微小根毛霉耐热α-淀粉酶基因的克隆与高效表达(英文)

【目的】开发具有高表达活力的耐热耐酸新型真菌α-淀粉酶,研究其酶学性质和催化活性,探讨其潜在工业应用潜力。【方法】采用RT-PCR从嗜热真菌微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）中克隆耐热α-淀粉酶基因,并命名为RpAmy。以质粒pPIC9K为表达载体,将α-淀粉酶基因（RpAmy）转入毕赤酵母（Pichia pastoris）表达宿主KM71,进行异源表达,并测定动力学参数和酶学性质,分析水解淀粉的产物。【结果】克隆得到嗜热真菌微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）耐热α-淀粉酶基因,其开放阅读框全长1416 bp,编码471个氨基酸,与米根毛霉α-淀粉酶的氨基酸序列相似性最高（56.0%）。RpAmy在毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71中表达,最高酶活达到32100.0 U/mL,蛋白表达量为1.5 mg/mL;测定纯化后RpAmy比活力、Km和Vmax,分别为6745.9 U/mg、2.26 mg/mL、0.2875 mg/mL·min;最适pH和最适温度分别为pH 4.0、70℃;具有较宽的pH耐受性（4.0~9.0）和较高的温度耐受性（60℃）;水解可溶性淀粉产物主要为麦芽糖（69.0%,w/w）和葡萄糖（22.0%,w/w）。【结论】从微小根毛霉（Rhizomucor pusillus）中克隆得到α-淀粉酶基因（RpAmy）,其可在毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71中高效异源表达并得到α-淀粉酶RpAmy。该酶具有较好的耐酸耐热性质,并能水解淀粉产生高麦芽糖含量的糖浆,在工业应用方面具有很大的潜力。

一株高产二羟基丙酮菌株的筛选及鉴定

从腐烂的水果中筛选到一株能发酵生产1,3-二羟基丙酮的菌株。基于生理生化鉴定及16S rRNA基因序列分析结果,确定该菌属于弗托氏葡萄糖酸杆菌,将其命名为Gluconobacter frateurii HD924。初步发酵实验表明该菌能发酵80 g/L的甘油产生63.04 g/L的1,3-二羟基丙酮。

墨脱公路自然环境与山地灾害

西藏墨脱公路已历经 5 0多年的调查研究 ,并在 2 0世纪 70年代一度实施 ,均无功而返。墨脱县至今仍然是全国唯一不通公路的县。墨脱公路的艰巨性在于当地地貌环境特殊 ,气候条件恶劣 ,地质背景复杂 ,尤其是山地灾害广泛发育 ,且灾害种类齐全 ,大多具有相当规模。文章介绍山地灾害发育的环境 ,论述山地灾害的种类及特点 ,并根据地质条件提出公路选线应采取的措施。

谈如何创新高中物理电学实验教学

在高中阶段的物理实验当中,电学实验属于一个重点内容,同时也是最近几年高考物理一个考查热点。物理教师在开展电学实验方面教学期间,对现有教学方法以及教学策略加以创新,这是提升高中生的学习效果以及当前教学质量的有效手段,更是新课标下物理教师需要重点探究的课题。本文旨在对高中物理当中电学实验有关教学策略的创新进行探究,希望可以给实际教学提供相应帮助。