人脐血间充质干细胞体外诱导分化为类肝细胞

目的:建立人脐血间充质干细胞(umbilicalcordbloodmesenchymalstemcells,UCBMSC)的体外分离、培养方法,体外诱导UCBMSC分化为类肝细胞,观察UCBMSC细胞生物学特性,并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定.方法:采用体外细胞培养技术,分离培养人脐血UCBMSC,在10g/LMatrigel作基质,2.5mmol/LAZA预处理10-12h,HGF10μg/L+FGF410μg/L+HGM培养基中诱导.用显微摄像和MTT研究细胞增殖及生长特征,用流式细胞仪、免疫组织化学、RT-PCR鉴定细胞表型.采用ELISA法检测培养上清中人白蛋白水平.结果:每份脐血可获得150±20个贴壁细胞:细胞种植后6d达到对数生长期,连续传10代后,每份脐带血UCBMSC可扩增达109-1010个细胞.UCBMSC表型为CD44及CD166阳性,CD34及CD45阴性.在添加FGF4和HGF的Matrigel上诱导培养的UCBMSC在21-28d时,形态由长梭形变为三角形,多角形或类圆形.细胞转圆率为40-50%,双核细胞比率5-7%.免疫组化,RT-PCR检测显示未诱导培养的UCBMSC中,有较少的细胞表达AFP及其mRNA,未见其他肝脏特有的转录因子或者胞质蛋白标志.诱导早期可见较多细胞表达GATA4,AFP和CK19及其mRNA,至诱导后期表达下降,而ALB,CK18,GST-π和肝细胞转录因子HNF1α表达逐渐上升.ALB,CK18阳性细胞比例达61-65%.未诱导分化的UCBMSC没有分泌ALB和产生尿素,诱导分化的UCBMSC以时间依赖方式产生白蛋白.结论:人脐血UCBMSC先分化为肝前体细胞,再分化为成熟肝细胞,获得了在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞,已具备肝细胞特有的分泌白蛋白功能.

中间型人工肝对重型肝炎肝功能支持的效果评价

目的 评价中间型人工肝支持方法血浆置换对重型肝炎肝功能的支持效果和安全性。方法 对 17例重型肝炎患者进行血浆置换治疗 ,观察治疗前后患者临床症状、体征变化 ,比较治疗前后肝、肾功能 ,血常规 ,凝血酶原时间 (PT)和凝血酶原活动度 (PTa)变化。结果 血浆置换治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善 ,总有效率为 5 8.8% ,最终存活率仅为 11.8%。检测指标中转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间、凝血酶原活动度和总蛋白治疗前后差异均有显著性 (P<0 .0 5或 P<0 .0 1) ;血尿素氮、血肌酐和血常规各指标治疗前后差异均无显著性 (P均 >0 .0 5 ) ;而且不良反应较轻。结论 中间型人工肝对重型肝炎患者肝功能有肯定的支持效果。

还原型谷胱甘肽注射剂治疗慢性病毒性肝炎疗效观察

还原型谷胱甘肽注射剂治疗慢性病毒性肝炎疗效观察Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｈｒｏｍｉｃｖｉｒａｌｂｅｐａｆｉｔｉｓｗｈｔｈｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ何念海，顾长海，马巧玉（第三军医大学附属西南医院传染病中心）重庆，６３...

物理型人工肝对重型肝炎肝功能支持24例效果评价

目的 评价物理型人工肝支持方法———血液灌流吸附对重型肝炎肝功能的支持效果、安全性。方法 2 4例重型肝炎患者进行血液灌流吸附治疗 ,观察治疗前后患者临床症状体征变化 ,比较治疗前后肝肾功能、血常规、PT变化。结果 血液灌流吸附治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善 ,总有效率为 4 5 .8% ,最终存活率仅为 8.3%。治疗后转氨酶、总胆红素下降明显 ,差异有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) ,不良反应较轻。

连续反应时间测定诊断亚临床肝性脑病的初步评价

为了探讨连续反应时间（CRT）测定诊断亚临床肝性脑病的意义，我们用自行研制的CRT-I型微电脑测试仪检测了60例正常人和102例不同临床类型肝病病人的CRT。结果正常人对声信号和光信号刺激CRT的P10、P50、P90、P50／（P90－P10）正常值估计分别为234．3ms、264．4ms、318．0ms和1．7560及264．4ms、323．3ms、427．6ms和1．4521。慢性重型肝炎和肝硬化病人对声和光信号刺激的CRT的P10、P50和P90均较正常对照明显延长（P＜0．01，而P50／（P90－P10）比值较正常对照明显减少（P＜0．05和0．01）；各组病例对声刺激比光刺激敏感。55％的慢性重型肝炎病人和80％肝硬化在出现临床型肝性脑病前CRT延长。初步结果显示CRT测试对亚临床型肝性脑病有一定诊断价值。

人胎儿骨髓间充质干细胞体外向类肝细胞诱导分化条件的优化

目的 :建立和优化骨髓间充质干细胞 (marrowmesen chymalstemcells,MMSCs)向类肝细胞诱导分化的条件及分化过程观察、鉴定 .方法 :采用体外分离培养的MMSCs为研究对象 ,设计不同的诱导分化条件进行体外诱导 ,观察细胞诱导分化过程中形态结构变化及细胞生物学特性 ,应用免疫组化检测肝细胞标志ALB和CK18的表达 ,建立人胎儿MMSCs向类肝细胞分化的优化条件 .结果 :未进行诱导的对照组细胞保持长梭型 ,形状因子 4 .5± 1.0 ,面积较小 ,增生较快 ,呈典型成纤维细胞的漩涡状或火焰状生长 ,培养后期可见 5～ 7个分支 ,无细胞变圆 ,双核细胞率小于 0 .1% ,逐渐老化 ,颗粒增多 .组化染色未见表达ALB和CK18.所有诱导组细胞在培养中细胞分支均减少 ,多为 1～ 3个分支 ,未用基质的细胞仍保持长梭形生长 ,给予基质的诱导细胞部分形态由长变圆 ,形状因子下降 ,给予 5 氮胞苷 (5 azacitidine,AZA)预处理可抑制细胞过度增生 ,细胞形态由长梭型逐渐变短 ,PDGF BB预处理对细胞增生无明显抑制作用 ,细胞容易出现分支 .诱导各组组化染色显示 ,第 2 1日时均有ALB和CK18阳性表达 .诱导 2组～诱导 5组的细胞转圆率、双核细胞比率及ALB ,CK18阳性细胞比例均显著高于对照组及诱导 1组 (P <0 .0 5 ) .结论 :在无血清培养条件下 ,

人胎儿骨髓间充质干细胞来源的类肝细胞的分子生物学鉴定

目的:对MMSCs来源类肝细胞进行分子生物学鉴定. 方法:从人胎儿骨髓中分离MMSCs,在10 g/L Matrigel作基质,2.5 mmoL/L AZA预处理10-12 h,HGF 10 μg/L +FGF4 10 μg/L+HGM培养基中培养和诱导.收集诱导培养4,7,14,21,28 d时的细胞爬片,SABC免疫组化法DAB显色检测肝细胞早期标志AFP,CK19及早期转录因子GATA4,成熟肝细胞标志ALB,CK18,GST-π,肝细胞转录因子HNF1α;提取诱导分化10 dN第28 d细胞RNA 及蛋白质,设计AFP,CK19,ALB,CK18,CYP1B1,CYP286 引物,进行RT-PCR,观察在mRNA水平肝细胞标志的表达,采用Western blot检测CK18,AFP,ALB的表达量. 结果:未诱导培养的MMSCs中,有较少的细胞表达AFP, 未见其他肝脏特有的转录因子或者胞质蛋白标志.免疫组化显示在诱导早期可见较多细胞呈GATA4,AFP和CK19阳性表达,至诱导后期表达下降,而ALB,CK18,GST-π和肝细胞转录因子HNF1α阳性细胞比例逐渐上升.RT-PCR显示,未诱导的MMSCs仅可表达微弱的AFP mRNA,诱导早期可见AFP mRNA和CK19 mRNA表达,诱导后期未见扩增,而ALB,CK18,CYP1B1 mRNA早期和后期均可见表达,在诱导后期可见CYP286 mRNA表达,但很弱.Western blot检测显示诱导细胞中AFP,ALB和CK18 蛋白的表达趋势同基因表达类似.在65 ku和68 ku处诱导细胞组可见AFP和ALB目的条带,在45ku处诱导细胞组可见CK18目的条带.未诱导的细胞和诱导早期细胞中AFP有表达,后期未见.诱导早期和后期CK18和ALB均有表达,且后期增强. 结论:MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞,再分化为成熟肝细胞,在本实验诱导条件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞.

重组干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的疗效、影响因素及预后研究

目的观察重组干扰素α 2b(干扰能)治疗慢性乙型肝炎的疗效、影响疗效的因素和对长期预后的影响。方法88例慢性乙型肝炎病例配对分为治疗组和对照组各44例。治疗组用重组干扰素α 2b3×106U ,每周3次 ,皮下注射 ,疗程3个月 ,对照组不用抗病毒治疗。42例开放病例根据治疗剂量分为3×106U和6×106U2组,治疗方法为每周3次或隔日1次,深皮下或肌肉注射,疗程3个月。结果用重组干扰素α 2b治疗的全部病例在治疗完成时、随访6个月、1～7年的有效应答率(完全应答 +部分应答,分别为55.8 %、58.8 %、61.9 %、57.9 %、58.5 %、56.1 %、52.6 %、45.5 %和50.0 %)均显著高于对照组(分别为13.6 %、13.6 %、15.9 %、15.9 %、13.6 %、15.0 %、15.2 %、11.1 %和7.7 %),P<0.05或P<0.01。6×106 U和3×106 U治疗组间有效应答率差异无显著性(P>0.05)。中度慢性肝炎、治疗前ALT>100IU/L、病程短于3年、女性病人和治疗开始后有发热者的疗效较好(P<0.05)。治疗组的长期预后明显优于对照组(P<0.05),有效应答病例的长期预后显著优于无应答病例(P<0.05)。结论重组干扰素α 2b是一种肯定有效的抗乙型肝炎病毒药物。干扰素治疗可改善慢性乙型肝炎病人的长期预后。

抗乙肝特异胎盘转移因子治疗慢性乙型肝炎的Ⅱ期临床对比观察

应用抗乙肝特异胎盘转移因子治疗慢性乙型肝炎28例。结果发现抗乙肝特异胎盘转移因子治疗组的HBeAg、HBV－DNA阴转率及抗HBe阳转率在治疗结束时分别为53．6％、50．0％和42.9％，均显著高于正常胎盘转移因子治疗组（9．1％，P＜0．05）和空白对照组（6．3％，P＜0．01）；随访3个月均为46．2％，均显著高于空白对照组（8.7％，P＜0.01）。正常胎盘转移因子治疗组和猪苓多糖加乙肝疫苗治疗组与空白对照组相比均无显著性差异（P＞0．05）。提示抗乙肝特异胎盘转移因子是一种有效、价廉、使用方便的抗乙型肝炎病毒药物。

人胎儿骨髓间充质干细胞体外分离培养及诱导分化为类肝细胞

目的 建立人胎儿骨髓间充质干细胞（marrow mesenchymal stem cells，MMSCs）的体外分离、培养方法．体外诱导分化MMSCs为类肝细胞，观察MMSCs细胞生物学特性，并对类肝细胞进行分子生物学及功能鉴定。方法 采用体外细胞培养技术，分离培养人胎儿MMSCs，在1％Matrigel做基质，2．5gmol／inlAZA预处理10～12h，HGF10ng／ml＋FGF410ng／ml＋HGM培养基中诱导。用显微摄像和MTT研究细胞增殖及生长特征，用流式细胞仪、免疫组织化学和RT—PCR鉴定细胞表型。采用ELISA法检测培养上清中人清蛋白水平。结果 24h换液后可获得约（300±80）个贴壁细胞；培养细胞在种植后1～3d为生长滞留期，第4天达到对数生长期，以后进入到平台期，细胞分裂指数曲线的趋势与生长曲线类似。连续传10代后．每个胎儿来源的MMSCs可扩增达10^11～10^12个细胞。MMSCs表型为CD166阳性，CD34阴性。在添加FGF4和HGF的Matrigel上诱导培养的MMSCs在21～28d时，细胞形态由长梭形变为三角形、多角形或类圆形。细胞转圆率为40％～50％，双核细胞比率5％～7％。免疫组化和RT—PCR检测显示未诱导培养的MMSCs中，有较少的细胞表达AFP及其mRNA，未见其他肝脏特有的转录因子或者胞浆蛋白标志。诱导早期可见较多细胞表达GATA4、AFP和CK19及其mRNA，至诱导后期表达下降，而ALB、CK18、GST-Ⅱ和肝细胞转录因子HNF1d表达逐渐上升。ALB、CK18阳性细胞比例达61％～65％。未诱导分化的MMSCs没有分泌ALB，诱导分化的MMSCs以时间依赖方式产生清蛋白。结论 人胎儿MMSCs分离成分单纯，增生旺盛。诱导培养可获得高比例的类肝细胞。MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞，再分化为成熟肝细胞，在本实验诱导奈件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞。诱导后MMSCs已具备肝细胞特有的功能性特征。

混合型人工肝治疗肝衰竭疗效观察

目的 评价混合型人工肝支持方法———血浆置换 +血液灌流吸附治疗肝衰竭的临床疗效、安全性及其对血浆内毒素的清除作用。方法 3 4例肝衰竭患者进行血浆置换 +血液灌流吸附治疗 ,比较治疗前后肝肾功、血常规、PT、血浆内毒素水平的变化 ,观察治疗后患者临床症状体征情况等变化。结果 血浆置换 +血液灌流吸附治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善 ,总有效率为 67.6% ,最终存活率仅为 2 9.1%。检测指标中转氨酶、总胆红素、凝血酶原时间、凝血酶原活动度、内毒素水平较治疗前后差异有显著性意义 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,不良反应较轻。结论 混合型人工肝对肝衰竭有肯定的疗效 。

干扰能治疗慢性乙型肝炎的临床观察

干扰能治疗慢性乙型肝炎的临床观察６３００３８重庆第三军医大学西南医院何念海，顾长海，胡大荣，王宇明关键词干扰素α；肝炎，病毒性，乙型；治疗中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２抗病毒治疗是慢性肝炎治疗中至关重要的环节。干扰素（ＩＦＮ）具有广谱抗病毒和免疫调...

三种人工肝支持方法对肝衰竭支持效果的比较

目的 :比较物理型 (血液灌流吸附 )、中间型 (血浆置换 )及组合型 (血浆置换 +血液灌流吸附 )人工肝支持方法对肝衰竭患者肝功能的支持效果、安全性 .方法 :75例重型肝炎肝衰竭患者分别进行血液灌流吸附 (2 4例 )、血浆置换 (1 7例 )和血浆置换 +血液灌流吸附 (34例 )治疗 ,观察治疗前后患者临床症状变化 ,比较治疗前后肝肾功能、血常规、凝血酶原时间 (PT)、凝血酶原活动度 (PTa)变化 .结果 :血液灌流吸附、血浆置换及血浆置换 +血液灌流吸附治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善 .三种方法治疗后转氨酶、总胆红素(TB)、直接胆红素 (DB)下降均有显著性差异 (P <0 .0 5或P<0 .0 1 ) ,而血浆置换及血浆置换 +血液灌流吸附治疗后PT、总血清蛋白 (TSP)下降 ,PTa升高均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 ) .三种方法治疗的不良反应均较轻 .结论 :三种人工肝支持方法对重型肝炎肝衰竭患者的肝功能均有肯定的支持效果 。

成体干细胞可塑性及对肝脏的重建作用

成体干细胞有多向分化潜能,可以横向分化为不同类型的特化细胞,甚至逆分化为更原始的干细胞.本文介绍了近年来成体干细胞“横向分化”潜能、分化机制,对成体干细胞横向分化为肝脏细胞的研究进展及存在问题进行了讨论.

单磷酸阿糖腺苷联合胸腺肽肌注治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效观察

单磷酸阿糖腺苷联合胸腺肽肌注治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效观察Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｉｎｊｅｃｔｉｏｎｏｆａｄｅ┐ｎｉｎｅａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｃｏｍｂ...

人胎肝间充质干细胞体外分离培养和生物学鉴定

目的建立人胎儿肝脏非实质细胞间充质干细胞(nonparenchymalmesenchymalstemcells,NPMSC)的分离、培养方法,观察NPMSC形态学、细胞生物学特性及细胞表型特征,以获得大量人源性间充质干细胞(MSC)。方法采用体外细胞培养技术分离培养人胎儿NPMSC,用显微摄像、MTT和图像分析研究其增殖及生长特征,用流式细胞仪和免疫组化法鉴定其表型。结果每个胎儿肝脏可获得10000±2000个贴壁细胞,可见5～10个高速增生的细胞集落。原代和传代培养均生长缓慢,按1∶3传代,传1代需8～10d,细胞经传代后逐渐纯化,传10代后可达109个细胞。流式细胞仪检测NPMSC不表达CD34,而表达CD166。对传代NPMSC进行人甲胎蛋白和白蛋白免疫组化分析,细胞表达微量甲胎蛋白,不表达白蛋白。结论肝非实质细胞中含有MSC,且量较大,可成为种子细胞。NPMSC在普通培养条件下不向肝细胞分化。

中间型和混合型人工肝对肝衰竭支持效果对比研究(英文)

目的 比较中间型 (血浆置换 )和混合型 (血浆置换 +血液灌流吸附 )人工肝支持方法对肝衰竭患者肝功能的支持效果及安全性。方法 5 1例重型肝炎肝衰竭患者分别进行血浆置换 (17例 )和血浆置换 +血液灌流吸附 (34例 )治疗 ,观察治疗前后患者临床症状变化 ,比较治疗前后肝肾功能、血常规、PT变化。结果 血浆置换和血浆置换 +血液灌流吸附治疗后 ,患者的临床症状均有不同程度改善。两种方法治疗后转氨酶、总胆红素、直接胆红素、凝血酶原时间、总蛋白下降、凝血酶原活动度升高均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ,但两种治疗方法间比较各项指标变化程度均无显著性差异。两种方法治疗的不良反应均较轻。结论 中间型、混合型人工肝对重型肝炎肝衰竭患者的肝功能均有肯定的支持效果。

重型病毒性肝炎酸碱失衡的多指标联合诊断

为正确诊断重型肝炎患者的酸碱失衡(ABD),作者联合运用ABD预计代偿公式(PCF)、阴离子隙(AG)、潜在HCO_3^-和血Cl^-分析了274例次血气分析和电解质测定参数。结果发现,仅用PCF诊断有单纯ABD142例次,二重ABD132例次;联合诊断时单纯ABD仅78例次,二重ABD100例次,三重ABD94例次,四重ABD仅2例次,使混合ABD增加64例次(48.5％)。提示联合诊断对正确判断混合ABD尤其是三重、四重ABD有重要价值。有混合ABD的重型肝炎患者各种并发症发生率及病死率均明显高于仅有单纯ABD的患者。