病理学双语教学的几点体会

为培养具有较高水平英语交流能力的医学人才,我们尝试在七年制、五年制各专业医学生的病理教学中开展了双语教学。通过课前精心准备、采用多种教学方法和手段,课后强化训练等,获得了较好的效果。本文总结了几点经验和体会。

丙型肝炎病毒NS3基因对人肝细胞生物学特性的影响

目的:建立稳定转染HCVNS3的人源肝细胞系,探讨HCVNS3对肝细胞生物学特性的影响。方法:通过脂质体将HCVNS3的真核表达质粒稳定转染至QSG7701细胞(pRcHCNS3/QSG细胞),PCR,WesternBlot,免疫组化检测基因的整合和表达;光学显微镜和电子显微镜观察转染前后细胞超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率变化;生长曲线,软琼脂集落实验,成瘤性实验探讨HCVNS3对肝细胞增殖的影响。结果:HCVNS3基因在pRcHCNS3/QSG细胞中得到整合和表达,定位于细胞浆。形态学显示出增殖旺盛的的特点,流式细胞仪检测pRcHCNS3/QSG细胞G0/G1期细胞数目减少而S期细胞数目增加,生长曲线和软琼脂集落实验表明pRcHCNS3/QSG细胞倍增时间明显缩短,停泊非依赖性生长能力明显增强,并能接种裸鼠成瘤,免疫组化证实肿瘤组织有HCVNS3蛋白表达。电镜和流式细胞仪检测显示HCVNS3能促进pRcHCNS3/QSG细胞凋亡。但其促增殖速度远大于凋亡率,表现为pRcHCNS3/QSG细胞获得恶性表型和致瘤性。结论:HCVNS3能明显促进人肝细胞QSG7701恶性转化,pRcHCNS3/QSG细胞可作为研究HCVNS3致癌机理的细胞模型。

双向电泳和质谱技术分析HCV NS3转化肝细胞的蛋白质组

目的:持续感染丙型肝炎病毒(HCV)在肝细胞癌(HCC)发生中起重要作用,细胞转染和成瘤实验表明HCV NS3对人肝细胞具有转化作用和致瘤活性。本实验旨在探讨HCV非结构蛋白3(NS3)转化肝细胞的蛋白质组。方法:构建稳定表达HCV NS3 N端多肽的人肝细胞(pRcHCNS3/QSG)及空白质粒转染细胞(pRcCMV/QSG),双向电泳技术分离两种细胞的总蛋白,差异蛋白质点进行质谱分析,Western印迹验证蛋白表达差异。结果:得到分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。pRcHCNS3/QSG和pRcCMV/QSG细胞的蛋白质斑点数分别为(1183±77)和(1095±82)个,两组平均匹配数为(920±60)个。初步鉴定出15个有意义的蛋白质点。其中Ras,P38,HD53等参与调节信号转导的蛋白在pRcHCNS3/QSG细胞中表达上调,Western印迹结果亦证实pRcHCNS3/QSG细胞中磷酸化的P44/42和P38表达增加。鉴定出的差异蛋白质还包括一些调节细胞周期、免疫反应、与肿瘤侵袭和转移相关的蛋白质及参与肝脏代谢的蛋白质。结论:HCV NS3可能通过影响多种蛋白表达,经相应信号转导途径,如丝裂原活化蛋白激酶途径,使细胞发生恶性转化。进一步弄清信号转导过程和相互关系不仅对了解HCV相关性HCC的发生机制有重要意义,而且为从分子水平治疗HCC提供新思路。

精氨酸修饰的磁性纳米基因载体的研究

采用多层修饰方法制备出精氨酸修饰的磁性纳米基因载体，对样品进行了粒度分析、Zeta电位分析、耐酸性能、生物相容性、体外细胞转染性能研究。结果显示，精氨酸修饰的磁性纳米颗粒均匀，分散性好，大多呈圆球型，平均粒径为15nm，粒径范围10～20nm，其Zeta电位为＋29．3mV；多层修饰的纳米磁粒在pH2．0的酸中具有很好的耐酸性能，而未处理的纳米粒子在酸溶液中发生了溶解。MTT实验结果显示，纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性；体外细胞转染的结果表明，精氨酸修饰的纳米磁粒能介导pEGFP-N1质粒转染HepC2细胞，并在细胞中表达绿色荧光蛋白。因此，精氨酸修饰的磁性纳米颗粒作为一种新型非病毒基因载体具有介导核酸类生物大分子的应用价值。

病理学规范化教案书写的实践和体会

该文以消化系统疾病为例,从教案的格式、内容、教学方法、手段、教书育人等方面浅谈病理学规范化教案的书写实践和体会。规范化教案编写要做到教案格式完整,教学目的明确,教学内容组织合理,教学方法运用恰当,从而保证教学质量,促进教学改革和研究。

强化病理学实验教学,培养医学生综合素质

病理学是实践性很强的形态学学科,病理实验有利于理解和掌握病理学知识,提高学生观察、分析和解决问题的能力。应不断更新教学内容,采用多种教学方法和手段加强实验教学效果,多方面培养和提高医学生综合素质。

基质金属蛋白酶与肝癌的浸润转移

HCC易发生早期转移 ,MMPs与HCC浸润转移密切相关 ,过去对MMPs作用的理解主要局限在其能降解ECM ,去除肿瘤转移的机械性屏障。近来研究表明MMPs还可通过影响多种生长因子活性 ,水解蛋白质释放某些生物活性物质在肿瘤发展中起作用。对MMPs及其抑制剂的研究不仅可为肿瘤治疗提供新靶点 ,还可作为肿瘤侵袭转移与预后的重要指征。

HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响

目的研究HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响。方法通过脂质体稳定转染分别建立表达HCV NS3蛋白的pRcHCNS3/QSG细胞,空白质粒转染细胞pRcCMV/QSG。用Western Blot和免疫细胞化学分别检测磷酸化p44/42,磷酸化p38,磷酸化SAPK/JNK在pRcHCNS3/QSG细胞和pRcCMV/QSG细胞及未转染的QSG7701细胞的表达差异及细胞内的定位;免疫共沉淀实验检测HCV NS3对磷酸化酪氨酸蛋白表达水平的影响。结果pRcHCNS3/QSG细胞,pRcCMV/QSG细胞,未转染的QSG7701细胞抽提的总蛋白中均可检测出磷酸化p44/42,磷酸化p38,磷酸化SAPK/JNK的表达,阳性信号定位于细胞核。上述3种蛋白在pRcHCNS3/QSG细胞的表达较pRcCMV/QSG细胞和未转染的QSG7701细胞表达增强,其磷酸化酪氨酸蛋白的表达也较其他两对照组增强。结论HCV NS3可能通过影响酪氨酸蛋白激酶的表达及活性,使一系列受酪氨酸蛋白激酶调节的蛋白质如MAPK分子异常磷酸化而活化,激活下游信号转导通路,导致肝细胞无限增殖和肿瘤形成。

纳米谷氨酸壳聚糖制备及其体外质粒转染研究

采用表面修饰方法制备出谷氨酸修饰的壳聚糖纳米基因载体。对样品进行红外分析、粒度分析、zeta电位分析、生物相容性、凝胶阻滞分析、DNA保护性试验、体外细胞转染研究。结果显示所制得的谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒平均粒径为170nm,其zeta电位为+4.7mV。红外分析显示谷氨酸已通过酰胺键结合在壳聚糖上。MTT实验结果显示纳米颗粒与细胞有良好的生物相容性。凝胶阻滞分析和DNA保护试验结果表明纳米载体可与DNA通过电性结合作用而结合,并可以有效保护DNA,防止核酸酶对其的降解作用。而体外细胞转染的结果表明,谷氨酸修饰的纳米粒能介导pEGFP-N1质粒转染HepG2细胞并在细胞中表达绿色荧光蛋白。因此,谷氨酸修饰的壳聚糖纳米颗粒可作为一种新型非病毒基因载体介导核酸类生物大分子进入细胞内。

TLR4,NOD2和NLRP3在牙髓炎中的表达

目的:分析牙髓炎中TLR4、NOD2和NLRP3的表达特征。方法:收集健康、龋病及牙髓炎的患牙共47颗分为3个组,采用免疫组织化学染色和单色免疫荧光染色方法检测每组牙髓组织中TLR4、NOD2、NLRP3的表达。结果:健康组中TLR4、NOD2和NLRP3仅在成牙本质细胞中少量表达。TLR4、NOD2和NLRP3在牙髓炎组及龋病组表达均明显高于正常组,大量表达于排列紊乱的成牙本质细胞和多种炎症细胞中,而在炎性病灶周边的牙髓成纤维细胞中三者也有表达。结论:本研究表明TLR4、NOD2和NLRP3在炎性牙髓组织中表达同时增高,提示三者均与牙髓炎的进展相关。

蛋白质组学在肝癌研究中的应用

肝癌的发病机制至今仍不日月了,且缺乏有效的早期诊断方法和治疗靶点。以往对肝癌的研究多数集中于单个或少数几个基因或蛋白质,随着蛋白质组学技术和方法的迅速发展, 从整体上探讨肝癌这类多基因、多蛋白参与的疾病生化过程成为可能。

肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1的表达分析

BRG1(brahma-related gene1)是进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一.研究表明:BRG1具有抑瘤基因的特征,可能与肿瘤的发生发展有关.我们采用RT-PCR、Northern杂交和Westernblotting证实:肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达,而肺鳞癌细胞系NCI-H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRG1的表达.同时,通过RT-PCR检测10例肺癌组织标本,发现60%(6/10)的肺癌组织中BRG1的mRNA水平明显下调,而配对正常肺组织中BRG1的mRNA表达未见改变.对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色,结果显示:肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9%(11/29),配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90%(9/10),两者的差异有显著性(P<0.05).这提示BRG1确实在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失,在肺癌发病过程中可能起一定的作用.

丙型肝炎病毒NS3蛋白促进人源肝细胞的增殖及其相关机制研究

丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白与肝癌细胞(HCC)的发生密切相关,但其机制尚不清楚.既往体外研究极少采用HCV的自然宿主细胞——人肝细胞作为研究体系,故所获研究结果有待进一步探讨和证实.构建了表达HCVNS3蛋白的真核质粒,通过稳定转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立了稳定表达HCVNS3蛋白的人源永生化肝细胞系QSG7701/NS3,以此为实验平台,检测了细胞增殖的变化,丝裂原蛋白激酶(MAPK)通路激酶磷酸化水平的改变及转录因子AP-1、NF-κB和STAT3的活性变化.结果表明:HCVNS3蛋白可促进人源永生化肝细胞QSG7701的增殖,HCVNS3蛋白激活ERKs/AP-1可能是其促进细胞增殖的重要机制,并通过上调转录因子NF-κB和STAT3的活性,诱导宿主细胞急性炎症损伤.

18例血管免疫母T细胞性淋巴瘤临床病理特征与诊断

目的:探讨血管免疫母T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)的临床特征和病理表现,为本病的诊断提供依据。方法:回顾分析2002年7月至2007年9月中南大学湘雅医院明确诊断的18例AITL患者的临床和病理资料,其中男9例,女9例,发病年龄从14～70岁。结果:AI-TL主要表现为淋巴结肿大、发热、脾大和皮疹,伴有多克隆性高球蛋白血症和其他血液学异常如白细胞升高、Coombs试验阳性,常累及骨髓,具有特征性的病理组织学表现,免疫组织化学实验显示B-淋巴细胞趋化因子CXCL13阳性率为93.3%。结论:反复多次淋巴结等部位的活检有助于本病确诊,病理组织学检查结合免疫组织化学分型如CXCL13等具有重要的诊断和鉴别诊断意义。

磁性纳米生物材料在医学上的应用

磁性纳米生物材料因其独特的性能而具有广泛的应用价值,尤其在肿瘤治疗,细胞及生物分子的分离纯化,临床诊断和组织工程领域,给人类疾病的治疗带来了新的契机和希望。本文介绍和评估了国内外纳米磁粒在医学应用上的进展,并展望了其未来。

“先行组织者”教学策略在病理教学中的应用

“先行组织者”学习理论是奥苏伯尔20世纪60年代提出来的。我系在病理教学中实践应用“先行组织者”教学策略,并与网络教学手段相结合,有助于提高学生的学习效果。

表达HCV NS3蛋白肝细胞中ERK与NF-κB信号转导通路间的cross-talk研究

目的:研究表达丙型肝炎病毒非结构蛋白3(hepatitis C virus non-structural protein3,HCVNS3)的肝细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)与核因子κB(nuclear fac-torκB,NF-κB)信号转导通路间的cross-talk。方法:真核表达质粒pcDNA3.1-NS3转染人源永生化肝细胞系QSG7701,建立稳定表达HCV NS3蛋白的细胞株QSG7701/NS3。在丝裂原活化蛋白激酶的激酶(MAP kinase kinase,MEK)抑制剂PD98059(0,30,50,100μmol/L)处理细胞QSG7701/NS3前后,利用Western免疫印迹检测ERK的磷酸化水平及细胞周期素D1(cyclin D1)蛋白的表达;凝胶电泳阻滞迁移试验检测转录激活因子1(activator protrin1,AP-1)、NF-κB等转录因子活性的改变;流式细胞术检测细胞周期各期百分数的改变;MTT比色法观察其对细胞增殖的影响。结果:HCV NS3蛋白能上调QSG7701细胞的ERK磷酸化水平及cyclin D1的表达水平;PD98059抑制HCV NS3蛋白介导的细胞增殖,下调AP-1和NF-κB的活性及cyclin D1的表达。结论:在表达HCV NS3蛋白的肝细胞中,ERK抑制剂能抑制肝细胞增殖,并呈明显的剂量依赖关系。ERK与NF-κB信号转导通路间可能存在cross-talk,并在肝细胞的增殖和恶性转化中发挥协同作用。

纳米铁酸锌(ZnFe_2O_4)的表面改性

采用化学修饰方法,以二氧化硅为内层修饰材料,r-氨丙基三甲氧硅烷(APS)偶联剂为外层修饰材料,对磁性ZnFe2O4纳米粒子进行了双层修饰。并采用XRD、IR、Zeta电位对未包裹粒子,二氧化硅包裹的磁纳米粒子,APS和二氧化硅双层包修饰的纳米磁粒进行表征。同时也比较了三种粒子的耐酸性能。结果显示硅包裹的纳米磁粒Zeta电位明显向酸性方向移动,而双层的纳米磁粒Zeta电位向碱性方向移动。包裹的纳米磁粒在pH2.0的酸中具有很好的耐酸性能,而未处理的纳米粒子在酸溶液中发生了溶解。

新型氨基化磁性纳米粒子的合成

通过嫁接方法在包有二氧化硅的纳米CoFe2O4磁粒表面进行氨基化修饰,制备出一种可用于生物医学领域的新型氨基化纳米磁粒,采用TGA-DTA,IR,VSM和Zeta-potential等测定方法,对氨基化和未氨基化的CoFe2O4纳米粒子进行了表征。元素分析结果显示,有0.98 mmol/g的有机分子固定在纳米粒子表面;红外和热分析数据显示,带氨基的有机分子嫁接到磁粒表面的二氧化硅壳层上;Zeta电位数据也显示,带氨基的有机分子嫁接到纳米磁粒表面;样品的磁性参数显示,氨基化纳米磁粒仍具有好的磁学性能。

载银纳米磁粒抗菌剂的研究

采用双层包裹法首次制备出载银磁粒抗菌剂。并对样品进行SEM、XRD、IR、磁性参数分析和抗菌性能研究,结果显示磁粒抗菌剂的平均粒径为75nm,粒径均匀,基本呈圆球型。二氧化硅以无定形状态存在,银以银单质出现在纳米粉体中。磁粒抗菌剂的饱和磁化强度比纳米铁氧体减小,但仍具有好的磁性。银含量>3.87%时,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有99.9%的杀菌性能。