感染/炎性反应对早产儿脑室周围白质软化发生的影响

脑室周围白质软化(PVL)是目前早产儿脑损伤的最主要类型,感染/炎性反应理论是近年来诠释早产儿PVL发病机制的主要学说之一。母婴感染可使患儿体内的细胞因子水平增高,不仅损伤脑血流自动调节功能,加重缺血,而且还诱导脑内胶质细胞的激活,进一步释放促炎性反应因子,并生成大量活性氧和活性氮,使脑室周围白质少突胶质细胞前体受损和丢失,促使PVL的发生和发展。

HIF-1α特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究

目的己知缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在缺氧状态下可通过调节内皮素-1(ET-1)的升高而参与肺血管内皮细胞损伤及肺动脉高压,最终导致肺出血。RNA干扰(RNAi)是双链RNA介导的序列特异性转录后同源靶基因沉默效应,目前RNAi技术已成为一种研究基因功能的有力工具,故拟通过构建人HIF-1α基因的特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,观测该载体在缺氧状态下对HIF-1α基因的干扰作用及对ET-1的抑制作用。方法选择6个(a^f)可能的人HIF-1α siRNA干扰位点,设计合成相应的特异性互补寡聚核苷酸链(A^F),采用基因克隆技术,将合成的(A^F)链序列定向插入真核表达载体中,构建成重组质粒HIF-1αsiRNA真核表达载体(A′~F′),通过脂质体法转染至体外人脐静脉内皮细胞(HUVECs)48h,再以CoCl2(100μM)模拟缺氧刺激3h后,观测siRNA对HIF-1αmRNA和HIF-1α蛋白表达的抑制效应及ET-1水平。结果①成功构建了分别针对6个HIF-1αsiRNA干扰位点(a^f)的重组质粒HIF-1αsiRNA真核表达载体(A′~F′);②该6组真核表达载体转染HUVECs并经CoCl2模拟缺氧刺激后,与未转染组比较,结果显示B′及D′组明显抑制HIF-1α mRNA及HIF-1α蛋白的表达,并部分抑制ET-1表达,而其余4组与未转染组比较并无差异。结论针对b及d干扰位点的B′及D′特异性siRNA真核表达载体,能明显干扰HIF-1α基因的表达,进而抑制ET-1的释放。该实验为下一步用B′、D′特异性siRNA真核表达载体在动物体内研究HIF-1α与新生儿缺氧性肺出血关系奠定基础。

姜黄素对缺血性脑室周围白质软化新生大鼠的脑保护作用

目的体内评估姜黄素对缺血性脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠的脑保护作用。方法通过双侧颈总动脉结扎制备2日龄缺血型PVL新生大鼠动物模型。将新生大鼠分为假手术组(sham组)、缺氧缺血组(HI组)、缺氧缺血前用药组(HI前用药组)和缺氧缺血后用药组(HI后用药组)。在双侧颈总动脉结扎前和后应用姜黄素50 mg/(kg.d),制模后48 h取材,分别观察脑病理组织学变化,检测氧化/抗氧化物质,检测Bcl-2、Bax以及剪切型Caspases-3、9蛋白表达。结果脑病理显示两个用药组的脑白质病变较HI组明显改善,其中重度白质病变的发生率分别较HI组降低了62.5%和43.8%,另有12.5%的脑白质完全正常;免疫组化显示用药组脑内的O4阳性少突胶质细胞(OL)前体和髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性成熟OL的积分光密度(IOD)值均较缺氧缺血组显著增高;姜黄素明显抑制由缺氧缺血引起的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和过氧化物酶(CAT)活性的下降、谷胱甘肽(GSH)含量减少,以及丙二醛(MDA)含量升高;用药组的Bcl-2合成量亦较HI组明显增加,Bax以及Caspases-3、9活化片段的合成量均较HI组明显减少。结论姜黄素对缺氧缺血引起的脑白质损伤具有良好的保护作用,与其调节脑内的抗氧化系统、以及调节脑内的凋亡相关蛋白的表达有关。

黄芪多糖对感染型脑室周围白质软化新生大鼠的脑保护作用

目的观察黄芪多糖对感染型脑室周围白质软化新生大鼠的脑保护作用,并初步探讨其作用机制。方法通过脑内注射脂多糖(LPS)1 mg/kg,建立2日龄感染型脑室周围白质转化(PVL)新生大鼠动物模型。将新生大鼠分为假手术对照组(Sham组)、PVL组、黄芪多糖治疗组。黄芪多糖组于模型制备后,通过腹腔注射黄芪多糖100 mg·kg-1·d-1,连续治疗3 d。在LPS脑内注射后第5天,观察脑病理组织学变化,检测脑组织TLR-4、i NOS蛋白表达以及一氧化氮含量。结果脑病理显示黄芪多糖组的脑白质病变较PVL组明显改善,其中重度白质病变的发生率较PVL组降低了30%,另有16.7%的脑白质完全正常;与PVL组比较,黄芪多糖治疗组的TLR-4、i NOS蛋白表达量较PVL组明显减少,一氧化氮含量明显降低。结论黄芪多糖对LPS引起的脑白质损伤具有良好的保护作用,与其抑制TLR4信号通路、减少i NOs和一氧化氮生成有关。

黄芪多糖抑制脂多糖诱导活性小胶质细胞对少突胶质细胞前体毒性作用的影响

目的观察黄芪多糖对细菌脂多糖(LPS)诱导的活性小胶质细胞对少突胶质细胞(OL)前体的毒性作用的保护效果,并探讨其作用机制。方法建立原代大鼠小胶质细胞与OL前体共培养模型,分为共培养对照组、共培养LPS组以及共培养LPS+黄芪多糖组。对共培养细胞经LPS 100 ng/m L诱导后48 h,分别采用流式细胞仪检测OL前体细胞凋亡率,硝酸还原比色法检测一氧化氮(NO)含量,Western blot法检测诱生型一氧化氮合酶(i NOS)和Toll样受体4(TLR4)的蛋白表达。结果与共培养对照组比,共培养LPS组细胞凋亡增加,培养上清中的NO含量明显升高,小胶质细胞内i NOS和TLR4蛋白合成量明显增加。共培养LPS+黄芪多糖组OL前体的细胞凋亡率显著降低,因LPS诱导而增高的NO含量以及i NOS、TLR4蛋白的合成量显著抑制。结论黄芪多糖能抑制LPS诱导活性小胶质细胞对OL前体的毒性作用,其机制可能与抑制TLR4信号通路、减少i NOS和NO生成有关。

少突胶质细胞成熟依赖易损性的机制

少突胶质细胞(OL)是中枢神经系统髓鞘形成细胞,脑白质的OL对缺氧缺血损伤高度敏感,且具有明显的成熟依赖性,是早产儿脑室周围白质软化(PVL)病变中关键的靶细胞,在PVL的发病机制中起着非常重要的作用。了解OL成熟依赖易损性的机制,有助于为PVL的预防和治疗提供新的思路和策略。

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、easpase-3表达的影响，探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制。方法以不同浓度醋酸铜（0、2、20、40、80、160、240、320μmol／L）诱导体外培养大鼠神经元48h。MTT比色法检测细胞活力，Hoechst 33342／PI和Annexin—V／PI法检测神经元凋亡；Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达。结果神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低。醋酸铜低浓度诱导组（0～80μmol／L），神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多（P〈0．01）；caspase-3表达上调，Bcl-2表达下调，Bcl-2／Bax比值下降（P〈0．01）。醋酸铜高浓度诱导组（≥160μmol／L），神经元坏死较凋亡更为明显。结论Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用。神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关。

小剂量牛肺表面活性物质结合高频震荡通气对新生儿呼吸衰竭临床症状及呼吸状态的改善效果观察

目的探讨小剂量牛肺表面活性物质联合高频震荡通气(HFOV)对新生儿呼吸衰竭(NRF)临床症状及呼吸状态的改善效果。方法选取88例NRF患儿为研究对象,根据其就诊时间随机将其分成研究组(A组,n=44)和对照组(B组,n=44)。B组予以常规治疗联合HFOV方案,A组则在上述治疗基础上联合小剂量牛肺表面活性物质经气管插管给药方案。比较两组患儿治疗前(T0)、治疗后3小时(T1)、治疗后6小时(T2)、治疗后24小时(T3)等不同时间点呼吸功能指标及动脉血气指标变化情况,记录其机械通气时间、氧疗时间及总住院时间差异,分析其治疗前后症状评分及治疗后转归、并发症发生情况。结果 1T1-T3时,两组新生儿Pa O2水平均较T0时显著提升,且Pa CO2及氧合指数(OI)、吸入氧气体积分数(Fi O2)、MAP等呼吸功能指标均较T0时降低(P<0.05);其中A组新生儿各指标改善幅度大于B组新生儿(P<0.05);2A组新生儿机械通气时间、氧疗时间及总住院时间均短于B组新生儿(P<0.05);3治疗后24小时,两组患儿呼吸衰竭症状评分均较治疗前降低(P<0.05),其中A组患儿降幅大于B组患儿(P<0.05);4两组新生儿在病死率、治愈率及并发症发生率对比上均无统计学意义(P>0.05)。结论对NRF患儿予以小剂量牛肺表面活性物质经气管插管给药联合HFOV疗法,安全有效,可有效提高患儿呼吸功能,对缓解其相关症状、改善呼吸状态等具有积极影响。

血清S100B蛋白和神经元特异性烯醇化酶在新生儿缺氧缺血性脑病早期诊断中的应用价值

目的探讨血清S100B蛋白和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)早期诊断及判断预后的应用价值。方法选取2010年1月至2014年12月深圳市儿童医院新生儿科住院的HIE的患儿和健康新生儿作为研究对象。健康对照组40例,HIE组97例,其中轻度组41例,中度组30例,重度组26例。入组的新生儿均于出生后的第1、3、7天晨起空腹时采集静脉血测定血清S100蛋白和NSE含量。结果 HIE组患儿各个时间点S100B蛋白和NSE含量均明显高于健康对照组(P均<0.05)。治疗前中、重度组血清S100B蛋白和NSE含量明显高于轻度组(P<0.05)经治疗后血清S100B蛋白和NSE含量均明显下降(P均<0.05)。血清S100B蛋白含量与NSE含量呈正相关(P<0.05)。结论血清S100B蛋白和NSE在HIE的早期诊断、损伤程度及预后的判断有重要意义。

早产儿真菌性败血症18例临床分析

严重感染是新生儿死亡的主要原因之一。近年来随着围生医学的加速发展,气管插管、中心静脉置管等有创性操作增多,经验性抗生素尤其是广谱抗生素治疗的广泛应用,新生儿真菌性败血症的患病率有上升趋势。同时,早产儿、低出生体质量儿等高危新生儿的存活率提高,住院率上升,住院时间延长也易导致真菌感染。本研究回顾性分析收治的经血培养证实为真菌性败血症新生儿的临床资料,探讨真新生儿真菌性败血症的高危因素、临床特征、治疗效果。

早期脑脊液中转录因子Olig1水平与早产儿脑室周围白质软化症的关系

目的探讨早期脑脊液中Olig1转录因子水平与早产儿脑室周围白质软化症(PVL)的关系。方法对生后1周内行头颅彩超发现有侧脑室周围强回声的早产儿分别在生后第7及14天取脑脊液标本,ELISA检测脑脊液中Olig1、髓鞘碱性蛋白(MBP)、蛋白脂质蛋白(PLP)及髓鞘相关糖蛋白(MAG);通过头颅彩超和多次MRI确诊PVL 8例(PVL组),正常早产儿34例作为对照组。结果 PVL组患儿在生后第14天脑脊液中Olig1水平较第7天明显下降(P<0.05);同时PVL患儿在生后第14天脑脊液中MBP、PLP和MAG均较第7天明显降低;而正常对照组在生后第14天脑脊液的Olig1转录因子水平较第7天明显增加(P<0.05),第14天脑脊液MBP、PLP和MAG水平也较第7天显著增加(P<0.01);在生后第14天PVL组患儿脑脊液Olig1、MBP及MAG水平明显低于正常对照组(P<0.01)。结论 Olig1转录因子水平下降可能与PVL发生发展有关。

毛细支气管炎患儿血清乳酸脱氢酶水平的变化及临床意义

目的探讨毛细支气管炎患儿血清乳酸脱氢酶(LDH)水平及其临床意义。方法将131例毛细支气管炎患儿按临床症状分为重症组和轻症组两组,并与正常对照组进行比较。结果与正常对照组比较,毛细支气管炎患儿LDH显著升高(P<0.05);入院时,轻症组与重症组LDH分别为316.3±84.6 IU/L、567.8±101.5 IU/L(P<0.05),经过1周治疗后轻症组与重症组LDH分别为188.6±59.5 IU/L、195.4±63.3 IU/L(P<0.05);而且治疗1周后轻症组临床症状均缓解,而重症组有7例患儿临床症状无缓解甚至加重,LDH水平进一步升高。结论毛细支气管炎患儿血清LDH的改变可以提示临床症状轻重,对预后判断也具有临床意义。

浅谈我国会计信息化的30年发展

我国的会计电算化从1979年开始起步并逐步发展为会计信息化。30多年来,会计信息化在制度建设、理论研究、人才培养、产业发展等方面取得了巨大的成就。本文从会计信息化理论研究、会计信息化技术及其应用、会计信息化政府监管与市场发展、会计信息化人才培养与教育四个方面对我国会计信息化的发展历程作一简单总结,以期对会计信息化的发展有所裨益。

HIF-1αsiRNA重组腺病毒对缺氧肺微血管内皮细胞HIF-1α和ET-1表达的影响

目的研究缺氧诱导因子-1αsiRNA重组腺病毒(Ad/siHIF-1α)对缺氧肺微血管内皮细胞(RPMVECs)HIF-1α及其下游基因ET-1表达的影响。方法原代培养肺微血管内皮细胞(RPMVECs);应用HEK293细胞大量扩增Ad/siHIF-1α。将RPMVECs分6组:A组(正常对照:常氧下5%CO2、95%空气、37℃培养);B组(含100μmol/L COCl2培养基培养4h);C组(Ad/siHIF-1α感染24h后,加入COCl2培养4h);D组(Ad/siHIF-1α感染48h后,加入COCl2培养4h);E组(Ad/siHIF-1α感染72h后,加入COCl2继续培养4h);F组(单纯腺病毒感染72h后,加入COCl2培养4h)。采用荧光定量PCR法检测HIF-1α和ET-1mRNA表达;Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达;ELISA法检测ET-1蛋白表达。结果与B组比较,C、D及E组HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白表达显著下调,差异有显著性(均P<0.05);与B组比较,C、D及E组ET-1mRNA、ET-1蛋白也相应下调,差异有显著性(均P<0.05)。结论Ad/siHIF-1α能够有效沉默缺氧诱导的大鼠肺血管内皮细胞HIF-1α基因,继而影响其下游ET-1基因的表达,为下一步在动物体内研究HIF-1α及其下游基因ET-1在新生儿肺出血发病机制中发挥作用。

低温缺氧/复温供氧损伤性人脐静脉内皮细胞缺氧诱导因子-1α的表达

目的检测低温缺氧/复温供氧缺损的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达。方法原代培养HUVECs随机分为对照组(C组)和三个实验组(H2,H4,H4R2组),H2和H4组予以单纯低温(10℃)缺氧(5%O2)培养2及4h,H4R2组低温缺氧4h后,再于常温(37℃)高氧(95%O2)环境培养2h。结合形态学和细胞存活率反映HUVECs损伤程度,采用免疫组化(SP法)检测HIF-1α蛋白表达水平。结果H4R2组细胞膨胀呈球形,细胞存活率明显下降(与另3组比较,P<0.01);H2,H4组HIF-1α表达升高(与C组比较,P<0.05),H4R2组下降(与H2,H4组比较,P<0.05),但仍较C组高。结论低温缺氧/复温供氧可致HUVECs损伤,且主要发生于复温供氧期,HIF-1α参与了此过程。

浅谈我国增值税的转型

经济决定税制,税制反作用于经济,税制必须与经济发展相适应。我国市场经济的进一步发展已对增值税转型提出了迫切要求。从我国当前的经济形势和税收实际情况看,生产型增值税转变为消费型增值税的改革势在必行,应以消费型增值税作为进一步改革的目标,本着积极稳妥的原则,使增值税税制适应并促进社会主义市场经济体制的完善和发展。

人脐静脉内皮细胞中还原型辅酶Ⅱ氧化酶对缺氧诱导因子-1α及内皮素-1表达的影响及其机制探讨

目的研究人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶对缺氧诱导因子(HIF)1α和内皮素(ET)1表达的影响及其机制。方法HUVECs培养液共25瓶,分为A(常氧)组、B(缺氧)组、C(NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素+常氧)组、D(可迅速降解HIF1α的外源性H2O2+缺氧)组及E(H2O2+夹竹桃麻素+常氧)组,每组各5瓶。各组处理3h后收集培养上清液及提取细胞总蛋白,分别用WesternBlot法和ELISA法检测细胞中HIF1α蛋白水平和上清液中ET1水平。结果A组HIF1α灰度扫描比值为0.336±0.012,ET1值为5.87±2.22pg/mL,均呈低水平表达;B及C组HIF1α灰度扫描比值分别为0.773±0.018及0.888±0.022,ET1值分别为95.38±8.06pg/mL及33.67±4.21pg/mL,水平均显著高于A组(均P<0.05);D及E组HIF1α灰度扫描分别为0.330±0.016及0.318±0.034,比值呈低水平表达,但ET1值分别为108.43±8.38pg/mL及109.66±5.80pg/mL,水平均显著高于A组(均P<0.05)。结论缺氧或夹竹桃麻素可诱导HUVECs的HIF1α和ET1表达升高,H2O2可抑制HIF1α表达,但仍使ET1表达升高。其机制可能是作为氧感受器的NADPH氧化酶通过改变细胞内氧化还原状态而使HIF1α表达发生变化,其下游基因ET1表达除受HIF1α调控外,还存在H2O2的调控机制。

双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎新生大鼠肠上皮γδT淋巴细胞的影响

目的探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生大鼠肠道上皮细胞损伤的保护作用机制。方法建立3日龄新生大鼠NEC模型,新生大鼠总共24只,分为正常新生大鼠组(正常组)、正常新生大鼠口服双歧杆菌组(正常口服双歧杆菌组)、NEC组和NEC口服双歧杆菌组,每组6只,在建模72 h后对十二指肠下端至直肠上端肠道组织进行肠道病理评估和肠道γδT淋巴细胞流式细胞学检测。结果肠道组织病理学结果显示,正常组及正常口服双歧杆菌组的肠道组织结构正常,NEC口服双歧杆菌组肠道组织损伤较NEC组有所改善。同时流式细胞学检测结果显示,正常口服双歧杆菌组γδT淋巴细胞数量较正常组增加,NEC组肠道上皮γδT淋巴细胞数量较正常组明显减少,而NEC口服双歧杆菌组γδT淋巴细胞数量较NEC组增加。结论双歧杆菌可改善NEC新生大鼠肠道上皮损伤,这种保护作用可能与其能增加肠道上皮γδT淋巴细胞数量有关。

跨期摊提费用在新旧会计准则变化的思考

待摊费用和预提费用是旧会计准则中的两个重要的会计科目,但是在2006年我国新颁布的《企业会计准则(2006)》和《企业会计准则-运用指南(2006)》中均未这两个会计科目。对此,许多专家学者提出了不同的看法。本文针对跨期摊提费用在新旧会计准则的变化提出建议。

粉尘螨滴剂联合孟鲁司特钠治疗对粉尘螨皮肤点刺试验阳性支气管哮喘患儿的效果

目的研究粉尘螨滴剂联合孟鲁司特钠治疗粉尘螨皮肤点刺试验阳性支气管哮喘患儿的疗效及其对患儿炎症状态和停药后复发率的影响。方法将2015年3月至2016年3月深圳市儿童医院和深圳市宝安区松岗人民医院收治的86例粉尘螨皮肤点刺试验阳性哮喘患儿依据随机数字表法均分为观察组(粉尘螨滴剂联合孟鲁司特钠)和对照组(孟鲁司特钠)进行治疗,疗程12个月,比较两组患儿治疗6、12个月时自我症状积分,治疗期间哮喘急性发作和药物不良反应发生情况,治疗12个月时炎症指标、肺功能,治疗结束后12个月内哮喘复发率。结果治疗前、治疗3个月、治疗6个月和治疗12个月,两组患儿自我症状积分均呈下降趋势,组内不同时间比较差异有统计学意义(P<0.05),且观察组治疗3、6、12个月时自我症状积分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间,观察组哮喘急性发作次数、平均持续时间均明显少于对照组(P<0.05),其中两组间平均轻、中度哮喘发作次数差异有统计学意义(P<0.05),两组平均重度哮喘发作次数差异无统计学意义(P>0.05);治疗12个月时,两组嗜酸性粒细胞计数、血清白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13水平及呼出气一氧化氮浓度(FeNO)均降低(P<0.05),且观察组血清IL-4、IL-5、IL-13、FeNO水平及治疗前后差值均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗期间两组不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05);随访1年,观察组和对照组完全控制率分别为90.70%和72.09%(P<0.05),复发率分别为6.98%和23.26%(P<0.05)。结论粉尘螨滴剂联合孟鲁司特钠治疗粉尘螨皮肤点刺试验阳性支气管哮喘患儿可有效调节其机体免疫状态,减轻炎症反应水平,缓解患儿症状,控制哮喘发作,改善患儿肺功能,降低停药后复发率,是一种安全有效的治疗儿童哮喘的方案。