非小细胞肺癌EML4/ALK融合基因检测

目的建立荧光原位杂交方法(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测 EML4/ALK融合基因的方法。方法依据 ALK 和 EML4 断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价 EML4/ALK 融合基因检测探针的灵敏度和特异性,以非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织样本为对象进行 EML4/ALK 融合基因检测探针的性能评价。结果本研究建立的 FISH 检测方法在人外周血培养细胞检测中的特异性和灵敏度均达到 100%。在对 10 例 NSCLC腺癌患者石蜡包埋组织样本检测中,筛查出 1 例 EML4/ALK FISH 阳性样本。结论本研究制备的双色荧光探针可用于非小细胞肺癌 EML4/ALK 融合基因检测。

呼吸道合胞病毒及其基因检测

呼吸道合胞病毒是引起婴幼儿呼吸道疾病的重要病原体,易引起毛细支气管炎和肺炎,产生严重的感染和并发症。儿童感染后可能会表现出喂养效果差、鼻漏、呼吸暂停、喘鸣和呼吸窘迫等症状。成人急性感染也很常见,对于免疫力低下的老年人也可能引起严重肺炎,并发展为成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。分别对呼吸道合胞病毒的分子生物学特征、流行病学、临床症状、预防和治疗、临床和试验室检测方法进行介绍,以加深对该病毒的了解。

玉米籽粒直链淀粉含量的近红外透射光谱无损检测

以214份玉米样品为材料,利用近红外谷物分析仪对样品进行光谱扫描,并测定直链淀粉含量的参比数据,借助于WinISI软件,采用多种数学处理方法和不同的回归统计方法进行定标曲线的开发,优化得到了玉米籽粒直链淀粉含量测定的近红外定标方程,其中直链淀粉占总淀粉含量及直链淀粉占样品干重两个定标方程的定标标准偏差(SEC)、定标相关系数(RSQ)、交叉验证标准误差(SECV)和检验工作标准误差(SEP)分别为2.3201和1.2064、0.8860和0.8856、2.5896和1.3769、3.368和2.133。通过内部交叉验证和外部交叉验证及对其它的231份自交系、杂交种和高直链淀粉自交系进行预测,结果表明,近红外分析技术具有较高的准确度,能代替常规化学分析方法应用于玉米育种的早代材料直链淀粉含量的筛选,可作为高直链淀粉玉米育种的一种简便快速的无损筛选技术。

60Co-γ射线辐照对玉米淀粉特性及降解的影响

以^60Co为辐射源，研究了0～1000kGy间不同辐照剂量刘玉米淀粉物理和化学性质以及降解的影响，分析了辐射剂量与寡糖生成间的关系。结果表明：辐射可导致淀粉的聚合度下降，酸度、溶解度随辐射剂量的增加而上升，透明度的变化较复杂，总体呈增加趋势。辐射对淀粉的降解作用明显，辐射剂量与降解程度是正相关性，在0～J000kGy间，随辐射程度的加大，淀粉中总精的含量下降，还原糖含量上升，可超滤部分增多。在1000kGy时，可溶性还原糖含量达到最大值，为43．9％，其中分子量大于3000Da和1000～3000Da（DP：6～18）间的可溶性低聚糖含量达到最高，分别为33．6％和7．2％，而在300kGy时分子量小于1000Da的低聚糖含量达到最大，其值为4．3％。

FISH与IHC检测414例乳腺癌Her-2基因表达状态的比较

目的比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学(IHC)检测乳腺癌Her-2基因扩增情况的一致性与相关性。方法分别采用FISH和IHC检测414例乳腺癌组织Her-2基因扩增的情况,对两种方法检测结果进行统计学比较分析。结果两种方法检测结果有统计学差异(P=0.000),与FISH的一致性在IHC检测c-erbB-2(+++)和(-～+)组较好Kappa值=0.643,两者一致率为83.2%,而在c-erbB-2(++)组一致性较差。结论 IHC可以作为初步筛查乳腺癌Her-2基因状态的首选方法。在c-erbB-2(+++)和(+～-)中常可以用IHC代替FISH检测HER-2基因扩增状况,而对于c-erbB-2(++)则应常规进行FISH检测。

呼吸道合胞病毒实时荧光RT-PCR定量检测方法的建立

目的建立实时荧光RT-PCR(real-time fluorescent reverse transcriptase PCR,real-time fluorescent RT-PCR)一步法定量检测人呼吸道合胞病毒的方法。方法以人呼吸道合胞病毒基因的保守序列为模板设计特异性引物和探针,通过优化相关反应体系和条件,建立实时荧光RT-PCR一步法检测样本中呼吸道合胞病毒的方法;对方法的特异性,灵敏度,重复性进行了评价。结果本研究建立的实时荧光RT-PCR一步法检测方法特异性好,灵敏度可以达到500PFU/mL,重复性Ct值的变异系数均小于5%。结论本研究建立的实时荧光RT-PCR定量检测方法可靠、准确、简便、稳定。

PDGFRB基因重排检测方法的建立

目的建立荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridization,FISH)检测PDGFRB基因重排的方法。方法依据PDGFRB断裂重排方式,设计、制备双色荧光探针。以人外周血培养淋巴细胞为检测对象评价PDGFRB基因重排检测探针的灵敏度和特异性,建立阴性阈值。以白血病患者的骨髓和外周血样本为对象进行PDGFRB重排检测性能评价。结果本研究建立的FISH检测方法在人外周血培养淋巴细胞检测中特异性和灵敏度均达到100%,在对28例样本检测中,筛查出1例PDGFRB FISH阳性样本。结论本研究制备的双色荧光探针可用于PDGFRB基因重排检测。