推测人所感染的H9N2可能主要来源于鸡只等家禽。

不同动物SARS病毒携带状况的研究

目的 通过对与人类生活密切相关的多种野生、驯化和圈养动物携带SARS样病毒状况的研究 ,比较与野生动物密切接触人群和健康人群SARS病毒感染率 ,研究探索SARS病毒的来源。 方法 于 2 0 0 3年 5月起在广东等7个省自治区调查并采集动物咽漱液、鼻拭子和肛拭子样本 ,进行细胞培养、IFA、荧光RT -PCR检测 ;分析不同动物携带SARS样病毒状况。 结果 2 0 0只动物样本检出 10只动物携带SARS样病毒 ,其中主要是果子狸 (9只、阳性率为7 96% )。 1740名人员血清的SARSIgG抗体总阳性率为 5 0 6% ,其中野生动物销售人员最高 (4 5 45 % ) 结论 研究结果支持SARS病毒来源于动物 (果子狸 )的假设 ,并推测SARS病毒能从动物传播给人类。

HIV感染者的免疫学功能变化及其与病程发展的关系

目的 分析HIV感染者/AIDS病人体内病毒复制和免疫功能变化及其与病程发展的关系。方法 应用定量RT-PCR、流式细胞计数和定量ELISA 方法分析55例HIV感染者（n=42）和AIDS病人（n=13）外周血血浆病毒载量、T淋巴细胞亚群和细胞因子浓度。结果 HIV感染者和 AIDS病人CD4细胞和血浆IL-2浓度低于正常人群（P<0.001）,血浆 sIL-2R、TNF-α、NPT浓度高于正常人群（P<0.01）;AIDS病人CD4细胞和IL-2浓度明显低于HIV感染者（P<0.001）,而血浆病毒载量、sIL、-2R、TNF-α、sTNFR-I、NPT浓度明显高于HIV感染者（P<0.01）,且随着CD4细胞水平降低呈明显上升趋势。CD4细胞、CD4/CD8比值和血浆IL-2水平随感染时间延长而不断下降,不同感染时间之间差异明显;机体感染HIV后CD4细胞年平均下降43/mm3,血浆sIL-2R、sTNFR-I、NPT年平均上升幅度分别为59.03pg/ml、38.69pg/ml、2.11ng/ml。各因素相关性分析显示:CD4细胞、CD4/CD8比值与感染时间,CD3、CD4、CD8细胞变化分别与血浆病毒载量、sTNFR-I、NPT之间有高度负直线相关性;而血浆sIL-2R分别与IL-6（P<0.001）、IL-10（P<0.001）、TNF-α（P<0.001）、sTNFR-I（P<0.005）、NPT（P<0.002）浓度变化间,以及IL-6与TNF-α（P<0.001）、NPT与IL-10（P<0.05）和 sTNFR-I（P<0.001）,?

深圳市一般人群庚型肝炎病毒感染状况分析

目的 探讨深圳市一般人群中庚型肝炎病毒 (HGV)感染情况及其影响因素。方法 采用随机抽样法选取研究对象 ,并用酶联免疫反应法 (ELISA)检测该人群中抗 -HGV抗体 ,对其中抗体阳性者用逆转录PCR(RT -PCR)检测血清中HGVRNA。结果 一般人群中抗 -HGV阳性率为 9 33% ,HGVRNA阳性率为 2 33% ,男女HGVRNA阳性率分别为 2 4 5 %和 2 2 0 % ,年龄组间HGVRNA阳性率差异无显著性 ;单因素和logistic回归分析未显示肝炎病史、近期手术史、注射史、拔牙史及乙型肝炎疫苗接种史等因素与HGV感染有关 ,HBsAg、抗 -HBs和抗 -HBc与HGV感染无统计学意义。不同职业人员中以中学生及教师的HGVRNA阳性率较高。结论 深圳市一般人群中HGV感染率较高 。

A型流感病毒NP基因核酸疫苗的构建与体外表达鉴定

目的构建A型流感病毒核蛋白核酸疫苗,研究核酸疫苗主动免疫保护效应。方法从A型流感病毒逆转录获得NP基因,与表达载体pSECTAG2HygroA构建核酸疫苗,采用脂质体转染法转染VERO细胞,经ELISA鉴定,A型流感病毒NP基因核酸疫苗在VERO细胞中得到了表达。结果结果显示,在转染后36h得到最大化表达,其A450达到0.382。在36到60h时间范围内,NP蛋白表达量基本没有变化(在48h和60h的A450分别为0.385和0.387)。结论成功构建了A型流感病毒核蛋白核酸疫苗,为进一步研究该疫苗体内实验奠定了基础。

荧光定量RT-PCR快速检测人副流感病毒3型的研究

[目的]利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测人副流感病毒3型的方法。[方法]根据人副流感病毒3型NP基因的相对保守序列分别设计一对引物及Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的细胞培养法进行比较。[结果]人副流感病毒3型检测反应的灵敏度为0.016TCID50,标准曲线相关系数为1.00,扩增效率为89.8%,6种非人副流感病毒3型病原体检测均为阴性,说明此方法具有很高的准确性、稳定性和特异性。[结论]本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测人副流感病毒3型,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测。

深圳市人群庚型肝炎病毒感染状况调查

目的 探讨深圳市一般人群中庚型肝炎病毒 (HGV)感染情况及其影响因素。 方法 随机抽取研究对象 ,用酶联免疫反应法 (ELISA)检测该人群中抗 -HGV ,对阳性者用逆转录PCR(RT -PCR)检测血清中HGVRNA。 结果 抗 -HGV阳性率为 9 33%。男女分别为 9 5 1%和 9 13% ;HGVRNA阳性率为 2 33% ,男女分别为 2 45 %和 2 2 0 % ,年龄组间抗 -HGV和HGVRNA阳性率差异均无显著性 ;单因素和logistic回归分析未显示肝炎病史、近期手术史、注射史、拔牙史及乙型肝炎疫苗接种史等因素与HGV感染有关 ;职业人员中以中学生及教师的HGVRNA阳性率较高。 结论 深圳市一般人群中HGV感染率较高 ,但其流行因素尚待进一步研究。

登革病毒实时荧光PCR快速检测技术研究

目的建立TaqmanMGB实时荧光PCR技术快速检测登革病毒。方法利用TaqmanMGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对8份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧光PCR扩增。结果RT-PCR检测8份临床血清标本，2份阳性，阳性率为25％。实时荧光PCR检测登革病毒cDNA灵敏度为0．17pg／μl，病毒液灵敏度为10^-5TCID50与乙脑病毒无交叉反应，检测8份临床血清标本，5份阳性，阳性率为62．5％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论TaqmanMGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。

深圳市流行性感冒监测参考线的设计及预警应用

目的为科学有效地预警流行性感冒(流感)的爆发和流行,制定符合深圳市的流感监测基线和警戒曲线。方法收集深圳市第一人民医院、深圳市妇幼保健院2003-2006年的流感监测资料,以周为单位,对流感样病例百分比IL(I%)进行统计分析,以确定基线和警戒曲线。结果深圳市流感监测结果可靠,基线值为5.95%,警戒曲线具有较好的灵敏度和季节性,能及时发现异常值。结论深圳市的流感监测参考线具有较好的灵敏性和季节性,能起到一定预警作用。

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的研究乙肝血清学标志物(HBV-M)结果与HBV-DNA水平的关系,分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1 781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1 102例HBV-DNA阳性。其中883例1.3.5阳性(俗称“大三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为96.15%;722例1.4.5阳性(俗称“小三阳”)血清中HBV-DNA的阳性率为24.38%;138例1.5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38.41%;22例1.3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90.91%;11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36.36%。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法,能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度;HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。

深圳市首例人禽流感病例流行病学调查报道

目的调查深圳市首例人感染高致病性禽流感病例流行病学,探索无动物禽流感暴露史情况下的可能感染源,为进一步认识与防治禽流感提供科学依据。方法用描述流行病学、荧光定量PCR、ELISA、RT-PCR和应急监测等方法进行调查、诊断。结果发现深圳市首例人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例,无明确病死禽接触史,密切接触者中无不明原因肺炎病例,未发现人-人传播证据。结论深圳市首例人感染高致病性禽流感病例属感染个案,非人传人的病例,感染来源可能与农贸市场环境有关。

硒对铅毒性拮抗作用的研究进展

铅是环境中重要的重金属污染物,对人体的各个系统均能产生毒性和损伤。硒是人体必需的微量元素之一,大量研究表明,硒与铅存在着相互拮抗作用。硒和铅在动物或人体内的含量呈负相关,硒不仅能够拮抗铅的吸收和蓄积,促进铅的排泄,还能拮抗铅导致的机体各组织和细胞的氧化应激和免疫损伤、神经系统毒性、听力损伤、遗传和生殖毒性、肝肾毒性、DNA损伤等毒性作用。本文从上述几方面综述了近年来硒对铅毒性拮抗作用的研究进展。硒在人体内发挥生理作用主要通过硒蛋白实现,本文还阐述了硒拮抗铅毒性的作用与硒蛋白的关系方面的研究进展。尽管如此,硒拮抗铅毒性作用的研究机制仍然不明确。此外,硒对人体的营养必需剂量和毒性剂量之间的范围非常窄,因此,研究硒对人体健康的保护作用的剂量效应关系是实施科学补硒的前提和基础。

应用RT-PCR方法检测人与动物的SARS冠状病毒

目的选择合适的RTPCR检测方法应用于人和与人类生活密切相关的多种野生、圈养和市售动物携带SARS样冠状病毒的检测,探索SARS样病毒的来源。方法收集深圳SARS临床诊断病例、疑似及观察病例咽漱液标本共350份,分别用TaqMan和分子信标荧光RTPCR法进行检测;收集386只动物的咽肛拭子样本及病毒分离培养物共442份样品进行了TaqMan荧光RTPCR和普通RTPCR法的检测。结果41例临床确诊病例荧光RTPCR法检出10份阳性,阳性率24.39%,TaqMan法和分子信标法检出结果8份符合(符合率88.89%)。对动物样本病毒分离培养物细胞病变样本18份进行检测,检出16份阳性,其中14份(87.5%)样本来源为果子狸。深圳东门市场及广东周边地区市场及养殖场动物样本检测结果:果子狸、貉及獾类动物总的阳性率为39.02%,而其它动物的阳性率为0,两者间差异具有显著性(P<0.01);对东门市场109只主要野生动物咽肛拭子样本进行PCR检测,阳性率44.04%,而145只野外的野生动物阳性率仅为0(P<0.01)。结论TaqMan法和分子信标法均可用于SARS检测;动物中尤其是果子狸等野生动物可能携带有SARS冠状病毒。

深圳市2006年流行性感冒流行特征分析

目的了解深圳市流感流行动态,探索流行规律,为流感的防治提供科学依据。方法每周统计监测点流感样病例(ILI)数据,采集ILI鼻咽拭子标本,用鸡胚和MDCK细胞同时进行流感病毒分离,采用血凝抑制实验进行流感病毒型别鉴定和测定血清抗体。结果深圳市全年共报告流感样病例(ILI)112651例,占监测门急诊就诊病例总数的6.27%;共分离出病毒154株,病毒分离率为5.33%,其中H1N1亚型103株、B(Victoria)型48株、H3N2亚型3株;共报告流感样病例暴发疫情25起,88%集中在中小学校;一般人群血清抗体GMT水平,甲型均低于1∶40,乙型均低于1∶20。结论深圳市流感监测结果可靠,2006年流感流行高峰为3～6月,H1N1、B(Victoria)为主要流行株。一般人群各型流感抗体水平均偏低。