克伦特罗单克隆抗体的制备与鉴定

将克伦特罗 (Clenbuterol)重氮化后与牛血清白蛋白偶联 ,免疫BALB/c小鼠 ,用杂交瘤技术获得 1株稳定分泌抗克伦特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该单克隆抗体为IgG1亚类 ,用间接ELISA测定细胞上清液抗体效价为1∶1.6× 10 6,腹水抗体效价为 1∶3 .2× 10 8。抗体与沙丁胺醇无交叉反应。该细胞株体外传代培养和冻存复苏后仍能稳定分泌抗体。

苏丹红残留酶联免疫检测技术研究

通过对苏丹红分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备了苏丹红特异性抗体。该抗体灵敏度为0.5μg/L,对苏丹红I号交叉反应率为100%,对对位红交叉反应率为120%,对于苏丹红II、III、IV号均小于1%。基于该抗体建立了简介竞争性酶联免疫法检测辣椒酱最低检测限(LOD)为27.64μg/kg,定量限(LOQ)为30μg/kg,30μg/kg～90μg/kg添加水平回收率为96.7%～134.1%,变异系数小于15%,可初步用于苏丹红的实验室分析。

动物组织中磺胺二甲嘧啶残留检测ELISA试剂盒的研制

在建立竞争ELISA方法的基础上,首次研制出检测磺胺二甲嘧啶的单克隆抗体快速检测试剂盒,并对其检测限、精密度、检测范围以及鸡肌肉组织中的添加回收实验做了详细研究。本试剂盒的检测限为1.0ng/ml,检测范围为1.0～81.0ng/ml,批内变异系数<8.9％,批间变异系数<9.5％,在10、60和200ng/ml水平鸡肌肉组织中添加,回收率为64.5％～85.5%,变异系数为6.0％～18.6%。与同类相关德国产试剂盒相比较,阳性符合率为100％。

抗氯霉素多克隆抗体的制备

用重氮化和CDI两种方法合成了CAP全抗原 ,紫外分析和商业试剂盒ELISA鉴定表明合成成功 ;动物免疫 4次后采血检测 ,多克隆抗体 50 %抑制率探测限可达1 0ng/ml,效价可达 1 0万以上稀释倍数 ,特异性较好。

β-兴奋剂沙丁胺醇及其检测技术研究进展

在畜禽生产中滥用 β-兴奋剂将对人体健康造成极大的损害 ,国内外对肉食品中β-兴奋剂残留的检测分析都非常重视。本文对 β-兴奋剂沙丁胺醇的各种检测方法的原理进行了较为详细的阐述 ,综述了其在肉食品沙丁胺醇残留检测中的应用及国内外研究状况。免疫标记技术以其快速、灵敏、简便 ,仪器分析技术以其准确可靠的特性分别被广泛应用于沙丁胺醇的抽查和确证工作。展望未来 ,在各种检测技术中 ,以酶联免疫吸附分析方法为基础的 EL ISA检测试剂盒和免疫胶体金试纸条的应用前景将最为广阔。

抗链霉素单克隆抗体的制备和鉴定

用CDI法合成链霉素全抗原 ,免疫BALB c小鼠 ,采用杂交瘤技术得到了一株能稳定分泌抗链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞。经ELISA鉴定 ,SM McAb为IgG1类 ;细胞培养上清的效价达 1 0 4以上 ,腹水的达 1 0 8以上 ;与双氢链霉素交叉反应率为 2 0 0 % ,与庆大霉素、卡那霉素无交叉反应。

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其鉴定

将沙丁胺醇 (salbutamol)琥珀酰化后 ,应用混合酸酐法与牛血清白蛋白偶联 ,免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术获得了 1株能稳定分泌抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该单抗为IgG1亚类。经间接ELISA方法测定 ,其细胞上清抗体效价为 1∶3 .2× 10 6,腹水抗体效价为 1∶6.4× 10 8。该抗体与克仑特罗交叉反应率为 5 0 .0 0 % ,与莱克多巴胺交叉反应率为 0 .3 0 %。体外传代培养和冻存复苏后抗体分泌稳定。

抗环孢菌素A单克隆抗体的制备和特性鉴定

目的:制备环孢菌素A(CsA)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:采用光化学反应制备CsA全抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法克隆,以ELISA法对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。结果:获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞4E1-C4-E12,细胞培养上清效价、腹水效价分别为1∶200和1∶105,为IgG1类,可特异性识别CsA,与其类似物CsC、CsD交叉反应率为13.3%、21.5%。结论:成功地制备了针对CsA的mAb,为进一步研制检测CsA的ELISA试剂盒奠定基础。

玉米赤霉醇及其残留检测

玉米赤霉醇是一种非甾体类同化激素 ,在动物体内的残留会影响人类健康 ,国内外均禁止将其作为牛羊促生长剂使用。本文综述了动物组织中玉米赤霉醇残留的检测方法 ,包括薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱

动物源性食品中群勃龙ELISA检测技术的研究与应用

采用琥珀酸酐法对群勃龙进行化学修饰,合成半抗原,免疫动物,制备了特异性强的群勃龙单克隆抗体。建立了群勃龙ELISA检测方法,其灵敏度为0.05μg/L,对群勃龙的交叉反应率为100%,对去氢表睾酮和睾酮交叉反应率小于1%,19-去甲睾酮交叉反应率小于4.5%。以2.5,5.0,10.0μg/kg添加水平的牛肉样本回收率范围为78.4%~105.6%,变异系数小于15%。该方法的建立为群勃龙残留检测提供了可靠的分析检测手段。

甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测

以纯化培养的甘蔗宿根矮化病(RSD)病菌作为抗原,免疫健康家兔,制备了RSD多克隆抗体。采用间接酶联免疫吸附试验检测其效价,并通过斑点酶标免疫法(Dot blot enzyme immunoassays,DB-EIA)确定其工作浓度,同时与澳大利亚的抗体比较。结果表明,制备的RSD多克隆抗体效价大于1∶10000,在用DB-EIA法检测样本时的工作浓度以稀释10倍较好;与澳大利亚抗体的检测结果一致,但在印迹着色方面比澳大利亚的浅一些。试验结果表明,自制RSD抗体的效价略低于澳大利亚RSD抗体,但检测效果较好,可以满足今后在甘蔗生产上对RSD的检测要求。

牛奶中新霉素残留胶体金免疫层析快速检测技术的研制

建立了一种快速、简单的检测牛奶中新霉素残留量的胶体金免疫层析法,将抗新霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干于微孔板中,将新霉素人工抗原和羊抗鼠抗抗体分别包被在醋酸纤维素膜上作为检测线（T线）和质控线（C线）,T线的新霉素人工抗原与待测牛奶样品中的新霉素竞争结合新霉素单克隆抗体-胶体金标记物,通过T线和C线的显色情况读出结果。试纸条对牛奶样品的检测限为200μg/L,牛奶样品无需稀释,可直接检测,检测时间只需3~5min,与磺胺类、四环素类、氯霉素类等药物均无交叉反应,检测结果重复性好,可作为现场快速筛查牛奶中新霉素残留的有效手段。

蔬菜、茶叶中克百威酶联免疫检测方法的建立

为建立快速检测蔬菜、茶叶中克百威残留的酶联免疫方法,合成克百威半抗原,并与载体蛋白偶联合成人工抗原,然后免疫制备其单克隆抗体,在筛选克百威单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线为y=-2.054x+0.667 3,相关系数(r)为0.998 5,半数抑制浓度(IC_(50))为2.3μg/L,对蔬菜、茶叶样本的检测限分别为10、5μg/kg,加标回收率为79.2%~102.7%,样本重复检测的变异系数为5.5%~11.5%。结果表明,建立的酶联免疫检测方法具有较好的特异性、准确性和重复稳定性,可用于蔬菜、茶叶中克百威残留的检测。

链霉素胶体金快速检测试纸条的研制

本研究建立了一种基于免疫胶体金技术的链霉素快速检测方法。该方法检测灵敏度10ng·ml-(101ppb),蜂蜜样本检出限是40ng·ml-(40ppb),单个样本检测时间为5～10min。所研制试纸条产品检测变异系数小,批1间、批内检测结果重复性良好,可以应用于蜂蜜样本中链霉素的快速检测和现场筛查,具有较高的市场应用前景。