哺乳期圈养雌性大熊猫圈舍转移及其育幼行为变化

大熊猫（Ailuropoda melanoleuca）为我国特有珍稀濒危物种之一,被誉为“国宝”。经过科研人员多年努力,圈养大熊猫“配种难、受孕难、幼仔存活难”等问题已基本被成功解决,圈养大熊猫种群数量正在快速增加（张和民等,2013）。目前我国已经建立了四川卧龙、成都和陕西楼观台3个较大的圈养大熊猫种群繁育基地。

拐棍竹无性系植株在不同干扰下的生存能力

本文根据2003-2010年固定样方调查的大熊猫采食和人为砍伐后拐棍竹残桩的年死亡率和数量动态数据，分析了拐棍竹无性系植株在不同干扰下的生存能力，结果表明：不同龄级不同年份大熊猫采食的残桩植株的年死亡率远低于被人为砍伐的残桩植株，而且留存残桩的生存时间也长于砍伐残桩，从而导致残桩存活数量以及整个无性系种群呈现出截然不同的后果。

两种抗凝剂对大熊猫血液生理指标的影响

目的:比较分析两种抗凝剂对大熊猫血液生理指标的影响。方法:将60只成年大熊猫,分别用EDTA.K2和肝素钠抗凝采血后,用麦道尼克(MEDONIC)CA620全自动血细胞分析仪(瑞典原装进口)测定血液生理指标。结果:使用不同的抗凝剂,同一样本的血液生理指标中:血小板数目(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板压积(PCT)、大血小板数(LPCR)、中值细胞(MID)、中值细胞百分比(MID%)、淋巴细胞绝对值(LYM)、淋巴细胞绝对值百分比(LYM)%、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)和平均红细胞体积(MCV)10个指标差异极显著(P<0.01)。结论:不同抗凝剂对大熊猫血小板和白细胞分类计数参数影响极显著,进行相关实验时应妥善选择血液抗凝方式。

幼龄大熊猫异氟醚麻醉效果的观察

选取23只周岁左右大熊猫单纯异氟醚吸入麻醉静脉采血,观察诱导时间及复苏时间,麻醉期的眼睑反射、痛觉反应、镇静效果,并从呼吸、体温、心率、血氧饱和度、毛细血管再充盈时间等方面监测大熊猫的麻醉情况。试验结果表明,异氟醚应用于幼龄大熊猫具有麻醉效果确实,镇静、镇痛效果好,血氧饱和度充裕,且对机体各项生理功能和各项生理指标影响轻微,毒副作用低,便于机体迅速恢复与稳定,可以作为幼龄大熊猫的首选麻醉药品。

卧龙自然保护区一鬣羚死亡原因剖析

为调查2008年汶川大地震后卧龙自然保护区每年冬季都会有野生鬣羚死亡的原因,作者对2015年1月6日卧龙自然保护区内1死亡的野生鬣羚进行病理、细菌、寄生虫病原等实验室诊断。根据实验室诊断结果,并综合分析野生鬣羚的生存环境,其死亡原因为:受2008年汶川大地震影响,鬣羚野外栖息地遭受严重破坏,采食不足;且长期感染体表寄生虫疥螨,造成营养物质代谢障碍,导致机体免疫力低下;金黄色葡萄球菌侵入机体,引起全身多器官发生实质性病变而死亡。本研究结果为保护区野生动物保护人员对鬣羚及其他野生动物的保护提供了指导意义。

大熊猫唇腭裂幼仔喂养方式及护理探讨

为探讨1只患先天性心脏病的大熊猫唇腭裂幼仔的饲喂方式及护理方法,在使其吸氧的同时采用奶瓶饲喂、奶瓶滴入饲喂和胃管插管饲喂3种饲喂方式,较好地解决了大熊猫唇腭裂幼仔在不同条件下的喂养及护理问题。

卧龙圈养大熊猫的周期行为节律

对卧龙大熊猫研究中心圈养的19只大熊猫在5min间隔发生的行为进行了全年统计,我场饲养的大熊猫的多数行为的日变化曲线和年变化曲线呈现双峰现象,文中还描述了性别、年龄的行为差异.

罗氏芬在大熊猫消化道和呼吸道疾病治疗中的应用

观察罗氏芬对大熊猫消化道感染和呼吸道感染的治疗效果。60余例大熊猫消化道感染使用罗氏芬抗感染治疗,30余例大熊猫呼吸道感染使用罗氏芬抗感染治疗。患病大熊猫痊愈,未见不良反应。罗氏芬临床使用方便、副作用少,在大熊猫消化道和呼吸道疾病中有较好的疗效。

大熊猫源致病大肠杆菌CCHTP全基因组测序及耐药和毒力基因分析

致病性大肠杆菌是引起动物泌尿系统感染的重要病原菌,本研究对泌尿生殖道感染出现潜血的大熊猫尿液中分离的一株致病性大肠杆菌(Escherichia coli CCHTP)进行全基因组测序,检测其中耐药基因和毒力因子的情况,同时对基因岛上耐药和毒力基因及其基因环境进行研究。研究发现,大肠杆菌CCHTP中存在多种类型的耐药基因,其中外排泵系统基因数量最多,包括mdf A、emr E和mdt N等介导多重耐药外排泵的基因。此外,该菌还携带166种毒力因子及563个相关毒力基因,其中属于黏附与侵袭类的毒力因子及相关基因数量最多。对19个基因岛分析发现,基因岛GIs011和GIs017中各有一段包含耐药和毒力基因的序列,两侧与可移动遗传元件(转座酶和插入序列)相连,这些结构可能介导耐药及毒力基因水平转移。本研究通过全基因组测序分析了大熊猫源致病性大肠杆菌中存在的耐药及毒力基因情况,对大熊猫相关疾病的科学治疗、合理用药有重要意义。

大熊猫粪便中微生物与寄生虫的宏转录组学分析

旨在探究大熊猫粪便中微生物组成以及耐药基因和寄生虫的真实情况。采集6只健康成年大熊猫的新鲜粪便,利用宏转录组学测序技术分析大熊猫粪便微生物组成及功能、耐药基因种类、丰度和寄生虫的组成,探讨优势细菌与耐药基因的相关性。结果表明,大熊猫粪便内微生物种类多样,包括细菌、真菌和病毒等,但以细菌为主。在门水平上,细菌类群中厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)为优势菌门,在真菌菌门中担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)和毛霉亚门(Mucoromycota)相对丰度较高,雌性和雄性大熊猫粪便菌群丰度没有显著性差异(P>0.05)。Unigenes功能分析表明,大熊猫粪便微生物的功能主要涉及碳水化合物、氨基酸代谢等过程。在大熊猫粪便中共检测出25大类、304种耐药基因,其中,外排泵类基因的种类最多、相对丰度最高。此外,在大熊猫粪便中共发现63属126种寄生虫,寄生虫种包括线虫、绦虫和吸虫,其中,线虫为优势虫种。通过相关性分析发现,链球菌属(Streptococcus)、埃希杆菌属(Escherichia)、肠球菌属(Enterococcus)、苏黎世杆菌属(Turicibacter)与外排泵类、喹诺酮类、四环素类、糖肽类、多肽类和磺胺类耐药基因呈显著正相关性(P<0.05)。本研究从宏转录组水平揭示了大熊猫粪便中微生物、耐药基因组成以及寄生虫种类,对大熊猫微生物相关疾病和寄生虫病防控具有重要意义。

大熊猫尿液成分的代谢组学研究

为探究大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)尿液代谢物的差异性,采用液相色谱-质谱UPLC-Q-TOF/MS技术对20例大熊猫尿液代谢成分进行检测,并通过性别和年龄分组对其尿液代谢物进行差异分析。研究发现,在性别组间共鉴定出12种显著差异代谢物(P<0.05),其中,除芹菜素外其余11种代谢物的相对含量均在雄性尿液中更高。亚成年组与成年组间共鉴定出25种显著差异代谢物(P<0.05),仅核黄素和精氨酸的相对含量在亚成年个体尿液中更高;而亚成年与老年组间和成年组与老年组间分别共鉴定出10种和3种显著差异代谢物(P<0.05),其相对含量均在老年个体尿液中更高。这些显著性差异代谢物主要集中在氨基酸代谢、次生代谢物的生物合成及黄酮、黄酮醇和类黄酮的生物合成通路。对不同性别、年龄间大熊猫尿液代谢物进行差异性分析,筛选出的差异代谢物为大熊猫化学通讯机理和生理功能的研究提供理论基础。

基于非靶向代谢组学的大熊猫主食竹代谢产物分析

采用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术,对3种大熊猫主食竹非靶向代谢组学研究。结果表明,竹子的不同部位之间存在较大的代谢物差异,筛选出21种差异代谢物,主要包括脂肪酸及其共轭物5种、十八烷酸类4种、二十烷酸类3种、黄酮类3种、有机酸2种、糖类以及其他物质4种。通过MetaboAnalyst进行通路分析,发现有5条通路影响较显著,分别为柠檬酸循环,淀粉和蔗糖代谢,乙醛酸和二羧酸的代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的降解,花生四烯酸代谢,结合显著差异物质的生理作用,可进一步探讨大熊猫在不同生长阶段选取主食竹的不同部位,从而来满足自身的生理需求、生长发育的原因,可为大熊猫主食竹的选择提供理论依据。

大熊猫主食竹、粪便及血清中的短链脂肪酸的测定及分析

通过气相色谱—质谱联用(GC/MS)定量分析苦竹、大熊猫粪便及血清中短链脂肪酸(SCFAs)含量。对样品进行衍生化预处理、萃取,并进行GC/MS快速分析。样品中的12种SCFAs,包括甲酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、2-甲基丁酸、戊酸、2-甲基戊酸、4-甲基戊酸、正己酸、正庚酸得到鉴定并准确定量。结果显示,苦竹中的短链脂肪酸在其不同部位存在明显差异,其主要短链脂肪酸与粪便中的基本一致,均以乙酸、甲酸和丙酸为主;血清中的短链脂肪酸以甲酸、乙酸、丙酸为主。在此基础上,探讨了苦竹中短链脂肪酸对大熊猫肠道和机体发育所产生的生理作用,能维持不同年龄个体肠道功能的平衡性和完整性,以及提高雌性泌乳期的产奶量和体重。本研究利用GC/MS测定了大熊猫可食竹苦竹、大熊猫粪便及血清中短链脂肪酸的含量,可为大熊猫食性及生理等研究提供数据支撑。

不同季节亚成体大熊猫肠道菌群ERIC-PCR指纹图谱分析

为探讨不同季节亚成体大熊猫肠道菌群的相似性和稳定性。对采自雅安碧峰峡大熊猫基地3只亚成体大熊猫的粪便细菌总DNA进行了ERIC-PCR指纹图谱分析,并对ERIC-PCR指纹图谱中主带DNA片段进行回收、克隆测序及序列比对分析。结果显示,同一季节不同亚成体大熊猫肠道菌群结构的相似性较高,而不同季节同一亚成体大熊猫肠道菌群结构的相似性较低;亚成体大熊猫肠道菌群的多样性可能受季节影响;大肠杆菌和柠檬酸杆菌为亚成体大熊猫肠道的优势细菌。表明,亚成体大熊猫肠道菌群的多样性在一定程度上与季节有关。

成年大熊猫肠道菌群多样性的16S rDNA-RFLP分析

为探究秋季(9～11月)成年大熊猫肠道菌群的多样性,以细菌16SrDNA通用引物扩增粪样总细菌16SrDNA基因并构建文库,然后采用16SrDNA基因限制性片段长度多态性(restriction fragmentlength polymorphism,RFLP)技术对成年大熊猫秋季肠道菌群多样性进行分析。结果显示,大肠杆菌、假单胞菌、链球菌和鞘氨醇杆菌为大熊猫秋季肠道内的优势菌群,肠道内细菌多样性9月较高,11月较低。结果表明,16SrDNA-RFLP技术能用于成年大熊猫肠道菌群多样性的研究。

大熊猫粪便菌群ERIC-PCR指纹图谱的分析及优势菌群的鉴定

探讨1只野生大熊猫和不同年龄段圈养大熊猫粪便菌群的多样性和相似性,并鉴定野生大熊猫圈养之后,其粪便中的优势菌群。对来自3个年龄段9只(3只亚成体、3只成年体、3只老年体)圈养大熊猫及1只野生大熊猫圈养前、后的11份粪便细菌的DNA进行ERIC-PCR指纹图谱分析,并利用16S rRNA基因序列分析对优势菌条带进行鉴定。结果显示:该只野生大熊猫粪便菌群多样性比圈养大熊猫丰富;圈养大熊猫粪便菌群多样性:成年体>亚成体>老年体;16s rRNA和ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定的优势菌结果有差异性。结果表明:大熊猫的肠道菌群多样性易受生长环境、年龄因素的影响;其次,不同年龄段的圈养大熊猫,其肠道菌群的相似性与年龄因素不相关;利用ERIC-PCR指纹图谱优势条带鉴定优势菌的方法有一定的局限性。

圈养大熊猫食性转换前期肠道细菌多样性

为了探讨大熊猫食性转换前期肠道菌群的多样性与差异性。对3只处于夏季食性转换前期大熊猫粪便细菌总DNA进行ERIC-PCR分析,并构建16SrDNA克隆文库,采用限制性内切酶HinfⅠ、MspⅠ对其进行RFLP(restriction fragment length polymorphism)及测序分析。研究表明,食性转换前期大熊猫肠道细菌主要由硬壁菌门和变形菌门组成。其中7月份样品中以梭菌属和醋杆菌属为主;8月份以八迭球菌属和埃希氏菌属为主;9月份以链球菌属和埃希氏菌属为主。此外在3个月中均发现一定比例的未培养细菌。结果表明:随着食性转换前期的过渡,大熊猫肠道菌群发生了改变。由硬壁菌门中的梭菌属渐变到以球菌属为主,由变形菌门的醋杆菌属渐变到以肠杆菌为主。

大熊猫隐孢子虫的分离鉴定

为了探讨大熊猫隐孢子虫的感染情况,用饱和蔗糖溶液漂浮法检测来自大熊猫研究中心的57份大熊猫粪样,并对阳性分离株进行形态学、分子生物学鉴定和系统发育树构建。结果显示,在1只大熊猫(雄性,18岁)粪样中发现了隐孢子虫,卵囊的平均大小为4.60μm×3.99μm;在其18SrRNA、HSP70位点上,该分离株与隐孢子虫黑熊基因型同源性分别为98.5%、99.5%,碱基差异分别有12个和10个;种系发育显示宿主适应性特点。建议将此分离株定为新的基因型——隐孢子虫大熊猫基因型。