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食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法
被引量:
62
1
作者
何玮玲
张驰
+2 位作者
杨静
黄明
杨军
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1873-1880,共8页
【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总...
【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA的方法;基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别;应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K法与DNeasy试剂盒提取法的DNA效率显著优于CTAB-蛋白酶K法;在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】多重PCR方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。
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关键词
多重PCR
鉴别
猪肉
牛肉
羊肉
鸡肉
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职称材料
含有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分Taqman探针实时荧光PCR检测方法的建立
被引量:
5
2
作者
何玮玲
胡序建
+2 位作者
程欣
黄明
周光宏
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第21期4578-4585,共8页
【目的】建立含有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的用于食品中猪肉和鸡肉成分鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法。【方法】分别基于猪的beta actin基因和鸡的transforming growth factor基因设计引物和探针;考察引物...
【目的】建立含有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的用于食品中猪肉和鸡肉成分鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法。【方法】分别基于猪的beta actin基因和鸡的transforming growth factor基因设计引物和探针;考察引物和探针的特异性与灵敏度;设计并构建扩增内标,优化体系中扩增内标浓度,建立内标实时荧光PCR体系;使用该检测体系对鲜肉和熟肉来源的DNA模板进行检测评价;应用该体系对市售38份样本进行盲样检测。【结果】含有扩增内标的Taqman探针实时荧光PCR体系能有效地进行食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测,非目标物种在40个循环内均无出现扩增,检出限均为0.5 ng DNA;该体系对鲜肉和熟肉来源的DNA模板检测无显著差异;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】该方法准确稳定,可用于食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测。
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关键词
扩增内标
检测
实时荧光PCR
鸡肉成分
猪肉成分
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职称材料
食品中肉类成分种属鉴别技术研究进展
被引量:
58
3
作者
何玮玲
黄明
张驰
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期304-307,共4页
肉与肉制品的掺杂、掺假是食品质量控制面临的重要挑战。食品中肉类成分的鉴别与分析技术已逐步形成了分别以蛋白质检测和以核酸检测为基础的方法体系,其鉴别精度可达属与亚属水平,检测灵敏度也达到了纳克级。近年来,食品中肉类成分的...
肉与肉制品的掺杂、掺假是食品质量控制面临的重要挑战。食品中肉类成分的鉴别与分析技术已逐步形成了分别以蛋白质检测和以核酸检测为基础的方法体系,其鉴别精度可达属与亚属水平,检测灵敏度也达到了纳克级。近年来,食品中肉类成分的定量检测与溯源又成为了本领域中的新研究热点。本文综述食品中肉类成分种属鉴别技术的研究进展,并重点分析应用荧光定量PCR对食品中肉类成分进行定量分析的现状与前景。
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关键词
肉制品
掺假
种属鉴别
定量
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职称材料
食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达
被引量:
11
4
作者
杨静
杨军
+3 位作者
黄继超
何玮玲
张驰
黄明
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第19期4057-4066,共10页
【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标...
【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高(27.45%)。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。
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关键词
食源性金黄色葡萄球菌
肠毒素
基因分型
时序性表达
荧光定量实时PCR
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职称材料
实时荧光PCR法检测食品中鸭肉成分
被引量:
8
5
作者
程欣
何玮玲
黄明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第24期92-96,共5页
以鸭肉细胞核中基因序列(IL-2)为目标序列,设计特异性引物和TaqMan探针,设计并构建扩增内标,针对内标设计TaqMan探针,通过对聚合酶链式反应(PCR)反应体系和反应条件的优化,建立用于检测食品中鸭肉成分的添加有扩增内标的的荧光PCR方法...
以鸭肉细胞核中基因序列(IL-2)为目标序列,设计特异性引物和TaqMan探针,设计并构建扩增内标,针对内标设计TaqMan探针,通过对聚合酶链式反应(PCR)反应体系和反应条件的优化,建立用于检测食品中鸭肉成分的添加有扩增内标的的荧光PCR方法。通过扩增曲线和Ct值分析该方法的特异性、检测限和灵敏度。结果表明:TaqMan探针实时荧光PCR法具有很高的特异性,所建立的方法能够检测出0.5ng的鸭组分DNA,灵敏度可达0.1%。应用该方法对市售38份样本进行抽样检测,结果令人满意。
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关键词
细胞核基因
扩增内标
实时荧光聚合酶链式反应
鸭肉
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职称材料
反对论文抄袭 打击学术腐败
6
作者
何玮玲
《管理观察》
2009年第22期130-130,共1页
近日,公众最为关注的事件之一,29岁清华硕士当选中国最年轻的市长。孰不知,竟有网友报料,这位周森锋市长在攻读硕士研究生期间,居然也出现了论文抄袭现象,引得网民一片哗然。
关键词
论文抄袭
学术腐败
硕士研究生
抄袭现象
市长
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职称材料
题名
食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法
被引量:
62
1
作者
何玮玲
张驰
杨静
黄明
杨军
机构
南京农业大学食品科技学院/肉品加工与质量控制教育部重点实验室
南京市产品质量监督检验院
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期1873-1880,共8页
基金
农业部公益性行业科研专项(200903012)
国家质检总局计划科技项目(2010QK17820)
文摘
【目的】建立快速可靠的用于食品中4种肉类(猪肉、牛肉、羊肉和鸡肉)成分快速鉴别的通用引物多重PCR(universal primers-multiplex PCR,UP-M-PCR)方法。【方法】使用DNeasy试剂盒提取法、SDS-蛋白酶K法和CTAB-蛋白酶K法分别提取肉类中总DNA,通过比较提取效率和纯度,确定提取肉类中总DNA的方法;基于动物线粒体细胞色素b基因的差异性位点,设计两组各5条长度不同的多重PCR引物,建立并优化多重PCR反应体系,通过电泳检测扩增产物分子量差异实现4种肉类的快速鉴别;应用优化的多重PCR方法对80份市售食品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性。【结果】SDS-蛋白酶K法与DNeasy试剂盒提取法的DNA效率显著优于CTAB-蛋白酶K法;在优化的反应条件下,选择特异性高、序列较长的多重PCR引物可有效地进行食品中猪、牛、羊和鸡源性成分的快速鉴定,检测灵敏度达到皮克级DNA;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】多重PCR方法精确稳定,可用于食品中多种动物源性成分的快速鉴别。
关键词
多重PCR
鉴别
猪肉
牛肉
羊肉
鸡肉
Keywords
multiplex PCR
identification
pork
beef
lamb
chicken
分类号
TS251.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
含有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分Taqman探针实时荧光PCR检测方法的建立
被引量:
5
2
作者
何玮玲
胡序建
程欣
黄明
周光宏
机构
南京农业大学食品科技学院/肉品加工与质量控制教育部重点实验室
河南省商丘市技术监督局/国家面粉及制品质量监督检验中心
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第21期4578-4585,共8页
基金
公益性行业(农业)科研专项(201303083-2)
"十二五"农村领域国家科技计划(2011AA100805)
农业科技成果转化资金(2012GB2C100151)
文摘
【目的】建立含有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的用于食品中猪肉和鸡肉成分鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法。【方法】分别基于猪的beta actin基因和鸡的transforming growth factor基因设计引物和探针;考察引物和探针的特异性与灵敏度;设计并构建扩增内标,优化体系中扩增内标浓度,建立内标实时荧光PCR体系;使用该检测体系对鲜肉和熟肉来源的DNA模板进行检测评价;应用该体系对市售38份样本进行盲样检测。【结果】含有扩增内标的Taqman探针实时荧光PCR体系能有效地进行食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测,非目标物种在40个循环内均无出现扩增,检出限均为0.5 ng DNA;该体系对鲜肉和熟肉来源的DNA模板检测无显著差异;对市售食品样本的鉴别验证了方法的实用价值。【结论】该方法准确稳定,可用于食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测。
关键词
扩增内标
检测
实时荧光PCR
鸡肉成分
猪肉成分
Keywords
Internal amplification control (IAC)
detection
real-time PCR
chicken ingredient
pork ingredient
分类号
TS207.3 [轻工技术与工程—食品科学]
O657.3 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
食品中肉类成分种属鉴别技术研究进展
被引量:
58
3
作者
何玮玲
黄明
张驰
机构
南京市产品质量监督检验院
南京农业大学食品科技学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012年第3期304-307,共4页
基金
国家质检总局科技计划项目(2010QK178)
文摘
肉与肉制品的掺杂、掺假是食品质量控制面临的重要挑战。食品中肉类成分的鉴别与分析技术已逐步形成了分别以蛋白质检测和以核酸检测为基础的方法体系,其鉴别精度可达属与亚属水平,检测灵敏度也达到了纳克级。近年来,食品中肉类成分的定量检测与溯源又成为了本领域中的新研究热点。本文综述食品中肉类成分种属鉴别技术的研究进展,并重点分析应用荧光定量PCR对食品中肉类成分进行定量分析的现状与前景。
关键词
肉制品
掺假
种属鉴别
定量
Keywords
meat products
adulteration
species identification
quantification
分类号
TS207.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达
被引量:
11
4
作者
杨静
杨军
黄继超
何玮玲
张驰
黄明
机构
南京农业大学食品科技学院/教育部肉品加工与质量控制重点实验室
南京市产品质量监督检验院
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第19期4057-4066,共10页
基金
江苏省自然科学基金项目(BK2010117)
国家公益性行业科研专项(200903012)
文摘
【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高(27.45%)。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。
关键词
食源性金黄色葡萄球菌
肠毒素
基因分型
时序性表达
荧光定量实时PCR
Keywords
foodbome Staphylococcus aureus
enterotoxin
gene typing
temporal expression
real-time PCR
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
实时荧光PCR法检测食品中鸭肉成分
被引量:
8
5
作者
程欣
何玮玲
黄明
机构
南京农业大学食品科技学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第24期92-96,共5页
基金
国家"863"计划项目(2011AA100 805-1)
农业部公益性行业(农业)科研专项(201303083-2)
国家农业科技成果转化资金项目(2012GB2C100151)
文摘
以鸭肉细胞核中基因序列(IL-2)为目标序列,设计特异性引物和TaqMan探针,设计并构建扩增内标,针对内标设计TaqMan探针,通过对聚合酶链式反应(PCR)反应体系和反应条件的优化,建立用于检测食品中鸭肉成分的添加有扩增内标的的荧光PCR方法。通过扩增曲线和Ct值分析该方法的特异性、检测限和灵敏度。结果表明:TaqMan探针实时荧光PCR法具有很高的特异性,所建立的方法能够检测出0.5ng的鸭组分DNA,灵敏度可达0.1%。应用该方法对市售38份样本进行抽样检测,结果令人满意。
关键词
细胞核基因
扩增内标
实时荧光聚合酶链式反应
鸭肉
Keywords
nuclear DNA
intemal amplification control
fluorescent real-time polymerase chain reaction
duck meat
分类号
TS251.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]
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职称材料
题名
反对论文抄袭 打击学术腐败
6
作者
何玮玲
机构
南京农业大学生命科学院生物技术
出处
《管理观察》
2009年第22期130-130,共1页
文摘
近日,公众最为关注的事件之一,29岁清华硕士当选中国最年轻的市长。孰不知,竟有网友报料,这位周森锋市长在攻读硕士研究生期间,居然也出现了论文抄袭现象,引得网民一片哗然。
关键词
论文抄袭
学术腐败
硕士研究生
抄袭现象
市长
分类号
G642.477 [文化科学—高等教育学]
G311 [文化科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
食品中4种肉类成分多重PCR的快速鉴别方法
何玮玲
张驰
杨静
黄明
杨军
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
62
下载PDF
职称材料
2
含有扩增内标的食品中猪肉和鸡肉成分Taqman探针实时荧光PCR检测方法的建立
何玮玲
胡序建
程欣
黄明
周光宏
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
下载PDF
职称材料
3
食品中肉类成分种属鉴别技术研究进展
何玮玲
黄明
张驰
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2012
58
下载PDF
职称材料
4
食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达
杨静
杨军
黄继超
何玮玲
张驰
黄明
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
11
下载PDF
职称材料
5
实时荧光PCR法检测食品中鸭肉成分
程欣
何玮玲
黄明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013
8
下载PDF
职称材料
6
反对论文抄袭 打击学术腐败
何玮玲
《管理观察》
2009
0
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职称材料
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