宽体金线蛭不同工艺提取物的抗凝溶栓活性比较研究

宽体金线蛭(Whitmania pigra)具有抗凝溶栓的药理作用,但其药效受提取工艺的影响。为全面评价并筛选出合适的提取工艺,本试验采用脱脂、水提、酸提和酶解等不同工艺制备了14种提取物,并对提取物的抗凝活性、纤溶活性与体外溶栓活性进行分析。结果表明,脱脂胃蛋白酶酶解提取物的抗凝血酶活性显著高于其他提取物,且具有较强的纤溶活性和体外溶栓活性;仿生酶解提取物具有较强的抗凝血酶活性和体外溶栓活性;脱脂仿生酶解提取物具有较强的纤溶活性和体外溶栓活性;脱脂加热的水提提取物具有较强的纤溶活性和体外溶栓活性。脱脂胃蛋白酶酶解提取物中,分子量小于3 kDa的多肽具有较强的抗凝血酶活性和纤溶活性。此外,三个水提提取物、仿生酶解物、脱脂仿生酶解物和粗酶酶解提取物对纤维蛋白原的α肽链均具有溶解作用。综上所述,宽体金线蛭提取物均具有抗凝溶栓的药理作用,酶解提取物优于水提提取物和酸提提取物,脱脂处理有利于活性物质的提取,其中胃蛋白酶酶解提取物效果最佳,并且脱脂胃蛋白酶酶解物的小分子多肽成分具有最佳的抗凝血酶活性和纤溶活性。本试验结果为进一步开发利用宽体金线蛭的药理作用提供了理论依据。

宽体金线蛭提取物对HEK293细胞维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)通路的影响

维甲酸诱导基因蛋白样受体(RLRs)信号通路是机体重要的抗病毒作用途径。宽体金线蛭体内含有抗凝血的活性物质,主要用于治疗血栓等疾病,但对于该信号通路的影响尚无任何报道。本试验目的是采用聚肌苷酸聚胞苷酸(Poly I∶C)建立HEK293细胞RLRs信号通路激活模型,在此基础上揭示宽体金线蛭提取物(LE)对HEK293细胞RLRs信号通路的影响。试验首先转染3个不同质量浓度(1、2、4μg·mL^(-1))的Poly I∶C至HEK293细胞,并分别处理12 h、24 h和48 h,以维甲酸诱导基因I(RIG-I)的蛋白表达水平和mRNA转录水平为RLRs通路激活的指标。RLRs信号通路激活之后,采用LE对HEK293细胞进行处理,共设置4组,每组3个重复,分别为:对照组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染组、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加150μg·mL^(-1)的水蛭提取物、2μg·mL^(-1) Poly I∶C转染且添加300μg·mL^(-1)的水蛭提取物。处理时长分别为24 h和48 h。试验结果表明,转染3个剂量的Poly I∶C在3个处理时长均引起细胞活力降低,2μg·mL^(-1)和4μg·mL^(-1) Poly I∶C转染HEK293细胞12 h、24 h和48 h均显著提高了RIG-I蛋白的表达量,4μg·mL^(-1)的Poly I∶C转染组RIG-I mRNA转录水平在24 h和48 h显著提高。选择Poly I∶C质量浓度2μg·mL^(-1),处理24 h和48 h作为后续试验激活RLRs的处理条件。质量浓度为150μg·mL^(-1) LE可以显著抑制Poly I∶C介导的细胞活力降低;300μg·mL^(-1)的LE显著降低了RIG-I的蛋白水平;150μg·mL^(-1)和300μg·mL^(-1) LE处理24 h和48 h后均显著抑制了β干扰素的mRNA转录和生成。据此得出如下结论:Poly I∶C转染HEK293细胞成功地激活了RLRs信号通路,宽体金线蛭提取物具有促进HEK293细胞活力和抑制β干扰素生成的作用。

全身伽玛刀围治疗期的护理

目的 :探讨全身伽玛刀围治疗期的护理要点。方法 :通过对 4 95例恶性肿瘤患者围治疗期的护理 ,观察患者接受伽玛刀治疗的情况。结果 :通过对定位前、定位中 ;治疗前、治疗中 ;治疗后及治疗间歇期的护理 ,大部分患者能较顺利地完成伽玛刀治疗。结论 :加强全身伽玛刀围治疗期的护理对保证治疗顺利进行具有重要作用。

MicroRNA-499对中华鳖脂类代谢相关基因表达的影响

采用体内注射microRNA-499特异性抑制剂antagomirs的方法,揭示microRNA-499对中华鳖脂类代谢相关基因的调控作用。选取健康稚鳖15只,随机分成3组,分别设为空白对照组、注射生理盐水组和注射miR-499 antagomirs组。在同一时间点连续注射3 d后,测定中华鳖血清和肝脏中甘油三酯和总胆固醇含量,采用实时荧光定量PCR测定肝脏中microRNA-499和脂类代谢相关基因表达水平。结果表明,相对于空白对照组和注射生理盐水组,注射miR-499 antagomirs导致中华鳖肝脏甲状腺激素应答蛋白(THRSP)和钠/碘共同转运体(NIS)的表达水平升高,肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)表达水平降低(P<0.05)。microRNA-499影响中华鳖脂类代谢相关基因的表达水平,这可能与中华鳖脂肪生成和脂肪酸β-氧化有关。

中华鳖胚胎肝成纤维细胞的原代培养及其聚肌苷酸胞苷酸(Poly I:C)刺激模型构建

为建立中华鳖胚胎肝成纤维细胞的体外分离培养体系,研究聚肌苷酸胞苷酸(Poly I:C)刺激对细胞干扰素生成通路相关因子的影响,从而最终构建基于该成纤维细胞的干扰素生成通路激活模型,以发育至23期的中华鳖胚胎为实验材料,采用胰蛋白酶消化法得到肝成纤维细胞,结合细胞形态学、生长曲线和PCR法进行鉴定,并分析其生物学特性。之后,用Poly I:C转染细胞24 h,检测细胞形态和干扰素生成信号通路相关因子的基因和蛋白表达水平。结果表明:应用构建的体外分离培养体系得到的中华鳖胚胎肝成纤维细胞生长状况良好,成功传至20代,该细胞的生长曲线为“S”形,符合细胞增殖规律,可检测到成纤维细胞标记基因VIM和ACTA2,确定为成纤维细胞。冻存前后,细胞存活率分别为90.51%和82.95%。Poly I:C转染后,RIG-Ⅰ和MAVS蛋白的表达量上调,RIG-Ⅰ基因的表达量上调,m^(6)A和YTHDF2基因的表达量下调,并引起细胞形态的变化。综上,本研究成功建立了中华鳖胚胎肝成纤维细胞的体外分离培养体系,并构建了基于该细胞的干扰素生成通路激活模型。

外联中通,蔓枝有道——初中语文"巧妙的勾联"之文本阅读策略

在"部编初中语文教科书编写思想、框架体系及使用建议"中,构建"教读—自读—课外阅读"三位一体的阅读教学体系,特别提出了要"沟通课内外阅读,课外阅读成为课程的有效组成部分",建议老师们采取1加X的办法,即讲一篇课文,附加若干篇课外阅读的文章。

让语文插上情商的翅膀

我们常常会谈到“智商”和“情商”的问题，“智商”就是智力商数，是人们认识客观事物并运用知识解决实际问题的能力。“情商”又称情绪智力，它主要是指人在情绪、情感、意志、耐受挫折等方面的品质。历经几届学生，忽然发现，学生的智商越来越高，但无奈情商越来越低。这使我不由地思考这么一个问题：学生在语文课堂上亟需学到的是什么？我们语文教师应该使用怎样的方法让他们学有所感，学有所悟？

运用教学策略,关注游记语言——以八年级下第五单元为例走进游记的“自然”和“自我”

游记,通过记述游览见闻,描摹山水风光,吟咏人文胜迹,来抒发作者的情思,它的核心内容就是语言和情感。为此,游记教学应该用各种有效的策略在关注文本语言的基础上,强化对情感的理解,促进学生与文章、作者的情感融合,让学生在理解“自然”的基础上,感受作者“自我”的情怀,从而提升学生的阅读素养。