桑黄灵芝UE-1多糖抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达

目的观察桑黄灵芝UE-1多糖对人卵巢癌细胞(H08910)和人肝癌细胞(SMMC-7721)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的抑制作用。方法在体外用不同浓度UE-1多糖(0,100,200 mg/L)处理H08910细胞和SMMC-7721细胞后,应用免疫细胞化学染色方法分别检测MMP-2和MMP-9表达。结果 UE-1多糖作用后的H08910细胞和SMMC-7721细胞,MMP-2和MMP-9表达均明显受抑制,并具一定的量效关系。结论桑黄灵芝UE-1多糖在体外可抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达,为其抗肿瘤侵袭作用提供实验依据。

人脂肪干细胞向内皮分化最佳诱导体系的建立

目的探讨人脂肪干细胞(human Adipose-derived stem cells,hADSCs)体外分化为内皮细胞的最佳诱导体系。方法利用胶原酶消化法和贴壁筛选法从人脂肪组织中分离、培养及扩增hADSCs,分3组分别进行内皮诱导:即纤维连接蛋白(fibronectin,FN)包被组、明胶包被组和未铺组;同时诱导液分为两组:单纯内皮细胞生长培养基(EGM2-MV)组及内皮细胞生长培养基(EGM2-MV)+50ng/ml血管内皮细胞生长因子(VEGF165)组。诱导15d后,通过流式细胞术检测各组内皮细胞特异性表面抗原CD34的表达;通过相差显微镜观察诱导前后细胞的一般形态学特征。结果体外分离、培养出高度同源性的hADSCs,CD29、CD44、CD90、CD105及CD166呈阳性表达,而CD34、CD45及HLA-DR呈阴性表达;诱导后细胞流式结果显示单纯EGM-2MV诱导的3组细胞内皮细胞特异性标志CD34阴性表达,而EGM2-MV+50ng/mlVEGF165诱导的细胞,其中FN包被组CD34表达率为8.4%,明胶包被组为5.4%,未铺组为4.2%;相差显微镜下可见诱导后细胞呈三角形或多边形,融合处呈铺路石样生长。结论FN作为细胞外基质与EGM2-MV+50ng/mlVEGF165组成的诱导液协同作用,构成了hADSCs体外分化为内皮细胞的最佳诱导体系,可为临床上缺血性疾病的自体细胞移植治疗提供大量的种子细胞来源。

人脂肪干细胞向脂肪细胞的定向分化

目的:分离和培养人脂肪干细胞(hADSCs),并在体外定向诱导hADSCs分化为脂肪细胞。方法:利用胶原酶消化法和贴壁筛选法从人脂肪组织中分离、培养及扩增hADSCs;应用地塞米松、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤及胰岛素定向诱导hADSCs分化为脂肪细胞。结果:体外分离、培养出高度同源性的hADSCs,hADSCs具有相对特异的细胞表面标志,即CD29、CD73、CD105及CD166呈阳性表达,而CD31及HLA-DR呈阴性表达;hADSCs具有典型的干细胞增殖特点,大部分处于静息期,只有少数细胞处于增殖活跃期;hADSCs能被诱导分化为脂肪细胞。结论:成功地分离、培养出高度同源性的、未分化的hADSCs;体外定向诱导hADSCs可分化为脂肪细胞。

羟基茜草素对GPR35受体激动活性的研究

目的:羟基茜草素为茜草的代表性成分,研究其作用的分子靶标对阐明茜草药效物质基础及作用机理具有重要意义。方法:本研究采用HT-29细胞培养,以其高表达的GPR35受体为靶标,通过无标记细胞靶点药理学技术检测羟基茜草素对GPR35受体的激动活性。结果:研究结果表明,羟基茜草素在HT-29细胞上能够引起DMR响应,且响应曲线类型与GPR35受体激动剂敏喘宁一致,其EC50值为6.142±0.189μmol·L-1。此外,在HT-29细胞上,羟基茜草素对GPR35受体激动剂敏喘宁有脱敏作用,GPR35受体拮抗剂ML145对羟基茜草素有拮抗作用。结论:由此可以推断羟基茜草素为GPR35受体的激动剂。

胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的意义及研究进展

胚胎干细胞(ESCs)是来源于囊胚的内细胞团和受精卵发育至桑椹胚之前的胚胎细胞,具有自我复制和多向分化潜能,是一种全能干细胞.目前已证实ESCs可被诱导分化为胰岛素分泌细胞,将其应用于糖尿病鼠模型取得了可喜的治疗效果,因此对临床应用具有重要价值.对ESCs的体外分离培养、生物学特性、定向分化为胰岛素分泌细胞及相关研究进展作一综述.

人脂肪干细胞的形态学特征

联合应用胶原酶消化、贴壁筛选及单克隆培养法从人脂肪组织中分离、培养人脂肪干细胞(hADSCs),观察hADSCs的形态学特征。通过流式细胞术检测hADSCs表面抗原;通过细胞化学染色和免疫荧光观察hADSCs的一般形态学特征;利用透射电镜分析hADSCs的超微结构。结果显示体外分离、培养出高度同源性的hADSCs,hADSCs具有相对特异的细胞表面标志,即CD29、CD44、CD90、CD105及CD166呈阳性表达,而CD31、CD45及HLA-DR呈阴性表达;hADSCs苏木精-伊红染色见胞浆淡染,油红O及碱性磷酸酶(AKP)染色阴性;免疫荧光CD29、CD166呈阳性;透射电镜下可见hADSCs细胞质内粗面内质网、线粒体丰富,细胞表面可见丰富微绒毛。本实验结果为hADSCs在细胞、组织再生移植修复中的应用提供了形态学基础。

两个黄酮类化合物对GPR35受体激动活性的研究

GPR35受体是G蛋白偶联受体家族中的孤儿受体,它的很多生物学功能还不是很清楚.寻找发现GPR35受体的配体对于GPR35受体的生物学及药理学研究具有重要意义.本研究利用无标记细胞靶点药理学筛选技术,系统研究了天然黄酮类化合物对GPR35受体的激动活性,新发现了草质素和异补骨脂二氢黄酮具有GPR35受体激动活性,其中草质素EC50=(1.452±0.093)μmol/L,是最具药物开发潜力的一个GPR35受体激动剂.

人脂肪干细胞向内皮细胞的定向分化

目的 为解决血管组织工程种子细胞来源不足问题,分离和培养人脂肪干细胞（hADSCs）,并在体外定向诱导hADSCs分化为内皮细胞.方法 利用胶原酶消化法和贴壁筛选法从人脂肪组织中分离、培养及扩增hADSCs;应用纤维粘连蛋白（FN）与富含多种生长因子的内皮细胞支持液EGM2-MV及高浓度血管内皮细胞生长因子（VEGFi6s）50 ng/ml,协同定向诱导hADSCs分化为内皮细胞,然后对其进行形态、表型及功能鉴定.结果 体外分离、培养出高度同源性的hADSCs,hADSCs定向内皮分化后免疫组化及RT-PCR结果显示,内皮特异性标志物CD31、CD34及血管内皮细胞生长因子受体（KDR）阳性表达,透射电镜下观察到内皮特异性结构怀布尔-帕拉德（Weibel-Palade）小体,内皮细胞功能性检测结果显示诱导后hADSCs能够吞噬Dil标记的乙酰化的低密度脂蛋白（Dil-Ac-LDL）及在基质胶（Matrigel）上形成小管样结构,成管数（18.9±1.203）、分支数（31.2±1.304）、结点数（16.9±1.183）,与HUVEC组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 在体外可成功诱导hADSCs分化为内皮细胞.

桑黄灵芝UE-1对SMMC-7721细胞生物学行为的抑制作用

肝癌是常见的恶性肿瘤之一，全球每年约60万人死于肝癌症，开发利用中草药进行抗肿瘤治疗已成为国内外抗肿瘤新药研究的热点。桑黄灵芝UE-1（UE—1）是从真菌桑黄与灵芝中提取的多糖制剂。我们在前期工作中发现UE-1体内抗肿瘤作用可能是通过抑制肿瘤血管新生来完成的。UE-1是否具有体外抗肿瘤作用，尚不完全清楚。本研究拟通过观察UE-1对人肝癌细胞体外生长、铺展、黏附、迁移及侵袭的作用，初步探讨其作用机制，为利用天然中药进行抗肿瘤治疗开辟新途径。