长江口南岸水域银鲳及幼鱼资源动态监测

对上海市长江口南岸水域银鲳成鱼资源动态监测的结果表明，近年来，尤其是2003～2005年春汛期间．银鲳的成鱼资源呈现逐步恢复的态势．成鱼平均体重达200g以上，平均叉长达160mm以上．基本符合东海区渔政渔港监督管理局制定的体重150g以上的可捕标准，说明对银鲳的保苗措施取得了一定成效：对银鲳幼鱼资源同步监测的结果表明，1998～2005年银鲳的幼鱼资源变动很大，幼鱼的首次出现日期逐年提早，2002年的发生时间最早，为5月8日，2003～2005年稳定在5月20日左右。为此．建议将保苗休渔的起始日期提前1个月.

密度、营养与河蟹蟹种生长及性早熟之间的相关关系

设计４个不同密度组和以动、植物性饲料饲喂的２个组，在２０．８～３０．４℃自然水温下饲养１１９ｄ。方差分析的结果表明，蟹种的个体生长率随放养密度的递增而下降，组间差异极为显著（Ｐ＜０．０１），性早熟比例与密度递增组间差异不明显；单一饲料，即植物性或动物性饲料，对生长发育不利，对降低性早熟比率也不利。每千平方米放养０．９ｋｇ大眼幼体有利于控制河蟹性早熟。

黄鳝体内睾酮、雌二醇和炔诺酮含量的检测分析

检测并分析了黄鳝体内睾酮、雌二醇和炔诺酮的含量。结果显示,野生和人工饲养的黄鳝,其血清中睾酮、雌二醇的平均值为0.055 ng/ml和22.43 pg/ml,野生黄鳝中睾酮、雌二醇的含量普遍高于人工饲养的黄鳝,Student's t检验差异显著。在野生及人工饲养的黄鳝体内均未检出炔诺酮。饲养试验的结果表明,如果黄鳝摄食了添加一定浓度炔诺酮的饲料,能检出其体内炔诺酮的残留。

鲤春病毒血症病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法的建立

为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的SVCV N蛋白基因的保守性序列设计并合成特异性引物,建立了该病毒的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.99,在102拷贝/μL^109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。该方法对传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、传染性皮下及组织坏死病毒和白斑综合征病毒其他水生动物病毒核酸扩增结果均为阴性,特异性强;该方法对SVCV检测下限为100.76 TCID50/m L,比常规PCR灵敏100倍;批内和批间的变异系数均小于7.6%,重复性好。本研究建立的荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,对SVCV的快速检测及定量检测具有重要意义。

饲料中胆固醇的添加量及蛋白含量对蟹种生长及性早熟的影响

饲料中添加 ０ ５％～ １.５％的胆固醇，河蟹蟹种明显优于不添加组和高含量组，组间差异显著（ｐ＜０．０１）。性早熟比与生长产生基本相同的规律。以植物蛋白源配制的各组饲料，３０％蛋白组河蟹生长显示出较优的水平（ｐ＜０．０１）。性早熟比组间无显著差异（ｐ＜０．０５）。

13种中药对荧光假单胞菌的体外抑菌效果

【目的】探讨13种中药对荧光假单胞菌（Pseudamonas fluoroscens）的体外抑菌效果,为其在鱼类赤皮病防治实践中的应用提供参考依据。【方法】采用平板打孔法检测荧光假单胞菌对13种中药提取液的敏感性,用二倍稀释法测定不同中药对荧光假单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,并选择抑菌效果最佳的中药为试验药物,进一步研究不同质量浓度和静置时间对中药杀灭荧光假单胞菌效果的影响。【结果】荧光假单胞菌对乌梅、大黄高度敏感,对芦根、黄柏、青皮、车前草、熟地黄、地榆等中度敏感,对柴胡、决明子、贯众、麦冬、青蒿等不敏感。不同中药提取液对荧光假单胞菌的体外抑菌效果排序为：乌梅〉大黄〉熟地黄=地榆〉车前草〉黄柏〉芦根=青皮,其中以乌梅的杀菌作用最强,MIC和MBC分别为7.813和15.625 mg/m L。随质量浓度的增加,乌梅提取液对荧光假单胞菌杀灭效果不断增强,14.00~18.00 mg/m L的乌梅提取液能迅速杀灭病原菌,且静置32 h后仍具有较强的药效作用。【结论】乌梅提取液对荧光假单胞菌的抑菌效果最佳,在14.00~18.00 mg/m L的条件下能够快速杀灭病原菌,在实际生产中可适当加大使用剂量,充分发挥其迅速有效的治疗效果。

鳜鱼传染性脾肾坏死病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立检测鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)的方法,本研究根据GenBank中ISKNV MCP基因的保守序列设计并合成1对引物和1条TaqMan探针,建立了该病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,以重组质粒标准品构建的标准曲线的相关系数为0.994,具有良好的线性关系,检测下限为20拷贝/μL,是常规PCR的1 000倍;特异性强,只有ISKNV呈阳性,而与流行性造血器官坏死病毒、鲤春病毒血症病毒和草鱼呼肠孤病毒均无交叉反应;重复性好,批内和批间的变异系数均小于0.7%。本研究建立的ISKNV TaqMan荧光定量PCR方法对ISKNV的快速检测及定量检测具有重要意义。

孔雀石绿浸泡几种鱼类受精卵及苗种后的降解规律研究

为研究孔雀石绿在几种鱼类受精卵、苗种体内的降解规律,用孔雀石绿溶液对受精卵和苗种进行浸泡处理,然后检测显性孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿的残留量。试验结果:用10.0 mg.L-1的孔雀石绿浸泡异育银鲫、团头鲂的受精卵10 min,至仔鱼孵出后第31、45 d,在两者中均未检出显性孔雀石绿(检出限为O.5μg/kg);至第45 d,两者中均未检出隐性孔雀石绿。用10.0 mg/L的孔雀石绿分别浸泡异育银鲫的鱼苗、鱼种10、25 min,至浸泡后第10、11周,在两者中均未检出显性孔雀石绿;至第16、38周,两者中均未检出隐性孔雀石绿。用1.0 mg/L的孔雀石绿浸泡黄颡鱼鱼种30 min,至浸泡后第12周,未检出显性孔雀石绿;但至第52周,隐性孔雀石绿仍有5.34μg/kg的残留量。结果表明,在水产动物体内,隐性孔雀石绿的降解速度要明显慢于显性孔雀石绿。

一株鲤春病毒血症病毒的初步分离及鉴定

为了检测上海市某鲤鱼养殖场的疑似患病鲤鱼是否携带鲤春病毒血症病毒(SVCV),采用鲤鱼表皮瘤细胞系(EPC)进行病毒分离和分子PCR方法对SVCV的糖蛋白基因保守区域进行扩增。试验结果:被病毒感染的EPC细胞呈现细胞圆缩、颗粒增多、大量脱落等病变特征,且该株病毒毒力较强,其病毒滴度TCID50/0.1 mL为105.76。分子方法扩增出714 bp和606 bp的SVCV的保守片段。试验采用细胞培养技术和分子PCR方法检测样品是否携带病毒性病原,建立了一种较为简捷高效的检测方法。该方法适合在短时间内完成大量样品的病原学诊断及检疫任务,具有良好的应用前景。

长江入海江段(南支)浮游植物区系分布调查

从渔业水质监测要求出发 ,于 2 0 0 1年和 2 0 0 2年 5月份和 8月份对长江口水域浮游植物进行监测调查 ,并分析了主要种群的数量分布情况。其结论为 :1.长江口水域浮游植物的细胞总量 8月份大于 5月份 ,8月份平均细胞总量为 48.16× 10 7个 /m3 ,5月份平均细胞总量为 5 .2 2× 10 7个 /m3 ;2 .该水域浮游植物细胞总量分布很不均匀 ,长江口外侧大于内侧 ;3.调查期间出现的优势种为中肋骨条藻、直链藻及小环藻。

杭州湾咸淡水河蟹人工育苗技术探讨

1995年,用杭州湾咸淡水和池塘养殖的长江水系中华绒螯蟹亲蟹,在水温10～14℃、海水比重1.0125条件下催产,加温孵化;溞Ⅰ幼体放养密度为20万～40万/m^3,以丰年虫无节幼体为主要饵料,水温24.5～25.5℃。390m^3育苗水体中,两茬生产大眼幼体110.4kg,每立方水体出苗量0.28kg。

荧光假单胞菌疫苗对异育银鲫的免疫保护效应

为探讨荧光假单胞菌疫苗对异育银鲫的免疫保护作用,为其在赤皮病防治上的应用提供理论依据,以福尔马林灭活的荧光假单胞菌(Pseudamonas fluoroscens)全菌疫苗、菌体外膜蛋白(OMP)疫苗作为免疫原,以平均体重100.0g±15.0g的健康异育银鲫(Carassius auratus gibelio)为试验对象,通过腹腔注射免疫原(浓度分别为1.0×108/mL、0.2mg/mL)免疫,剂量为0.2mL/尾,对照组注射等量灭菌生理盐水。分别在免疫注射1、2、4、7、14、21、28、35d后对试验鱼尾静脉采血,进行外周血细胞计数、吞噬活性和抗体效价的测定。结果2种免疫原均可诱导异育银鲫外周血液红细胞、白细胞数量增加,吞噬细胞的吞噬活性和血清抗体效价均升高。免疫注射35d后活菌攻毒,福尔马林灭活荧光假单胞菌苗(F-PF)组的免疫保护率为61.1%,OMP组的免疫保护率为72.2%,OMP组的免疫保护效果优于F-PF组。证明2种免疫原均通过促进异育银鲫血细胞增殖,产生特异性抗体的方式提高机体的免疫保护力。

呋喃唑酮代谢物(AOZ)在异育银鲫、团头鲂鱼种体内降解规律的初步研究

为研究呋喃唑酮代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)在异育银鲫、团头鲂鱼种体内的降解规律,用呋喃唑酮按30 mg·kg-1·d-1的水平投喂药饵,连喂7 d后随机抽取试验鱼,取肌肉组织进行连续采样检测,运用HPLC/MS/MS检测并分析AOZ在两种鱼类体内的消除规律。结果发现:14周后,AOZ的浓度在异育银鲫体内降解到检出限(0.5μg/kg)以下;36周后,在团头鲂体内降解到检出限以下。这一结果提示,一旦养殖鱼类被呋喃唑酮污染,很难在短时间内消除,会影响水产品的质量安全并对人体健康造成危害。

上海地区2013—2018年鲤春病毒血症病毒的分离和进化特征分析

为了解上海市近年来鲤春病毒血症病毒(SVCV)的流行情况,探明上海市SVCV变异进化规律,对上海地区2013—2018年送检的养殖鲤( Cyprinus carpio )、锦鲤( Cyprinus carpio koi )、金鱼( Carassius auratus )等鲤科鱼类样品中的SVCV进行了病毒分离、鉴定和基因序列进化分析。结果显示:上海地区近6年来每年均有SVCV检出,从125份样本中共分离获得了18株SVCV毒株,阳性率为14.4%。各毒株接种草鱼卵巢细胞(grass carp ovary, CO)后均可以导致明显的细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)。免疫荧光实验也表明,病毒结构蛋白N、P、M和G均在感染细胞中高水平表达。进一步通过巢式PCR扩增和序列测定,获得了18株分离株G基因606 bp的核酸序列。进化分析显示,上海地区的SVCV分离株均隶属于Ia分支,株间核酸序列同源性较高,但不同分离株之间核酸序列也呈现出一定程度的差异。其中2015年之后的分离株均聚类为同一小分支,提示其从同一祖先进化而来。实验结果显示,SVCV在上海地区持续以低水平流行并在不断进化。研究提示,养殖户应改变传统的养殖模式,提高防病意识和管理水平,相关部门也需要加强持续监测,以减少和控制鲤春病毒血症(SVC)的发生和流行。

上海市7月水产养殖病害预测预报

7月份是本市养殖鱼、虾、蟹、鳖等水生动物的生长旺季；但此时也是各类病原微生物滋生蔓延的高峰期。水产养殖中的细菌洼败血症、烂鳃病、肠炎病、虾烂鳃病、虾红腿病、甲鱼穿孔病、甲鱼腐皮病等细菌洼疾病的发病率将显著增加；同时虾类白斑综合征、桃拉综合征等病毒性病害将进人集中暴发期。

鳜源致病性荧光假单胞菌的分离与鉴定

为确定导致鳜(Siniperca chuatsi)细菌性感染死亡的病原,从患病濒死的鳜肝中分离出一株优势菌B01,经人工回感实验确定分离菌的致病性,并利用VITEK-2全自动微生物鉴定仪及16S rRNA序列分析对纯培养细菌进行鉴定。此外,对分离的菌株进行药敏实验。研究结果表明,菌株B01对鳜鱼具有致病性。经VITEK-2全自动微生物鉴定仪鉴定菌株B01为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),并在紫外光下可以产生荧光。进一步的16S rRNA基因序列和系统发育分析表明,该菌与荧光假单胞菌同源性达到了97%以上。药物敏感性实验结果显示,该分离株对恩诺沙星、诺氟沙星、链霉素和四环素等6种药物高度敏感。

鱼类新型口服疫苗的研究概况

水产养殖业的发展与水生病害的防治密切相关,传统鱼病的防治多使用抗生素及减毒灭活疫苗。随着新技术和新方法等交叉学科的应用,尤其是近年来分子免疫学和基因工程技术的发展,鱼类疫苗也得到了快速发展。口服免疫比传统注射和浸泡免疫快捷方便,为理想的免疫方式。文章主要围绕口服疫苗的来源不同,对鱼类口服疫苗的新技术及新方法的国内外研究进展作一综述。