抑制泛素-蛋白酶体途径对晶状体上皮细胞自噬的诱导作用

目的在晶状体上皮细胞中通过蛋白酶抑制剂MG132抑制泛素-蛋白酶体途径活性,探索其对自噬作用的影响及相关机制。方法使用蛋白酶抑制剂MG132作用于晶状体上皮细胞,阻断泛素-蛋白酶体途径的功能,通过蛋白免疫印迹法检测泛素化蛋白质水平评价泛素-蛋白酶体系统活性。蛋白免疫印迹法观察自噬作用活性标志蛋白LC3-Ⅱ的表达情况,共聚焦免疫荧光显微镜下观察LC3、p62的表达与分布。蛋白免疫印迹法检测p62表达的变化。结果在MG132作用后,晶状体上皮细胞中泛素化蛋白聚集物明显增加。随着抑制时间的延长,LC3-Ⅱ的表达量也随之增加,自噬作用活性增强,p62的表达也明显增加。结论在晶状体上皮细胞中,当泛素-蛋白酶体系统活性受抑制时自噬作用活性增强。

蛋白酶体抑制剂Epoxomicin对视网膜色素上皮细胞自噬-溶酶体途径的影响

【目的】研究抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)对自噬-溶酶体途径(ALP)的影响及相关作用机制。【方法】人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19共分为3组,分别为DMEM空白对照组、DMEM+DMSO阴性对照组、DMEM+Epoxomicin实验组。应用蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光法检测泛素化蛋白的表达,观察UPP功能的改变情况;观察LC3,LAMP1、LAMP2的表达,评价自噬作用和溶酶体的功能变化情况;观察HDAC6,p62的表达,初步探索UPP抑制对ALP改变的分子机制。【结果】采用蛋白酶体抑制剂Epoxomicin抑制泛素-蛋白酶体途径后,细胞内泛素化蛋白质聚集物增多;自噬溶酶体途径被激活,自噬标志物LC3表达增高,溶酶体膜相关蛋白LAMP1、LAMP2蛋白水平表达亦增高;抑制UPP后HDAC6和p62表达升高,可能参与ALP的激活过程。【结论】泛素-蛋白酶体途径抑制后,自噬溶酶体途径被激活且参与蛋白质聚集物的降解。

一个白内障家系的临床特征及基因突变研究

目的对1个先天性绕核粉尘状白内障家系的临床特点及基因突变进行研究,探索先天性白内障发病的遗传机制。方法收集确诊为常染色体显性遗传的一个绕核粉尘状白内障家系的外周静脉血,提取基因组DNA,针对现有国内外文献已报道的与该家系白内障表型相关的10个基因设计引物,对患者基因片段进行扩增和序列分析,比对已发现的10个基因序列,查找是否有序列改变。结果被检查者的10个发病相关基因片段的序列中,GJA3基因的外显子发现杂合性突变位点(912C>A,1372A>G),其余9个与GenBank发表的正常序列相同。结论 GJA3基因外显子上发现了新的杂合性突变位点,其对先天性白内障的作用需进一步的研究。