CaMV 35S启动子在菊花中驱动GUS外源基因的表达分析

[目的]由于CaMV 35S启动子转化菊花存在外源基因表达量低、基因沉默等问题,本研究对35S启动子、2×35S启动子在菊花中驱动GUS外源基因的表达进行了分析,以期为高效菊花转化提供理论指导。[方法]通过设计引物,利用PCR从p CAMBIA1301 Vector中克隆了35S启动子、2×35S启动子的序列并插入pORE R2载体中,分别获得了重组载体p ORE R2-35S:GUS和p ORE R2-2×35S:GUS,通过农杆菌介导法将构建的遗传转化载体分别导入切花菊品种‘神马’中。[结果]试验共转化2 296个菊花叶盘,经过筛选共得到16个过量表达的转基因株系。经PCR验证,目标片段已经成功插入转基因株系基因组。荧光定量PCR分析和染色分析显示,在转基因菊花中2×35S比35S启动子表现出驱动GUS基因高量表达的特性。[结论]在选择合适菊花品种的基础上,2×35S比35S启动子可以更加高效地促进基因表达。