南极嗜冷杆菌脂肪酶的原核可溶性表达优化及酶学性能表征

脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,将来源于南极嗜冷杆菌属(antarctic psychrotrophic bacterium,Psychrobacter sp.7195)的嗜冷脂肪酶(Lip7195)在大肠杆菌系统中进行高效可溶性表达优化,并进行酶学性能表征。首先对Lip7195基因进行大肠杆菌偏好密码子优化,并通过添加多聚阳离子氨基酸标签等手段,优化重组Lip7195的可溶性表达。结果显示,添加多聚阳离子氨基酸标签的方法有效增加了目的蛋白的可溶性。对纯化后的重组酶进行酶学定性,结果显示,在40℃、p H 9.0时,重组Lip7195酶活性最高,比酶活最高达10.9 U/mg;在30~40℃、p H 8.0~10.0范围,重组Lip7195具有较好的稳定性;Co^(2+)对酶活力有激活作用。研究结果表明,在保持嗜冷脂肪酶特有的酶学性质基础上,添加多聚阳离子氨基酸标签有效改善了其在原核表达中易形成包涵体的问题。