血清双调蛋白、间皮素对乳腺癌辅助诊断的价值

目的 探讨血清双调蛋白(AREG)和间皮素(MSLN)水平在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法选取2018年12月—2019年5月就诊于复旦大学附属肿瘤医院的女性乳腺癌患者54例(乳腺癌组)、乳腺良性病变患者38例(良性病变组)和表观健康者35名(健康对照组)。采用酶联免疫吸附试验检测血清AREG和MSLN水平。分析乳腺癌患者血清AREG和MSLN水平与临床病理特征的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估AREG、MSLN单独和联合癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA)15-3检测辅助诊断乳腺癌的效能。结果 与健康对照组比较,乳腺癌组血清AREG、MSLN水平均显著升高(P<0.05)。AREG、MSLN检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.582、0.637,而血清AREG、MSLN联合CEA、CA15-3检测的AUC为0.757。乳腺癌组血清AREG、MSLN水平与病理类型和淋巴转移有关(P<0.05)。结论 血清AREG、MSLN联合CEA和CA15-3检测可在乳腺癌辅助诊断中具有一定作用。

血清1-磷酸鞘氨醇联合透明质酸检测对结直肠癌的诊断及预后价值

目的:观察分析结直肠癌(CRC)患者血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)和透明质酸(HA)的水平变化及相关性,探讨其对结直肠癌诊断和预后评估的临床价值。方法:收集47例结直肠癌患者(结直肠癌组)、30例肠道良性疾病患者(良性疾病组)和38名健康的体检者(健康对照组)的临床资料,并检测所有受试者的血清S1P和HA水平。利用Spearman相关性分析评估两者相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估S1P、HA、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单独和联合诊断CRC的效能。结果:血清S1P水平在健康对照组、良性疾病组及结直肠癌组中逐次升高(P<0.05)。结直肠癌组血清HA水平高于健康对照组(P<0.05),然而良性疾病组的血清HA水平与结直肠癌组和健康对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。根据Spearman相关性分析结果,结直肠癌组血清S1P水平和HA水平之间存在正相关关系(r=0.406,P<0.05)。ROC曲线结果显示,S1P、HA、CEA、CA19-9单独和联合诊断CRC的曲线下面积分别为0.871、0.642、0.694、0.593及0.916。术后CRC患者血清HA水平显著降低(P<0.001),但术后血清S1P水平与术前差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清S1P与HA结合检测在结直肠癌的辅助诊断及预后评估中具有一定的临床价值。

透明质酸在肿瘤细胞可塑性调控中作用的研究进展

透明质酸(hyaluronan,HA)是细胞外基质的重要成分,在肿瘤间质中异常潴留,参与肿瘤微环境的重构。据报道,HA及其相关代谢酶、受体与肿瘤细胞可塑性改变密切相关,在肿瘤干细胞干性维持、上皮-间充质转换(epithelial to mesenchymal transition,EMT)、获得性耐药等过程中均发挥重要的调节作用。本文对HA在调节肿瘤细胞可塑性中作用的研究进展进行了综述。

血清HYAL1、HA在结直肠癌辅助诊断和疗效监测中的价值

目的探讨结直肠癌患者血清透明质酸降解酶1(HYAL1)和透明质酸(HA)水平变化及其临床价值。方法选取结直肠癌患者75例(结直肠癌组)、结直肠良性疾病患者46例(良性疾病组)和体检健康者51名(正常对照组)。收集所有研究对象的临床资料,并检测血清HYAL1和HA水平。另检测41例结直肠癌患者术后血清HYAL1和HA水平。采用Pearson相关分析评估各项指标之间的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清HYAL1、HA、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单项和联合检测诊断结直肠癌的效能。结果正常对照组、良性疾病组和结直肠癌组血清HYAL1水平依次升高(P<0.0001)。结直肠癌组血清HA水平显著高于正常对照组(P<0.0001),良性疾病组与正常对照组之间、良性疾病组与结直肠癌组之间血清HA水平差异均无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,正常对照组、良性疾病组和结直肠癌组HYAL1与HA均无相关性(r值分别为0.147、0.072、-0.029,P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,HYAL1、HA、CEA和CA19-9诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.899、0.723、0.717和0.669,HYAL1分别与CEA、CA19-9两两联合和3项联合检测诊断结直肠癌的AUC分别为0.917、0.905和0.916。HYAL1、CEA和CA19-9单项和3项联合检测诊断早期(TNM分期Ⅰ~Ⅱ期)结直肠癌的AUC为0.860、0.686、0.685和0.885。血清HYAL1水平与结直肠癌患者TNM分期、淋巴转移、脉管侵犯和神经侵犯有关(P<0.001)。结直肠癌患者术后血清HYAL1、HA和CEA水平显著低于术前(P<0.01),其中HYAL1的降低幅度最为明显。血清CA19-9水平术前、术后差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清HYAL1或可作为早期结直肠癌辅助诊断和疗效监测的血清学指标。

乳腺癌患者血清HAS2、CD44水平变化及其临床意义

目的探讨乳腺癌患者血清透明质酸合成酶2(HAS2)和分化抗原簇44(CD44)水平的变化及其临床意义。方法选取2020年1月—2021年6月上海交通大学医学院附属第六人民医院乳腺癌患者52例(乳腺癌组)、乳腺良性疾病患者40例(乳腺良性疾病组)、健康体检者34名(正常对照组)。收集所有研究对象的临床资料,并检测血清HAS2和CD44水平。采用Pearson相关分析评估HAS2与CD44的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清HAS2、CD44、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原(CA)15-3单项检测和联合检测诊断乳腺癌的效能。结果正常对照组、乳腺良性疾病组和乳腺癌组血清HAS2和CD44水平依次升高(P<0.0001)。Pearson相关分析结果显示,正常对照组、乳腺良性疾病组和乳腺癌组血清HAS2与CD44均呈正相关(r值分别为0.3644、0.4152、0.2905,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清HAS2、CD44、CEA、CA15-3单项检测和4项指标联合检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.805、0.560、0.621、0.883;4项指标联合检测模型诊断早期(TNM分期Ⅰ~Ⅱ)和晚期(TNM分期Ⅲ~Ⅳ)乳腺癌的AUC分别为0.860、0.919。不同肿瘤大小、组织学分级、人表皮生长因子受体2(HER2)表达和有无淋巴转移的乳腺癌患者之间血清HAS2水平差异均有统计学意义(P<0.05),不同年龄、雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达、Ki67表达和有无脉管侵犯的乳腺癌患者之间血清HAS2水平差异均无统计学意义(P>0.05)。不同临床病理特征的乳腺癌患者之间血清CD44水平差异均无统计学意义(P>0.05)。血清HAS2诊断乳腺癌淋巴转移的AUC为0.739。结论HAS2和CD44可作为乳腺癌的辅助诊断指标。血清HAS2水平与乳腺癌恶性进展密切相关,或可作为预后判断的指标之一。

低分子量透明质酸寡糖片段介导内皮细胞增殖的信号通路

为研究低分子量透明质酸寡糖片段(hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长与迁移的影响,及透明质酸(hyaluronan,HA)受体(CD44与RHAMM)在此过程中的作用,首先通过细胞计数、MTT实验、细胞周期分布及单层细胞损伤模型修复实验,观察o-HA对血管内皮细胞(猪髂总动脉内皮细胞,porcine vascular endothelial cell line,PIEC)增殖及创伤愈合的影响.结果显示,o-HA明显促进血管内皮细胞生长,并且能够促进内皮细胞向创伤区迁移.蛋白质免疫印迹分析证明,o-HA作用于PIECs后,细胞Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度增强,c-Myc蛋白、周期蛋白D1表达水平增高.Src激酶特异性的化学抑制剂PP2可轻度抑制ERK-1/2磷酸化;进而通过抗-CD44与抗-RHAMM抗体分别预先封闭细胞表面相应的特异性受体位点后,再用o-HA刺激细胞,探讨HA受体在o-HA介导PIECs信号传导过程中的作用.结果显示,抗CD44抗体不能抑制o-HA介导的ERK-1/2磷酸化;而抗RHAMM抗体可轻度抑制o-HA介导的ERK-1/2磷酸化.结果提示,o-HA具有促进血管内皮细胞增殖及创伤愈合的作用,其机制可能是通过血管内皮细胞表面受体RHAMM实现的.该作用可能通过激活Src激酶及细胞内MAPK(ERK-1/2)信号通路,启动早期反应基因转录,诱使c-Myc蛋白高表达,从而促进血管内皮细胞生长.该作用也可能与上调细胞周期蛋白D1的表达有关.

实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达研究

目的探讨CD44和透明质酸介导运动的受体（RHAMM）在胃肠肿瘤组织中的表达，研究其在肿瘤诊断中的价值。方法收集病理分期为Ⅱ～Ⅲ级胃肠道恶性肿瘤样本30例，并通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对CD44和RHAMM进行定量分析。结果CD44和RHAMM在癌组织中相对于管家基因GAPDH的表达中位数分别为1．587和1．074，正常组织中分别为0．704和0．098；肿瘤组织中，区域淋巴结转移组的CD44拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．650，未转移组相应的均值为1．431；区域淋巴结转移组的RHAMM拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．301，未转移组的中位数为1．064。区域淋巴结转移样本其CD44和RHAMM表达同步增高，肿瘤组织中CD44和RHAMM之间的相关系数（r）为0．96。结论胃肠肿瘤中的CD44和RHAMM表达高于正常组织，且两者表达具相关性。CD44和RHAMM的表达量增加的多少不足以判断肿瘤是否有区域淋巴转移，CD44和RHAMM同时增高可能预示肿瘤的淋巴转移。

治疗药物浓度监测用质控物的制备及其质控方法的应用

目的自行制备室内质控物,用于检测治疗药物监测(TDM)系统的内部质量控制。方法将适量的甲氨喋呤标准品加入正常人体检的血清中配制成所需浓度,置-80℃保存。采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定其浓度。结果经过长期观察测定,其测定均值在1年内的差异无统计学意义(在靶值的±15%允许误差范围内)。结论自行制备的室内质控物具有良好的稳定性,可满足室内质控的要求。

外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌诊断中的临床价值

目的比较外周血M2/M1单核细胞比例在乳腺癌患者和体检健康者间的差异,初步探讨外周血M2/M1单核细胞比例作为循环肿瘤标志物的临床意义。方法采用流式细胞术检测89例乳腺癌患者、53名体检健康者外周血M2/M1单核细胞比例,并与癌胚抗原(CEA)和糖类抗原15-3(CA15-3)进行比较分析。结果乳腺癌患者外周血M2/M1单核细胞比例明显高于体检健康者(P<0.001)。外周血M2/M1单核细胞比例诊断乳腺癌的受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积大于CEA和CA15-3。结论应用流式细胞术检测的外周血M2/M1单核细胞比例具有较高的乳腺癌诊断价值,其可能成为新的用于乳腺癌诊断的循环肿瘤标志物。

改良反相高效液相色谱法监测血清中甲氨喋呤浓度及临床应用

目的 建立一种反相高效液相色谱法（RP—HPLC）检测肿瘤患者血清中甲氨喋呤（MTX）浓度的方法。方法 色谱柱为反相柱C18（150．00mm×4．60mm），柱温35℃。流动相为0．15mol/L乙酸钠：乙腈：89：11（体积比），流速1．5ml／min。进样量为10μl，检测波长303nm，用高氯酸沉淀血清标本的蛋白。结果 血清中MTX的检测范围为0．25～100．00mg／L，决定系数（r^2）=0．999，线性关系良好，平均回收率100．95％，日内及日间相对标准差（RSD）均〈5％。结论 RP—HPLC适用于临床对血药浓度的监测。

熊果酸对兔外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的观察熊果酸对兔外周血内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响并探讨其可能的作用机制。方法以密度梯度离心法分离兔外周血单个核细胞,并接种于纤连蛋白包被的培养板上,予含内皮细胞生长添加剂(ECGS)的M199培养基培养14天,应用免疫荧光染色及流式细胞仪检测、鉴定内皮祖细胞,分别以MTT法、改良的Boyden小室、黏附能力测试、ELISA法观察不同浓度(5,10,50,100mmol/L)熊果酸对培养的EPC增殖、迁移、黏附及分泌功能的影响;同时观察糖皮质激素受体拮抗剂RU486预作用的效果。结果熊果酸可浓度依赖性减少兔EPC的数量,并减弱其增殖、迁移、黏附和分泌能力;RU486可部分逆转熊果酸的上述抑制作用。结论熊果酸可能部分通过糖皮质激素受体的介导影响EPC的数量和功能,而这种抑制作用可能使其在抗动脉粥样硬化和抗再狭窄的应用中受限。

肿瘤相关巨噬细胞模型建立的实验研究

目的建立肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的体外分化模型。方法分离健康人外周血单核细胞进行体外培养;经白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)刺激后,利用流式细胞术检测细胞表面标志物CD14、CD204、CD206的表达改变;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单核细胞白细胞介素10(IL-10)分泌量的改变;继而将刺激后的单核细胞与肿瘤细胞共培养,采用Hoechst染色观察其对肿瘤细胞的杀伤情况。结果经IL-4和IL-13刺激后,单核细胞表面CD14的表达率未发生明显变化,而CD204和CD206的表达显著增高,同时IL-10的分泌量也显著增高;与肿瘤细胞共培养结果显示,经IL-4/IL-13刺激的单核细胞对肿瘤细胞的杀伤能力显著下降。结论 IL-4/IL-13可在体外诱导单核细胞呈现TAM的表型和功能,适用于TAM分化模型的建立,该模型可应用于针对TAM的相关研究。

血清 HER-2、CD44 联合检测在结直肠癌中的临床价值

目的探讨血清人表皮生长因子受体2(HER-2)和分化抗原簇44(CD44)水平在结直肠癌中的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验检测38例结直肠癌患者(结直肠癌组)术前及术后2~3 d、35例结直肠良性病变患者(良性病变组)和36名健康体检者(正常对照组)的血清HER-2和CD44水平。收集所有对象的一般资料。采用Pearson相关分析评估HER-2与CD44的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估各项指标单项检测及联合检测辅助诊断结直肠癌的效能。结果结直肠癌组术前血清HER-2水平高于良性病变组和正常对照组(P<0.05、P<0.0001)。结直肠癌组术前血清CD44水平高于正常对照组(P<0.05),与良性病变组差异无统计学意义(P>0.05)。血清HER-2水平与结直肠癌患者RAS基因突变及周围神经侵犯有关(P<0.05),CD44水平与Ras基因突变及周围神经侵犯无关(P>0.05);血清HER-2及CD44水平与年龄、性别、肿瘤类型、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移及脉管侵犯均无关(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,HER-2、CD44、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA19)-9单项检测及联合检测诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别为0.779、0.692、0.620、0.634及0.837。结直肠癌患者术后血清CD44水平显著低于手术前(P<0.0001),而血清HER-2水平术前、术后差异无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌患者HER-2与CD44显著相关,二者联合检测或可用于结直肠癌的辅助诊断及疗效评估。

血清β-CTx、25-OH-VD、磷对骨肿瘤的临床价值研究

目的探讨骨肿瘤患者血清骨代谢指标的水平及其在辅助诊断中的临床价值。方法纳入2021年1-12月该院76例骨肿瘤患者(骨肿瘤组)和40例健康体检者(健康组)作为研究对象。根据病理检查结果将骨肿瘤组进一步分为良性组(29例)、中间型组(17例)和恶性组(30例)。比较不同组别之间血清钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTx)、骨钙素N端中分子(OCN-MID)、甲状旁腺素(PTH)、25-羟基维生素D(25-OH-VD)和总Ⅰ型胶原氨基端延长肽(TP1NP)水平的差异。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标单独及联合检测对骨肿瘤的诊断价值。采用Spearman相关分析评估指标间的相关性。结果骨肿瘤组血清β-CTx、P、ALP水平高于健康组,25-OH-VD水平低于健康组,差异均有统计学意义(P<0.01);两组血清Ca、OCN-MID、PTH、TP1NP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,β-CTx、25-OH-VD、P、ALP诊断骨肿瘤的曲线下面积(AUC)分别为0.750、0.799、0.810、0.647;β-CTx、25-OH-VD、P联合检测时的AUC最大(0.879),优于两两联合及单项指标应用时的诊断效能,对应灵敏度为75.00%,特异度为90.00%。骨肿瘤患者血清β-CTx与P水平呈正相关(r=0.55,P<0.01),25-OH-VD与P水平呈负相关(r=-0.26,P<0.05);而良性组、中间型组、恶性组血清β-CTx、25-OH-VD和P水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论血清β-CTx、25-OH-VD和P水平联合检测对骨肿瘤诊断具有较高价值,可为临床诊断和动态监测提供一定参考。

Src-MAPK信号通路参与透明质酸寡糖片段诱导PIEC细胞的增殖

探讨透明质酸小片段(Hyaluronan oligosaccharides,o-HA)对血管内皮细胞生长的影响及机制。采用细胞计数、流式细胞术、Western blot等方法,检测o-HA作用于内皮细胞后,Src激酶、丝裂原活化蛋白激酶MAPK(ERK-1/2)的磷酸化程度及细胞周期蛋白D1的表达水平。o-HA在10μg/ml浓度时可明显地促进血管内皮细胞的增殖,包括细胞周期水平及细胞数量。继续增加o-HA的浓度及延长培养时间均未出现进一步的变化；细胞增殖在12h开始出现,72h达到高峰。1μg/ml的o-HA作用于细胞2min后,胞内Src激酶、ERK-1/2的磷酸化程度即增强,并在3h后检测到周期蛋白D1的表达水平增高。o-HA具有促进血管内皮细胞增殖的作用,其机制可能是通过激活Src激酶及细胞内MAPK信号通路,从而促进血管内皮细胞生长；该作用也可能与上调周期蛋白D1的表达有关。

荧光标记电泳对透明质酸寡糖片段鉴定的方法建立

近年来,透明质酸寡糖片段(hyaluronan oligosaccharides,o-HA)的生物学活性引起国外学者的重视,因为o-HA具有一定的生物学活性,如参与免疫调节、刺激新生血管形成等.本研究建立一种经济、简便的ANTS(8-氨基奈-1,3,6-三磺酸)荧光标记电泳对透明质酸寡糖片段大小鉴定的新实验方法.实验原理为,ANTS能与糖分子发生还原反应,在反应时提供3个电子和1个荧光基团,通过高浓度PAGE分离,在特定波长下呈现颜色反应.采用酶消化法得到不同分子量大小的o-HA片段,测得不同片段大小的o-HA聚合度,分别与高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)和静电喷雾电离质谱(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)进行比较,结果吻合.研究提示,用荧光标记电泳法分析寡糖分子量,操作简单、设备低廉、灵敏度较高且检测速度快,是一种检测鉴定寡糖分子的较好方法.

血清S1P检测在结直肠癌早期诊断中的临床价值

目的探讨血清1-磷酸鞘氨醇(S1P)水平在结直肠癌早期诊断中的应用价值。方法选取结直肠癌患者42例(结直肠癌组)、结直肠良性病变患者30例(良性病变组)、体检健康者38名(正常对照组)。收集结直肠癌组的临床病理资料,并检测所有研究对象血清S1P水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估S1P、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)单项和联合检测诊断结直肠癌的效能。结果结直肠癌组血清S1P水平显著高于良性病变组和正常对照组(P<0.05、P<0.001),且Ⅰ~Ⅱ期结直肠癌组血清S1P水平显著高于Ⅲ~Ⅳ期结直肠癌组、良性病变组和正常对照组(P<0.05、P<0.05、P<0.001)。良性病变组血清S1P水平显著高于正常对照组(P<0.001)。有淋巴转移的结直肠癌患者血清S1P水平低于无淋巴转移患者(P<0.05),其他不同临床病理特征的结直肠癌患者之间血清S1P水平差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,以正常对照组为对照,血清S1P、CEA和CA19-9单项和联合检测诊断结直肠癌的曲线下面积(AUC)分别是0.924、0.701、0.579和0.943,诊断Ⅰ~Ⅱ期结直肠癌的AUC分别是0.944、0.663、0.611和0.955,诊断CEA和CA19-9单项或同时阴性结直肠癌的AUC分别为0.919、0.628、0.526和0.932。以良性病变组为对照,3项指标单项和联合检测鉴别诊断结直肠癌的AUC分别是0.655、0.720、0.582和0.787。结论S1P或可作为诊断早期结直肠癌的生物标志物。

透明质酸寡糖片段促进血管内皮细胞增殖的研究

目的:研究分离纯化的透明质酸寡糖片段(o-HA)对血管内皮细胞增殖的作用。方法:选用猪髂总动脉内皮细胞(PIEC)做为靶细胞,人胚肾293细胞做为对照细胞,应用本实验室分离纯化的o-HA(4-12-mer)配成一系列浓度(0、1、3、5、10及20μg/ml),加入靶细胞及对照细胞继续培养不同时间(0、6、12、24、48、72及96 h),从细胞计数、细胞周期分布和单层血管内皮细胞损伤修复来观察血管内皮细胞的增殖情况。结果:10μg/ml o-HA作用于PIEC时能显著促进增殖,继续增加o-HA的浓度,增殖作用未随之增强;o-HA刺激培养12 h PIEC即明显增生,至72 h达高峰(P<0.05);o-HA对PIEC损伤模型也有显著的促愈合作用。结论:o-HA能显著促进血管内皮细胞的增殖。