过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖

目的研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响。方法分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs。CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力。建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响。结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P<0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P<0.01)。共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P<0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P<0.05)。结论过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗。

1种新来源的内皮祖细胞提取分离方法

目的探索1种新来源内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的提取分离方法,以增加EPCs细胞数量、提高增殖活性。方法拟从胎鼠肺提取分离培养EPCs,分别从形态学、表面标志物、吞噬功能和体外管腔形成等方面验证所提取细胞为EPCs。同时将其与骨髓中提取的内皮祖细胞的细胞增殖活力进行比较。结果从胎鼠肺提取分离培养的细胞,其形态特征与EPCs一致,细胞表达CD31、CD34、CD133、VEGFR2等EPCs特异标志物,可同时吞噬Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1;体外可形成管腔样结构,功能上符合EPCs的表现。胎鼠肺提取的细胞增殖活力明显高于传统从骨髓提取的EPCs。结论胎鼠肺中可提取出数量和质量较好的EPCs,为进一步实验提供可靠的细胞来源。

载基质细胞衍生因子-1α脂质纳米粒-声诺维复合体的制备及特性研究

目的制备一种兼具缓释作用和示踪功能的载基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）脂质纳米粒（SNP）-声诺维复合体（SNP—Sono Vue），并观察其致骨髓间质干细胞（BMSCs）迁移作用。方法制备SNP，检测其物理特性包括粒径大小、zeta电位、形态结构、包封率。构建SNP—SonoVue，观察SNP及低频超声（LIFU）辐照后的SNP—SonoVue缓释情况以及SNP—SonoVue中SonoVue与SNP的结合情况。分别观察以下6组的致BMSCs迁移作用以评价SNP-SonoVue的生物活性：A组，SDF-1α＋1％血清培养基；B组，SNP—SonoVue＋1％血清培养基；C组，LIFU辐照后SNP—SonoVue＋1％血清培养基；D组，空白脂质纳米粒-声诺维复合体（BNP—SonoVue）＋1％血清培养基；E组，LIFU辐照后BNP—SonoVue＋1％血清培养基；F组，PBS＋1％血清培养基（对照组）。观察SNP～SonoVue的体外显像情况。结果制得的SNP平均粒径（220．4±9．9）nm，粒径的分散指数（PDI）为0．172±0．015，平均电位（35．6±1．7）mV。透射电镜下可见SNP呈均匀分散的球形。药物包封率为96．7％，载药量为481．76ng／mg。流式细胞术分析显示SNP质量（mg）与SonoVue微泡（个）的比例为20：（2．8×10^9）～40：（2．8×10^9）是SNP—SonoVue制备的适宜条件。荧光显微镜显示复合体中的SonoVue微泡外壳有大量的DiI标记的带红色荧光SNP。药物缓释实验中可见SNP及LIFU辐照后SNP—SonoVue7d内的药物释放率分别为（68．61±3．97）0A和（63．21±5．68）％，差异无统计学意义（P〉0．05）。细胞迁移实验证实A、B、C组对BMSCs的迁移作用明显强于对照组（P〈0．（15），但A、B、C三组间的差异均无统计学意义（P〉0．05）。体外显影实验可见SNP—SonoVue复合体有明显增强显影作用。结论成功制备SNP—SonoVue，该复合体具有明显的增强显影作用和致BMSCs迁移作用。