温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的:从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症(EMT)的作用机制。方法:采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞(ESCs),实验设正常(Control)组、5%空白血清(5%KBXQ)组、10%空白血清(10%KBXQ)组、5%温经汤血清(5%WJTXQ)组、10%温经汤血清(10%WJTXQ)组。噻唑蓝(MTT)比色法检测不同组ESCs增殖情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及蛋白表达,透射电镜观察ESCs线粒体超微结构,高内涵分析(HCS)法多参数同时检测细胞线粒体功能[线粒体膜电位,线粒体膜电位(MMP)和细胞色素C(Cyt C)表达]及细胞凋亡情况(细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量),流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果:与Control组比较,5%KBXQ和10%KBXQ组细胞活力显著增加(P<0.01);HIF-1αmRNA及蛋白表达水平无明显变化;透射电镜观察可见线粒体嵴明显,线粒体内外膜清晰;HCS多通道荧光染色显示,MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化,细胞核呈现均匀淡染;细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较,5%WJTXQ及10%WJTXQ组细胞活力显著下降(P<0.01);HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01);线粒体超微结构破坏,部分线粒体肿胀,嵴模糊;MMP显著降低,Cyt C释放量明显增加(P<0.05,P<0.01);细胞膜通透性显著增加(P<0.01),并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征(P<0.05,P<0.01);流式细胞术结果显示,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),与HCS分析结果一致;且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激,抑制细胞增殖,降低线粒体生物活性,诱导细胞凋亡,这可能是其防治EMT的作用机制。