动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析，了解７种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照，筛选出无致癌／致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２）或极低致癌性的ＭＤＣＫ细胞系用于制苗，发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性，得到一些１００％成瘤和１００％不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗，都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的ＢＨＫ－２１和Ｖｅｒｏ细胞株），其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。

犬肾细胞系的染色体组型分析与致癌/致瘤性的实验研究

以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 4 5代的完整活细胞或冻融裂解细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的几株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MDCK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 ,只有超二倍体以上细胞才具有高的致癌 /致瘤率 (如YA株的为 2 8/ 5 8) ,亚二倍体细胞的致癌 /致瘤率很低 (其它 3株MDCK细胞的致癌 /致瘤率为 5 / 5 4 ) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。冻融裂解癌细胞系 (X株Hela、JA株Vero、M株BHK 2 1、YA株MD CK)的致癌 /致瘤性相应降低 ,极低致癌 /致瘤性细胞系 (M株或JC株MDCK)不会因冻融裂解而增加致癌 /致瘤性。证明MDCK细胞系冻融裂解物不致癌 ,降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (M ,JB ,JC株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞?

犬五联病毒活疫苗制备用犬肾细胞系的建库筛选与检定

以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)作为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的另外 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 6 7代的完整活细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的 2株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MD CK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 (2 3/ 5 9) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (WB和H株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞超二倍体YB株和亚二倍体与超二倍体KA株不能用作病毒活疫苗培养基质。找出了MDCK细胞系的染色体变异率、软琼脂中克隆形成率、对植物凝集素的凝集性和在裸鼠体内形成癌肿的潜力之间的可能相关性 ,发现细胞系染色体数目增加、克隆形成率增高、凝集性增强 ,则致癌

横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究

横纹肌样瘤（ＲＴ）的起源迄今仍是世界上悬而未决的重大难题。第一例ＲＴ发现于肾脏。但迄今发现的ＲＴ均难以复制成功。在纯化３代的肿瘤阴性对照猫肾和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率为０％（０／３２），肿瘤阳性对照Ｈｅｌａ细胞皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率为１００％（４０／４０）的前提下，ＢＨＫ－２１细胞皮下接种裸鼠均产生进行性生长的恶性肿瘤（６５／６５），其中染色体众数为４０±２（比率５８％～６８％）的ＫＡ株致ＲＴ比率为５２．３８％（１１／２１），具有两个染色体众数４０±２（比率４１％～５３．５）和７２±２（比率３１％～３５％）的ＹＡ株致ＲＴ的比率为８３．３３％（１０／１２），染色体众数为７３±３（比率４２％～５０％）的成瘤细胞体外再培养ＮＭ２８／ＹＡ株致ＲＴ的比率为７１．４３％（１５／２１），染色体众数为４２（比率２８％～３０％）的Ｍ株致ＲＴ的比率为０％（０／１０），致形态类似于分化比较好的平滑肌肉瘤的恶性肿瘤的比率为１００％（１０／１０），可见ＢＨＫ－２１细胞不能用作病毒活疫苗培养基质，可替代Ｈｅｌａ细胞用作恶性肿瘤阳性对照细胞。高变异率ＢＨＫ－２１细胞株皮下接种无胸腺裸鼠大多产生恶性ＲＴ（２?

应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测Ⅱ.JEV、PPV、PRRSV、PRV单项PCR检测方法的建立

在利用计算机设计出检测流行性乙型脑炎病毒 ( JEV)、猪细小病毒 ( PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV)、猪伪狂犬病病毒 ( PRV)的多联 PCR引物的基础上 ,分别进行各单项 PCR检测相应病毒试验 ,确定了各单项 PCR反应条件范围 ,并对各 PCR扩增产物进行了点杂交和部分测序鉴定。用单项 PCR对感染猪相关病毒的检测证实 ,本试验已经建立了有效、特异、敏感的检测 JEV、PPV、PRRSV、PRV的单项 PCR技术 ,为进一步建立多联

恶性横纹肌样瘤(MRT)的起源研究——高变异率HeLa细胞致裸鼠产生MRT的实验研究

：HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株、H株的染色体众数依次为60±3（超二倍体）、62±3（超二倍体）、68±3（超二倍体和亚四倍体）和78±2（亚四倍体），所占比率分别为72%～76%，69%，52%和40%。在纯化3代的肿瘤阴性对照二倍体猫肾（染色体众数38所占比率80%）和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌／致瘤率分别为0%（0／22）和0%（0／10），X株HeLa细胞冻融裂解物皮下接种裸鼠产生进行性缩小肿瘤的比率为20%（1／5）的前提下，HeLa细胞KB株、X株、NM20／X株皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率分别为100%（10／10），100%（25／25）和100%（5／5），H株细胞皮下接种裸鼠产生恶性肿瘤的比率为50%（5／10）。其中，只有HeLa细胞KB株10～11代（染色体结构畸变率高达20%，出现18%双着丝点和2%断片）以超高数量接种的1组4只裸鼠（0.17ml 12.75×107／鼠）才均形成MRT，特别是从染色体众数不同的3株HeLa细胞中筛选出致瘤性强的X株，连传20代后皮下接种裸鼠形成低分化肿瘤，定名为NM20／X株0代，其染色体众数因经裸鼠体内传代选育而明显增大（染色体众数为68±3，所占比率为52%），实体瘤手术切除后体外连传11代，再皮下接种裸鼠均形成MRT（5／5），但要求完形活细胞接种量要大（5～12×107／鼠），肿瘤产生?

应用多联PCR对引发猪繁殖障碍有关病毒的检测 Ⅰ.JEV、PPV、PRRSV、PRV多联PCR引物设计

首先在ＧinＢank查出日本乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、猪繁殖与 呼吸系统综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）和猪细小病毒（ＰＰＶ）基因组的所有已知序列，对各病毒基因区域进行同源性分析，结果各病毒基因组的结构特点，发现并确定了ＰＲＶ的gＨ基因区、ＪＥＶ的多聚蛋白基因区、ＰＲＲＳＶ的结构蛋白区和ＰＰＶ的ＶＰ２基因区为各自病毒保守序列。利用Ｇoldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计。

多联PCR诊断技术的建立及其对多种动物病毒的检测

多联PCR是指用多对引物在同一反应体系中对多个目的基因片段同时进行扩增,它能够捕获较多的核酸信息,完成较为复杂的核酸分析。与单项PCR相比,具有省时、省力、降低成本及减少污染等优点。目前,该项技术已在遗传疾病诊断、病原分析、连锁分析及法医学研究等方面逐步得到应用。 病毒性猪繁殖障碍是危害我国养猪业的一类重要传染病,主要是由狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和日本乙型脑炎病毒(JEV)

横纹肌样瘤的起源研究——高变异率BHK-21细胞致裸鼠产生恶性横纹肌样瘤的实验研究(续)

３讨论和结论３．１．不同核型细胞的致瘤性不同，细胞染色体数目变异大小和致癌／致瘤性强弱相关与肿瘤细胞系高变异率株在裸鼠体内的快速选育犬（Ｃａｎｉｓｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、猫（ＦｉｌｉｓＣａｔｕｓ）和叙利亚地鼠（Ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓａｕｒａｔｕｓ）...