柴胡疏肝散对NAFLD大鼠肝脏脂质代谢及AMPK/SIRT1通路的影响

目的:观察柴胡疏肝散对高脂饮食建立的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织脂质代谢和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/sirtuin 1(SIRT1)通路相关蛋白的影响。方法:选用SPF级SD大鼠24只,随机分为正常(NC)组、高脂(HFD)组和柴胡疏肝散(CSP)组,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,用药组大鼠同时灌服柴胡疏肝散浸膏剂(9.6 g·kg^(-1)·d^(-1))进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清和肝匀浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)以及血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)含量;HE染色观察肝组织病理损伤变化;油红O染色观察肝组织脂质蓄积程度,透射电镜观察肝细胞内超微结构变化;Western blot法检测肝组织AMPK、磷酸化AMPK(pAMPK)、SIRT1和解偶联蛋白2(UCP2)的蛋白水平。结果:大鼠肝组织HE染色、油红O染色和电镜结果证实肝细胞脂质蓄积严重,提示NAFLD大鼠模型建立成功。与NC组比较,HFD组血清和肝组织匀浆TC、TG含量显著升高(P<0.01),血清AST含量显著升高(P<0.01),肝组织p AMPK和SIRT1蛋白水平显著降低(P<0.01),UCP2蛋白水平显著升高(P<0.01);与HFD组比较,CSP组大鼠肝组织脂质蓄积程度明显改善,血清和肝匀浆TC和TG含量呈下降趋势,其中肝匀浆TC和TG含量下降显著(P<0.05),血清AST含量显著降低(P<0.05),肝组织p AMPK和SIRT1蛋白水平显著升高(P<0.05),UCP2蛋白水平显著下调(P<0.01),但各组大鼠总AMPK蛋白水平差异无统计学显著性。结论:柴胡疏肝散能够改善16周高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活AMPK/SIRT1通路有关。

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞TLR4/p38MAPK信号通路的影响

目的探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝细胞TLR4/p38MAPK信号通路的干预作用,从炎症角度揭示疏肝健脾方药抗大鼠NASH的作用机制。方法选用SPF级SD大鼠120只,随机分为8组。采用高脂饲料喂养建立大鼠NASH模型,26 w后对肝组织进行HE染色,油红O染色,全自动生化分析肝功血脂改变,ELISA检测血清白介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;采用离体循环灌注Ⅳ型胶原酶法分离肝细胞,流式细胞术(FCM)对肝细胞纯度进行活性和纯度鉴定。荧光定量PCR检测肝细胞TLR4、p38MAPK mRNA表达量;Western印迹法检测肝细胞蛋白TLR4、p38MAPK及磷酸化蛋白p38MAPK表达水平。结果 26 w高脂饮食成功建立了NASH大鼠模型,HE染色和油红O染色证实大鼠模型存在典型的NASH病理改变。与正常组比较,模型组血清IL-1、IL-6、TNF-α含量显著升高(P<0.01);各用药组与模型组比较,合方高、低剂量组IL-1、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05,P<0.01),健脾高剂量组IL-1、IL-6含量降低有统计学差异(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠肝细胞TLR4、p38MAPK mRNA表达及磷酸化蛋白p38MAPK表达量显著增加(P<0.01);各用药组与模型组比较,合方高、低剂量组,健脾高剂量组TLR4、p38MAPK mRNA蛋白及磷酸化蛋白p38MAPK表达量显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论疏肝健脾方药能够降低NASH大鼠血清炎症因子水平,改善NASH大鼠肝脏的病理变化,TLR4/p38MAPK可能是疏肝健脾方药发挥抗NASH作用的药物靶点。

SIRT1/UCP2通路在脂肪变性HepG2细胞线粒体能量代谢中的调控机制

目的采用油酸诱导Hep G2细胞发生脂变,建立脂肪变性细胞模型,观察SIRT1/UCP2通路在脂肪变性Hep G2细胞能量代谢中的调控机制。方法采用含有2 mmol/L油酸的DMEM培养基诱导Hep G2细胞24 h后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组比较。以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并用全自动生化仪检测细胞上清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量和细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定线粒体膜电位的改变,采用磷钼酸比色试剂盒测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量,运用Western印迹法检测各组细胞SIRT1和UCP2蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞内橘红色脂滴大量形成,且TG含量明显升高(P<0.01),线粒体膜电位及细胞内ATP含量显著降低(P<0.05,P<0.01),SIRT1蛋白表达均显著降低(P<0.05),UCP2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论油酸诱导的脂肪变性Hep G2细胞模型可以出现脂质代谢紊乱和线粒体能量代谢失衡,其机制可能与细胞内SIRT1/UCP2通路的激活有关。

肥胖相关非酒精性脂肪性肝病防治的新靶点：短链脂肪酸及其受体信号通路的保护作用

近年来,全球肥胖相关非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的发病率和患病率不断上升,但其发病机制尚未完全清楚,临床仍缺乏有效防治手段。目前普遍认为肥胖相关NAFLD是一个多系统疾病,最近研究也证实肠道菌群及其代谢产物在肥胖相关NAFLD发病中起重要作用。作为肠道菌群主要代谢产物短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs),可能通过多种途径(肠道、脂肪组织、肝脏)介导机体炎症反应,直接或间接影响肥胖相关NAFLD的发生发展。因此,从SCFAs及其受体信号通路的角度,探讨肥胖相关NAFLD治疗的药物靶点,将是防治NAFLD的新途径。

Nrf2/ARE通路相关因子在脂肪变性HepG2细胞中的表达及其意义

目的:探讨建立一种新型的脂肪变性人肝癌细胞(Hep G2)模型,观察核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路相关因子在脂肪变性Hep G2细胞中的表达及其意义。方法:Hep G2细胞给予含25%的胎牛血清、0.1%医用脂肪乳和0.1 mmol/L游离脂肪酸(FFA)的DMEM培养基分阶段诱导后,建立脂肪变性Hep G2细胞模型,并设置对照组。模型成功后,以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况,并用全自动生化仪检测细胞内甘油三酯(TG)含量;采用流式细胞仪测定细胞内活性氧(ROS)的含量,采用生物试剂盒检测细胞内一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量及活性的变化;运用Western blot法检测各组细胞Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组油红O染色可见细胞内橘红色脂滴大量形成,TG、ROS、NO、MDA含量水平明显增高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSHPx活性明显下降(P<0.01),Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达均显著增高(P<0.05,P<0.01)。结论:本模型可以成功诱导Hep G2细胞发生脂肪变性和氧化应激损伤状态;Nrf2/ARE通路下游相关因子发生激活可能与脂肪变性Hep G2细胞氧化应激的过度反应有关。

活血化痰法治疗非酒精性脂肪性肝病的文献质量评价

目的:评价活血化痰法治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的文献质量。方法:在中国期刊全文数据库、万方数据库、维普中文科技期刊数据库等中文数据库以及Pub Med、EMBASE等英文数据库中检索自创刊以来到2014年10月有关活血化痰法治疗NAFLD的临床研究文献,运用Jadad评价方法对活血化痰法治疗NAFLD的临床文献进行系统质量评价。结果:在国内外数据库共检索到潜在文献171篇,排除不符合纳入标准的135篇文献,最终纳入36篇文献。运用Jadad方法评价所纳入的36篇文献,其中高质量文献为4篇,占11.1%,低质量文献为32篇,占88.9%。结论:运用活血化痰法治疗非酒精性脂肪肝的中医药临床研究质量参差不齐,有待于进一步提高,使其更具客观化、规范化和科学化。

高脂饮食致NAFLD大鼠模型肝细胞脂质蓄积和氧化应激状态的评估

目的:采用高脂饲料喂养16周诱导NAFLD大鼠模型,对其肝细胞脂质蓄积及氧化应激状态进行评价。方法:30只雄性SD大鼠随机分正常组和模型组,每组15只。正常组予基础饲料喂养,模型组予高脂饲料喂养。16周后,比较两组大鼠的肝湿重、Lee's指数;超声下观察大鼠肝脏影像学改变;检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肝组织匀浆TC、TG含量;取肝组织行HE染色、油红O染色和透射电镜观察组织学改变;Ⅳ型胶原酶法提取原代肝细胞行油红O染色并检测肝细胞一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果:模型组肝脏超声所见符合脂肪性肝病影像学改变;与正常组比较,模型组大鼠肝湿重、Lee's指数、血清TC、TG、LDL-C,肝组织匀浆TC、TG及肝细胞MDA、NO明显升高(P<0.01),而血清HDL-C及肝细胞SOD、GSH-Px水平明显降低(P<0.01);肝组织及肝细胞病理提示肝细胞脂质蓄积。结论:高脂饲料喂养16周的大鼠模型其肝细胞存在脂质蓄积和氧化应激状态,是成功的NAFLD大鼠模型。

如何打造小学数学有效课堂

有效课堂教学已经引起了教师们的重视,但仍然有不少教师依旧采用传统课堂教学、注入式课堂教学,导致不少学生学习兴趣低落,知识掌握不理想,学习成绩不如人意等。随着课程改革的深入发展,小学数学教学也应适应教育形势发展的需要,为提高小学数学的教学质量做更多实效的工作。

基于医联体模式下综合医院中医科建设探讨

医联体建设是国家医改的重点内容。近几年国家在不断推进中医医联体建设,以提高中医药医疗及服务水平,满足居民需求。综合医院中医科是整个中医药事业的重要组成部分,在促进中医药事业繁荣发展,为广大人民群众的健康提供优质、全面的医疗服务方面发挥着重要作用。作者对综合医院中医科发展现状进行分析,探讨了基于医联体资源整合模式下综合医院中医科建设发展思路。

高血压病患者中医体质特点与心血管疾病危险因素的关联分析

目的:探讨分析高血压病患者中医体质类型与心血管危险因素相关性。方法:选取2019年1月—2020年6月本院收治的554例高血压病患者作为观察对象,将其中出现心血管病的269例患者设为研究组,另外未出现心血管病的285例患者设为对照组,参考《中医体质分类与判定》标准调查判定554例患者中医体质类型,分析中医体质类型与出现心血管疾病的相关性。结果:Logistic回归分析结果显示,高血压病患者诱发心血管病的保护性因素是平和质(P<0.05);高血压病患者诱发心血管病的高危因素是阴虚质、气虚质、阳虚质、血瘀质、痰湿质(P<0.05)。结论:高血压病患者中的平和质、阴虚质、气虚质、阳虚质、血瘀质、痰湿质与诱发心血管病存在相关性,尤其是偏颇体质中的阴虚质、气虚质、阳虚质、血瘀质、痰湿质高血压病患者出现心血管病的风险更高。因此,在诊疗期间需对上述中医体质患者格外警惕,积极应用中医疗法配合治疗,避免出现预后不良的情况。

深圳市龙华区青少年超重、肥胖流行现状及中医体质分布规律研究

目的:分析深圳市龙华区青少年超重、肥胖流行现状,影响因素及中医体质分布规律。方法:采用分层整群随机抽样法,对深圳市龙华区837名中学生进行体格检查和问卷调查。分性别、分年龄段统计超重、肥胖人数,评估学生的生长发育情况;调查学生每周食用油炸及甜食次数,每周运动超30 min次数,每天睡眠时长,父、母亲体质量指数,以及父、母亲文化程度;判定学生的中医体质类型。结果:共获得789名学生的有效问卷,有效率94.27%,其中超重检出率19.77%,肥胖检出率6.34%。青少年营养状态均良好,生长发育均正常。男生超重、肥胖总检出率高于女生,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄越小,超重、肥胖总检出率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。每周食用油炸及甜食次数越多、每周运动超30 min次数越少和每天睡眠时长越短,超重、肥胖总检出率均越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。阳性率变量纳入Logistic回归模型校正后显示,性别、年龄、每周食用油炸及甜食次数、每周运动超30 min次数、每天睡眠时长均是影响超重、肥胖发生的独立危险因素。青少年中医体质分布占比由多到少依次是湿热质、平和质、痰湿质、气郁质、阴虚质、阳虚质、气虚质、特禀质、血瘀质。其中超重、肥胖青少年的中医体质以阴虚质为主。与平和质相比,中医体质按影响青少年发生超重、肥胖的程度从高到低依次是痰湿质、阳虚质、阴虚质、气郁质、湿热质。结论:深圳市龙华区青少年超重、肥胖总检出率较高,尤其是男生。性别、年龄、每周食用油炸及甜食次数、每周运动超30 min次数、每天睡眠时长、体质偏颇均是影响该地区青少年超重、肥胖的独立因素。深圳市龙华区青少年的中医体质类型主要有湿热质、平和质、痰湿质等,其中影响超重、肥胖发生的主要中医体质类型为痰湿质、阳虚质、阴虚质,尤以痰湿质为最。

中焦湿热证与胃肠道微生态关系刍议

中焦湿热证是温病三焦辨证的重要证型之一,在消化系统疾病中占有重要地位。胃肠道微生态失衡引起的消化道临床症状与中焦湿热证的中医证候表现存在相似性。现代研究表明,胃肠道菌群失衡与易位可能是中焦湿热证的发病基础。临床上清热利湿中药防治中焦湿热证疗效确切,其机制可能通过多靶点、多途径的整体调控方式来实现胃肠道微生态的平衡。我们推测中焦湿热证的证候本质是胃肠道微生态失衡的重要体现,二者可能存在共同的微观物质基础。

参苓白术散对NAFLD大鼠肝组织Nrf2/ARE信号通路的影响

目的观察参苓白术散对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路相关蛋白表达的影响。方法取SD大鼠32只,随机分为正常组,模型组,参苓白术散高、低剂量组(30,10 g·kg-1),每组8只。采用高脂饲料喂养16周,建立NAFLD大鼠模型,给药组大鼠同时灌服参苓白术散浸膏剂进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)含量;油红O染色观察肝组织脂质蓄积程度;Western Blotting法检测肝组织Nrf2/ARE信号通路相关蛋白(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平。结果模型组大鼠肝组织油红O染色结果表明肝组织脂质蓄积严重,提示高脂饲料诱导的NAFLD大鼠模型建立成功。与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C、AST水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);肝组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,参苓白术散高、低剂量组大鼠肝组织脂质蓄积程度明显改善,两组血清TC、TG、LDL-C含量及AST水平均呈不同程度下降,血清HDL-C及肝组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达水平呈不同程度升高(P<0.05,P<0.01),其中参苓白术散高剂量组变化更为显著。结论参苓白术散能够改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝脏脂肪代谢紊乱,减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活Nrf2/ARE信号通路有关。

参苓白术散对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织超微结构及AMPKα磷酸化的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食建立的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织超微结构和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)磷酸化的影响。方法:选用SPF级SD大鼠32只,随机分为4组:正常组、模型组、参苓白术散30g/kg剂量组、参苓白术散10g/kg剂量组,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠分别灌服30g/kg和10g/kg参苓白术散进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清和肝匀浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;HE染色观察肝组织病理学变化;透射电镜观察肝细胞的超微结构改变;实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织AMPKαmRNA表达水平;Western blot法检测肝组织AMPKα蛋白及其磷酸化AMPKα蛋白(p AMPKα)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠病理证实肝组织脂质蓄积严重,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著升高,肝组织AMPKαmRNA和p AMPKα蛋白水平显著降低,与模型组比较,参苓白术散30g/kg和10g/kg剂量组大鼠肝组织脂质蓄积明显改善,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著降低,肝组织AMPKαmRNA及p AMPKα蛋白水平显著上调,其中参苓白术散30g/kg剂量组疗效更好;但各组大鼠总AMPKα蛋白水平差异无统计学意义。结论:参苓白术散能够改善16周高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活AMPKαmRNA及其蛋白磷酸化水平有关。

小檗碱对NAFLD大鼠肝组织p38MAPK-STAT3信号通路mRNA及蛋白表达的影响

目的观察小檗碱对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织p38MAPK-STAT3信号通路相关基因及蛋白表达的调控作用,探讨小檗碱防治NAFLD的作用机制。方法取SPF级雄性SD大鼠24只,适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组和小檗碱组(100 mg·kg^(-1)),每组8只。除正常组给予基础饲料外,其余两组均采用高脂饮食喂养,建立大鼠NAFLD模型,在施以造模因素的同时,小檗碱组灌胃给药,8周后对肝组织行HE染色和油红O染色。全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);ELISA法检测血清及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织p38MAPK、STAT3 m RNA表达量;Western Blotting法检测肝组织蛋白p38MAPK、STAT3及p-p38MAPK、p-STAT3表达水平。结果 8周高脂饮食成功诱导建立了NAFLD实验动物模型,HE染色和油红O染色证实大鼠模型肝组织脂质蓄积严重。与正常组比较,模型组大鼠血清TG、TC含量明显升高(P<0.05),肝组织及血清SOD活力明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01),p38MAPK、STAT3 m RNA及p38MAPK、p-p38MAPK、STAT3、p-STAT3蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,小檗碱组大鼠血清TG、TC含量明显降低(P<0.05),肝组织及血清SOD活力明显升高(P<0.05,P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.05,P<0.01),p38MAPK、STAT3 m RNA及p-p38MAPK、p-STAT3蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论小檗碱可以改善NAFLD模型大鼠肝脏脂肪变性,降低其血清及肝组织氧化应激因子水平,其机制可能是通过激活肝脏p38MAPK-STAT3信号通路相关基因及其蛋白磷酸化水平,改善氧化应激而发挥作用。

柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的影响

目的探讨柴胡疏肝散对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织沉默信息调节因子蛋白1(SIRT1)/p53通路相关蛋白表达的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、柴胡疏肝散组(9.6 g·kg-1),每组8只。正常对照组给予基础饲料,模型组和柴胡疏肝散组给予高脂饲料,柴胡疏肝散组同时给予柴胡疏肝散浸膏剂灌胃。16周后处死大鼠,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)含量和肝组织TC、TG含量;取肝组织行HE和油红O染色观察组织学改变;蛋白质印迹法检测肝组织SIRT1、p53、乙酰化p53(Ac-p53)蛋白表达。结果与模型组比较,柴胡疏肝散组肝组织病理学结果表明,脂质沉积明显减轻,血清LDL-C和肝组织TC、TG显著降低(P<0.05,P<0.01),肝组织SIRT1蛋白表达水平显著上调(P<0.01),而Ac-p53蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论柴胡疏肝散能够减轻高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织脂质沉积,调控肝组织SIRT1/p53通路相关蛋白的表达水平可能是其作用机制之一。

从肝脾相关理论探讨中医药防治慢性肝病的思路与方法

肝脾相关理论认为肝与脾生理上制中有生,相互为用,病理上相互影响,互相传变,肝病可传脾,脾病亦可及肝,这与现代医学"肠-肝轴"学说具有相似之处。现代研究表明肠道微生态系统紊乱是各种慢性肝病的重要发病基础,其引起的消化道临床症状与中医脾虚的证候表现存在一致性。因此,基于"肠-肝轴"学说和中医肝脾相关理论,可认为肝郁脾虚为慢性肝病的主要病机,痰、湿、瘀等为其发病的关键,治疗应以疏肝健脾为法,同时注重解毒通络,祛除致病因素。