血清可溶性Fas-和FasL-mRNA检测方法的建立

目的建立可用于研究工作的血清学检测方法。方法按ＧｅｎＢａｎｋ的Ｆａｓ和ＦａｓＬ序列设计引物，以相应质粒作阳性材料，建立各自的ＲＴ－ＰＣＲ。结果２７例慢性乙型肝炎血清检出ｓＦａｓＬ－ｍＲＮＡ１３例（４８．２％），ｓＦａｓ－ｍＲＮＡ２１例（７７．８％）。结论目前尚无检测血清抗原的试剂、相关研究工作中可应用这一技术。

SaaS模式下多租户数据库的研究

SaaS模式下的多租户数据库能够平衡数据共享和数据隔离的要求,租户数据的存储、子用户与租户的对应、权限的管理、数据的扩展等是在多租户数据库设计过程中不可回避的问题。本文对这四个问题进行了研究,并给出了具体的解决思路和实现方法。

.NET环境中基于SaaS模式的企业信息管理平台的研究

SaaS模式利于中小企业低成本地应用先进技术,SaaS模式下的软件开发因其独特的应用服务模式而具有研究意义。本文对SaaS模式下的企业信息管理平台的特点作出研究,在.NET环境中给出系统的功能框架、设计模式及对关键性问题的分析和解决方案。

“大学计算机信息技术”课程教学研究

本文从教学实践出发,从大纲目标的确定、施教对象的分析、教学方法、教师角色定位四个方面对"大学计算机信息技术"课程的教学作出了研究,力求更好地实施信息技术基础教学工作。

构建“互联网+”时代学生“碎片化”学习体系的思考

随着社会的进步和经济的发展,手机、平板等移动终端的普及,以及移动互联网的发展,信息呈几何幂次方数量增长,人们只有不断学习充实自己,才能适应快速发展的社会步伐.移动互联网的发展为人们提供了全新的学习模式-利用碎片化的时间进行泛在学习,同时也给教育领域提出了新的要求,由此催生了基于互联网的新的学习体系.

程序设计类课程教学思考

程序设计类课程的学习有助于改进学生的逻辑思维方式,增强学生分析问题、解决问题的能力.程序设计类课程的教学需把握好理论和实践两个方面.笔者结合多年的教学实践,对当前程序设计类课程教学中的问题进行了分析,从"教"的角度探讨了该类课程教学的多个注意点.

试析计算机网络技术的应用与发展

计算机网络技术的应用非常广泛,与现代社会人们的衣、食、住、行息息相关,存在于生活的每一个角落。计算机网络技术发展日新月异,影响着人们的生活方式、工作方式、生产方式。对计算机网络技术的应用及发展趋势进行了探讨。

C++课程中思维导图的应用探索

通过分析目前C++课程中教师教学与学生学习中普遍存在的问题,文章提出在课程中引入思维导图的教学方法改革,有效提升学生学习C++课程的积极性,培养学生创新思维和创新能力。

对无法浏览网页故障现象的解析

本文主要讲述了产生“无法浏览网页”这种故障现象的多种原因,并对其进行分析,提出相应的故障检查和解决方法。

中国乙型肝炎病毒B基因型、C基因型与干扰素疗效的关系

探讨中国乙型肝炎病毒基因型与干扰素α疗效的关系。用PCR -限制性酶切片段长度多态性方法分析乙型肝炎病毒基因型 ,并研究 1998 1～ 2 0 0 2 4南方医院门诊和住院慢性乙型肝炎患者的一般人口学、ALT、HBVDNA、肝脏活检组织病理以及干扰素治疗效果。B基因型 70例 ,C基因型 6 0例 ,两基因型间一般人口学、ALT、HBVDNA、肝脏活检组织病理无统计学差异 ,干扰素治疗效果同样没有显著性差异。HBVB、C基因型感染的慢性乙型肝炎患者临床无统计学差异 。

一种新型肠传性病毒性肝炎的流行病学、临床、病理和病毒学的初步研究

背景单项血清肝酶增高的病因长期不明，某校学生中发生381例以此为主要特征的肝损害病人。目的为初步阐明这一疾病的病因、传播和病变。方法流行病学调查、临床观察、肝活组织检查以及血清和粪便的聚合酯链反应检测。结果根据临床和检测结果可排除中毒引起，已知肝炎病毒的血清标志物均明性。症状轻微，病程多急性、少数可超过6个月。肝组织呈汇管区炎。散在发病后进行3次人群普查，3个月累计发病率占流行人群的60．7％。分析认为经日常生活接触和多次小范围的食物传播。采取以切断传播为主的预防措施，2个月后流行控制。由病人的急性期血清和潜伏期粪便提取DNA，检出与一种新近报告的血传性病毒（TTV）有同源性的基因片段。结论可能是另一种肠传型肝炎病毒引起的非甲非戊型病毒性肝炎。

乙型肝炎病毒前C/C区及其调控基因变异的研究

目的研究慢性乙型肝炎病人中HBVpreC/C基因及其调控序列的变异和特点。方法对42例慢性乙型肝炎病人中扩增的HBVDNA各3个克隆进行序列分析。结果42例病人,HBVC基因调控序列发生T1762A1764双突变者20例,其中HBeAg阳性者7例,HBeAg阴性者13例(P<005);22例发生T1673G1799双突变。前C变异中,18例发生A1896变异,其中HBeAg阳性者6例,HBeAg阴性者12例(P<0.05)。C区变异中,AA5、AA38、AA60、AA87、AA97、AA130、AA135都是变异的热点。前C/C区还存在有插入、缺失等不同变异。结论慢性乙型肝炎病人的HBVC基因及其调控序列变异具有多样性及复杂性,与体内的免疫清除与病毒逃避免疫攻击相关,从而容易导致疾病的慢性化。

Th1/Th2类细胞因子在慢性乙型肝炎患者的表达及其临床意义

为探讨Th1 /Th2类细胞因子在慢性乙型肝炎患者肝内及外周血单个核细胞 (PBMC)的表达及其临床意义 ,应用双抗体夹心法和免疫组织化学方法对 63例慢性乙肝患者中Th1 /Th2类细胞因子表达水平进行检测。结果显示 :63例慢性乙型肝炎患者肝组织中IFN γ阳性 46例 ,阳性率为 73.1 % ;IL 4阳性 39例 ,阳性率为61 .9%。阳性染色定位于细胞浆 ,呈棕黄色颗粒。阳性细胞主要分布在汇管区及小叶内坏死区。IFN γ的表达强度与肝内炎症分级呈正相关 ,提示 :IFN γ的表达增强能够促进肝细胞的损伤 ;而IFN γ和IL 4的表达与ALT的水平无相关性。肝组织内IFN γ的表达水平与外周血PBMC培养上清液中的水平是一致的 ,而IL 4缺乏一致性。提示 :①慢性乙型肝炎肝组织内IFN γ表达阳性率高于IL 4;②检测外周血PBMC培养上清液中IFN γ的水平可能更有利于反应慢性乙型肝炎患者的Th细胞应答状态。

EBV转化慢性乙型肝炎患者B淋巴母细胞系的建立

目的体外建立慢性乙型肝炎患者永生化的B淋巴母细胞系(LCL)。方法用EB病毒感染自慢性乙型肝炎患者外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CpGDNA免疫调节基序以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察LCL的形态特征,利用流式细胞术分析LCL细胞膜表面分子CD19和CD23的表达水平。结果46例患者PBMC经EBV感染4周后,42例转化成永生化B淋巴母细胞系,成功率为91.3%。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。结论转化后的LCL保持了成熟B淋巴细胞的生物学特性,可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞。

HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者肝脏病理改变及相关因素分析

目的：探讨HBeAg阴性的慢性乙型肝炎（CHB）患者的肝脏病理特点及其相关因素。方法：选择134例符合抗病毒治疗条件的HBeAg阴性的CHB患者，行肝穿刺活检，常规苏木素一伊红染色及嗜银染色后．采用改良的Knodell HAI评分系统进行病理分析，并检测患者血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、HBVDNA、乙型肝炎血清标志物以及乙型肝炎病毒基因型。均数比较采用t检验和方差分析，非参统计采用Kruskal—Wallis检验．用多元线性回归方法分析与肝脏炎症活动和纤维化相关的因素。结果：134例HBeAg阴性CHB患者炎症活动指数（HAI）按轻度（4～8分）、中度（9～12）和重度（13～18）炎症分组，3组中病例数分别为36例（26．9％）、35例（26．1％）、63例（47．0％）。纤维化评分〈3分和≥3分的病例数分别为25例（18．7％）和109例（81．3％）。患者血清ALT水平和肝脏纤维化是肝脏炎症活动度的相关因素（t=6．687，P〈0．01；t=3．478，P〈0．01）；而患者年龄和肝脏炎症活动度是肝脏纤维化的相关因素（t=3．587，P〈0．01：t=7．136．P〈0．01）。患者性别、乙型肝炎病毒载量、乙型肝炎病毒基因型和HBeAb状态与肝脏病理改变无明显相关。结论：本研究HBeAg阴性的CHB患者中，肝脏病理改变以中、重度肝炎居多，患者血清ALT水平越高．肝脏炎症活动越重，患者年龄越大，肝脏纤维化程度越重。

慢性肝病胆小管增生与肝纤维化的关系

目的 探讨慢性肝病胆小管增生与肝纤维化的关系．方法 用ＬＤＰ 法观察７７ 例同时进行肝活组织学检查及血清纤维化标志检测的慢性肝病患者肝穿组织及１０ 例肝癌和２ 例正常人手术标本的ＣＫ－ １９ 单克隆抗体表达情况，并与肝病分级分期及血清纤维化标志等进行比较．结果 随ＣＫ－ １９ 表达强度从＋ 到＋＋＋＋ ，４ 项纤维化标志均逐步升高，尤其透明质酸与ＣＫ － １９ 表达强度的同步性最好，各组间比较均有显著性差异；ＣＫ － １９ 表达强度与肝病分级分期等显著相关（χ２ 分别为６５－６ ，６９－７ ，Ｐ 均＜ ０－０１） ；ＣＫ － １９ 染色还能显示胆小管破坏及淋巴细胞浸润．结论 ＣＫ－ １９ 染色对判断肝纤维化程度及肝炎相关的自身免疫现象有一定作用．

EGFP-HBVP22^e融合蛋白在HepG2中的表达

目的利用pEGFP-C2真核表达载体,建立稳定表达乙型肝炎病毒(HBV)P22e的HepG2细胞系。方法以含1.2拷贝HBV基因(adr亚型)的p3.8Ⅱ质粒为模板,PCR获得HBVP22ecDNA片段,分离插入通用T载体pMD18-T中鉴定,然后装入真核表达型载体pEGFP-C2中,HBVP22e与EGFP基因融合,脂质体转染HepG2细胞株,荧光显微镜下观察EGFP-HBVP22e融合蛋白的胞内表达,Westernblot检测阳性克隆细胞EGFP-HBVP22e的表达。结果成功构建了真核表达载体pEGFP-C2HBVP22e,并转染HepG2细胞,经多次传代培养鉴定,获得稳定表达EGFP-HBVP22e融合蛋白的HepG2细胞系。结论该细胞系的建立为进一步研究HBVP22e的生物学功能与乙型肝炎发病机制的关系奠定了基础。

乙型肝炎病毒核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-I表达

目的：研究HBV adr亚型野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞表面的HLA-I／抗原肽复合物的表达．方法：通过定点突变技术将1．2拷贝HBV野生型质粒p3．8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株V60和L97．经序列测定和生物学活性检测后，野生株和变异株重组质粒分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp以稳定表达．重组载体EBO-野生株、EBO-V60和EBO-L97分别作内切酶双酶切和序列测定鉴定，再用脂质体介导转染HepG2细胞，ELISA(Abbott)试剂盒定量检测各株培养上清HBV抗原，转染细胞用FITC标记的鼠抗HLA-ABC单抗染色，流式细胞术分析细胞表面HLA—I表达．结果：3株重组载体经内切酶消化，电泳后显示2条区带，分别与1．2拷贝HBV基因组和EBO载体大小相同．测序结果证实EBO-V60和EBO-L97分别在nt2078c→G和nt2189A→C，保持原定点突变．EBO-野生株的培养上清HBeAg定量S／CO值明显高于变异株V60和L97，3株：HBsAg定量S／N值接近，HBsAg表达相近表明实验的转染效率相当．EBO空载体转染的HepG2细胞HLA-I轻微表达，3株重组载体转染细胞HLA—I的荧光强度不同，野生株增强为18．2，L97明显升高至34．5，而V60降低至3．4．结论：HBV能增强HepG2细胞表面HLA-I／抗原肽复合物的表达，核壳蛋白热点变异V60和L97可使宿主细胞HLA-I表达发生变化。

聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎的疗效及影响因素

目的观察聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α-2a治疗HBe Ag阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者的疗效及其影响因素。方法收集2009年5月-2012年12月在南方医科大学南方医院感染内科就诊的HBe Ag阴性的CHB患者103例,给予PEG-IFNα-2a 135μg治疗,平均疗程为13个月,治疗后随访48周,在治疗及随访期间每3个月检查肝功能、HBV DNA定量。组间频数比较采用χ2检验,均数比较采用t检验,采用二分类多元Logistic回归法分析疗效的影响因素。结果 103例患者治疗结束时,取得联合应答者84例,联合应答率为81.6%。随访过程中复发33例,复发率为39.3%,治疗后随访1年持续应答患者49例,持续应答率47.6%。经单因素和多因素分析,抗-HBe阳性是唯一的与持续应答相关的独立影响因素(OR=3.69,P=0.013),HBV DNA定量、HBV基因型、前C/BCP区变异、肝脏病理等其他治疗前基线特征与持续应答无相关性。结论 PEG-IFNα-2a治疗HBe Ag阴性CHB能够取得较好的疗效,但复发率较高;抗-HBe阳性患者的持续应答率较高。