HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡,在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用。Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用。本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制。方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系,通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达。RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化。结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml。Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05)。结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路,促进原发性肝癌的发生。Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catenin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关。可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生。这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关。

淡水样品中粘细菌的分离·纯化及其抗菌抗肿瘤活性研究

[目的]从黄龙溪水中分离与纯化黏细菌,并研究其抑菌活性和抗肿瘤活性。[方法]通过对细菌的形态特征和生理生化特性的分析来鉴定黏细菌,并通过抑菌圈法与MTT法分析黏细菌次级代谢物的生物学活性。[结果]首次从淡水中成功分离到黏细菌,且该菌属于黏球菌属。该菌的次级代谢物具有抑制痢疾杆菌、副伤寒、表皮葡萄球菌的作用,在一定范围内具有浓度依赖性。同时,粘细菌还具有较好的抗肿瘤活性。[结论]淡水样品同样可以分离出黏球菌,其抗菌活性和抗肿瘤活性在医药和农业上具有良好的应用前景。

浅析新大纲下提高生物化学教学质量的方法

生物化学是一门非常重要的医学基础课程。由于其信息量大,化学反应多,知识抽象,所以医学学生学习难度较大。而新大纲的教学学时的减少,更加大了教师的教学难度。在这种情况下,如何有效地提高生物化学的教学质量显得尤为重要。本文主要从课前准备、课堂教学及课后巩固三个方面初步探索提高生化教学质量的方法。作为一名生化教师,需要不断总结经验,改进教学方法,提高教学质量,以增加学生学习生化的积极性,使学生能系统地掌握生化知识,为将来学好临床打下坚实的基础。

HPV-16E6基因沉默对宫颈癌CaSki细胞的影响

目的:研究特异性抑制HPVE6基因的表达对宫颈癌CaSki细胞的影响.方法:构建表达HPV-16E6基因siRNA重组质粒,体外转染CaSki细胞后检测E6mRNA表达变化及E6主要作用靶分子P53的蛋白变化;流式细胞术分析细胞周期.结果:特异RNAi表达质粒转染CaSki细胞后明显降低了E6mRNA水平,且P53蛋白水平增高.流式细胞仪测定发现细胞停滞在G0-G1期,细胞增殖受到抑制.结论:采用RNA干扰技术能沉默CaSki细胞中整合的HPV-16E6基因的表达,使细胞中抑癌蛋白P53水平增高,导致肿瘤细胞生长停滞.

医学生物化学在高校成人教育中的教学探讨

医学生物化学是一门非常重要的医学基础课程。由于其信息量大,化学反应多,知识抽象,所以学生学习难度较大。成人教育是我国医学继续教育的重要组成部分,是临床医生提升自己的一个重要途径。虽然他们临床经验丰富,但是年纪偏大,工作繁忙,记忆力减退,更加大了教师的教学难度。在这种情况下,如何有效地提高生物化学的教学质量显得尤为重要。本文主要从教学方法、教学评价及教学管理等方面初步探索提高成人医学生化教学质量的方法。

成都地区黏细菌物种资源的分离和区域分布

利用兔粪诱导法、VY/4多菌灵琼脂培养基诱导法和无机盐琼脂培养基诱导法从来自成都各区县的水样、土样、兔粪、羊粪、朽木、风化岩石共35个样品中分离纯化黏细菌,经过生理、生化和形态学鉴定,共得到42株黏细菌。这42株黏细菌分属于黏球黏细菌属(Myxococcus)、粒状黏细菌属(Chondromyces)、囊球黏细菌属(Angiococcus)、原囊黏细菌属(Archangium)、蜂窝黏细菌属(Melittangium)、堆囊黏细菌属(Sorangium)和标桩黏细菌属(Stigmatella)7个属。按样品的采集地域、样品种类和生态环境进行了种群分布及多样性的统计分析,发现成都地区黏细菌的数量和种属均较多,特别是黄龙溪古镇河水一个样品就得到5个属的7株黏细菌。同时也发现旅游景区样品中黏细菌出菌率最高,其次是森林样品,草地样品和果树林样品出菌率最低。并且旅游景区黏细菌的得菌率和种属多样性明显高于其他环境。

乙肝病毒X蛋白对人肝细胞内β-catenin定位及转录活性的影响

目的研究HBx对Wnt/Wingless信号传导通路中主要信号分子β-catenin的影响,探讨HBV相关性HCC的发生机制。方法Ad-HBx转染人肝细胞系L02细胞,免疫细胞化学和Luciferase检测细胞中β-catenin细胞定位及活性变化。结果免疫细胞化学:转染重组HBx腺病毒前L02细胞中β-catenin仅在细胞质有少量表达,转染后胞质表达明显增强,并出现胞核的大量积聚;Luciferase检测:实验组TOP荧光素酶活性与对照组及空白组相比明显增强,为阴性对照的11倍(P<0.05),Ad-HBx感染后24 h和36 h的TOP荧光素酶活性无显著差异。结论Ad-HBx重组腺病毒在体外能有效转染人肝细胞系L02细胞,受感染细胞能有效表达HBx蛋白,HBx影响了人肝细胞系L02细胞中β-catenin的细胞定位及转录活性。

翻转课堂模式在生物化学与分子生物学教学中的应用

文章将翻转课堂模式应用于本科临床专业生物化学与分子生物学教学,研究和评价其效果。翻转课堂教学模式加强了教师在教学过程中对学生的引导和监督,较好地激发了学生的学习主动性,增强了学生的学习效果,发展其综合素质,是深化生物化学与分子生物学教学改革的有效手段之一。

成都样品中粘细菌的分离纯化

[目的]为进一步研究粘细菌中生物活性物质奠定基础。[方法]从成都各区县采集35份水样、土样、兔粪、羊粪、风化岩石以及朽木样品,预处理后使用不同方法进行分离纯化,观察分离粘细菌的营养细胞、粘孢子、子实体和菌落形态等特征,并进行鉴定归属。[结果]共分离纯化得到42株粘细菌,鉴定为粘球菌属、囊球粘细菌属、粒状粘细菌属、堆囊粘细菌属、蜂窝粘细菌属、标桩菌属和原囊粘细菌属,共7个属。其中,水样中粘细菌的出菌率最高。[结论]水样中有丰富的粘细菌资源。

低温冷冻对不同月龄大鼠生殖功能的影响

目的研究低温冷冻应激对下丘脑-垂体-性腺轴影响及不同衰老程度的影响。方法青年(2月龄)及老年(15月龄)雌性Wistar大鼠各20只,随机分为青年(2月龄)对照组(10只)和老年(15月龄)对照组(10只)和青年(2月龄)应激组(10只)和老年(15月龄)应激组(10只),共4组。对照组设定(16±1)℃,应激组设定(3±1)℃。各组接受应激刺激28d。各组均于应激结束后即刻以称重法了解生殖器官的发育变化。然后取血2ml,以放射免疫法测定血清雌二醇含量。结果与对照组相比,应激组大鼠卵巢重量和子宫重量和血清雌二醇水平均显著下降(P<0.05);老年组大鼠较青年组大鼠变化显著(P<0.01)。结论低温冷冻应激对不同月龄大鼠的应激损伤程度存在差异,应激对老年大鼠的外显行为和生殖内分泌功能的损伤程度均较青年大鼠严重,提示衰老是影响机体应激反应性的重要因素之一。

As_2O_3对脐血红系祖细胞HOXB6基因表达的调控作用

目的:探讨脐血造血干祖细胞向红系祖细胞增殖过程中HOXB6mRNA表达及As2O3对HOXB6mRNA表达的影响.方法:①采用外培养技术,以As2O3干扰造血干祖细胞,观察HSPC经促红素诱导后,CFU-E集落生成情况.②采用实时荧光定量PCR技术检测造血祖细胞增殖分化过程中HOXB6基因的表达.结果:①造血干祖细胞红系祖细胞增殖过程中,各组细胞HOXB6基因均表达.②与正常对照组比较,As2O3可下调HOXB6基因的表达.结论:①HOXB6可能是造血干祖细胞向红系祖细胞增殖分化中的调控基因之一.②As2O3能下调HOXB6基因的表达.

乙型肝炎病毒X基因在肝细胞凋亡中的作用

HBV基因组中的x基因能整合至肝细胞基因组,编码产生的HBx蛋白表现出复杂多样的生物学活性。近年来随着对HBX基因结构与功能的深入研究,发现HBx能够对肝细胞的凋亡起双向调控作用,对肝细胞肝癌(HCC)的发生发展具有重要意义。一方面,HBX能抑制肝细胞凋亡,使细胞过度增生,这对HCC的发展起着重要的作用,另一方面,HBx还具有诱导或促进肝细胞凋亡的作用,该作用在HBV相关疾病中的具体作用还不甚清楚。HBV x基因可能在肝细胞凋亡方面发挥着不同的作用,对揭示HCC发病机制有着重要意义。