植物青枯菌(Pseudomonas solanacearum)致病机理

植物和病原物的相互作用机制是有效地控制植物病害发生、危害的理论和技术依据,因而是植物病理学的重点研究领域,病原物与其植物寄主的关系实际上是一种相互制约或对立统一的关系,Flor在亚麻锈病研究中提出了著名的基因对基因(Gene for gene)的学说,即病原物存在有致病基因和无致病基因(或毒性基因和无毒基因),而植物相应地存在有感病性基因和抗病性基因。这一学说一直用作研究植物-病原相互作用以及分析植物抗(感)病性遗传的主要理论依据。但是,病原物与植物的相互关系特别是亲和关系是在长期的共进化过程中逐渐形成的,因而是十分复杂的,而且不同的植物-病原相互关系的密切程度也不相同。故Flor的模式不可能解释所有植物病害中的病原和寄主间的复杂关系。

抗青枯病高产优质马铃薯新品种“抗青9-1”

抗青9-1是1989年从国际马铃薯中心（CIP）引进的马铃薯杂交组合实生籽后代中，经过10余年系统选育而成的高抗青枯病的新品种，于2005年12月由云南省品种审定委员会通过品种审定，并正式定名。抗青9-1的原编号为中植Ⅷ-9-1，即由中国农科院植保所从CIP引进的第Ⅷ批第9份马铃薯资源材料BP88096中选出的第1号单株系。

马铃薯抗青枯病体细胞变异体离体筛选研究初报

本试验证明了青枯菌活菌作为马铃薯细胞变异体离体筛选的选择压力是适宜的。明确了活菌压力的最适浓度、愈伤组织接种的最适龄期和接种的方法。愈伤组织培养皿内继代培养重复接种筛选是快速而有效的筛选方法。从近2万块马铃薯叶圆片愈伤组织中,经重复接种筛选获得了6块抗菌愈伤组织(比率为0.03％左右)。并经过分化诱导培养获得了再生苗。初步的抗性鉴定结果表明,再生苗抗1(PSS—1)比母体(米拉脱毒试管苗)的抗病性有显著提高。

冰核活性细菌与玉米和大豆霜冻关系的研究

本文采用霜冻模拟实验与田间实验相结合的方法研究了玉米、大豆霜冻与从我国作物上分离到的两种冰核活性(INA)细菌(丁香假单胞菌P·S和草生欧氏菌E·h)的数量关系。结果表明:在我国广泛存在的INA细菌是诱发玉米、大豆等喜温作物霜冻的重要因素,因其存在而提高了作物霜冻为害的温度,加重了霜冻对作物的危害。当玉米和大豆的叶片上喷洒有5×10~3个/ml浓度的INA细菌时,叶温在-2.5～-3.0℃时就严重受害,而无菌的玉米、大豆则在-6.0～-7.0℃才严重受害。在-2.0～-7.0℃范围内,在同一温度条件下,随着INA细菌浓度的增加,霜冻危害加重,霜冻危害程度与INA细菌浓度的对数之间有较好的直线关系。而当INA细菌浓度不变时,霜冻对玉米、大豆的危害随叶面温度的降低而加重。因此,可以认为,玉米、大豆等作物霜冻是受低温与INA细菌交互作用的结果。可以通过减少INA细菌数量或使之失去冰核活性的途径减轻霜冻对作物的危害。

植物青枯病原细菌胞外蛋白相关基因的克隆

用含有转座子Ｔｎ５ 的铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１８２６（ｐＭＯ７５ ∷Ｔｎ５ ，Ｋｍｒ） 诱变我国马铃薯青枯菌小种３ 号菌株ＰＯ４１ ，获得６０００ 多个胞外多糖正常产生的接合子。经ＳＤＳＰＡＧＥ 电泳，筛选出２ 个胞外蛋白减少９ 种的突变株ＰＭ２６４４ 和ＰＭ２３９ ，其可以引起烟草叶片典型的过敏性反应，致病力比野生型菌株显著降低，皆为原养型菌株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交的结果表明，突变株染色体上只有１ 个转座子插入位点。标记交换证明，９ 种胞外蛋白缺失与转座子插入相偶联的频率为１００ ％ 。以聚半乳糖醛酸酶和内葡聚糖酶２ 种胞外酶为指示蛋白进行定量测定的结果表明，在突变株上清液中和菌体细胞内都没有这２种胞外酶的存在。以突变株ＰＭ２６４４ 为受体菌，通过基因功能互补的方法，从野生型青枯菌基因文库筛选到２ 个阳性克隆ｐＰＳＰ１ 和ｐＰＳＰ２ ，它们既能恢复２ 个突变株产生胞外蛋白的能力，也能将２ 个突变株的致病力恢复到接近野生型菌株的水平。

水稻上三种条斑病细菌DNA的多态性初析

试用４０ 个引物对我国水稻条斑病菌、“稻短条斑病菌”和李氏禾条斑病菌等１４ 个代表菌株进行ＲＡＰＤ 分析，其中１１ 个引物的扩增产物表现明显的多态性， 共扩增出１５８ 条谱带，多态性为８９ ．７４ ％ 。聚类分析结果显示１４ 个菌株可区分为３ 个类群，第１ 群包括ＬＬＳ２ 、ＬＬＳ３ 、ＬＬＳ４ 、ＲＳ０５ 、Ｒ１００８ 、ＴＡＳ和ＴＡＸ；来自不同稻区水稻条斑病菌的群体结构差异明显，分属于第２ 群（ 如ＲＳＨａｉ 等） 和第３ 群（ 如ＲＳ１０５ 等） 。菌株ＤＮＡＲＡＰＤ 指纹分析和致病性测定结果证明：李氏禾条斑病菌、“稻短条斑病菌”在水稻和李氏禾上不仅可相互侵染，而且遗传背景的相似性较高，确认是同一种病菌，其与小麦黑颖病菌亲缘关系较近。

植物青枯菌aac基因克隆及猝灭群体感应信号功能的研究

【目的】研究植物青枯菌(Ralstonia solanacearum)aac基因编码的蛋白是否具有降解细菌群体感应信号分子的功能。【方法】PCR扩增获得青枯菌GMI1000菌株的aac基因,将aac基因克隆到pET-5a原核表达载体上,在大肠杆菌中表达出AAC融合蛋白,将AAC融合蛋白与胡萝卜软腐欧氏杆菌(Erwinia carotovorasp.carotovora)混合后,共接种于马铃薯块茎,研究细菌致病力的变化。【结果】克隆了全长的aac基因,完成了aac基因原核表达载体的构建,研究了AAC融合蛋白对细菌致病力的影响。【结论】青枯菌aac基因编码的蛋白具有减弱胡萝卜软腐欧氏致病力的功能,为开发新的控害策略提供了依据。

生防细菌对马铃薯青枯病的防病增产作用研究

将对马铃薯青枯病菌具有抑菌活性的枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)菌株 0 70 2、GP7- 13制成粉状制剂 ,用于马铃薯种薯播前处理。湖北恩施田间小区防病增产试验表明 ,病地上菌株GP7- 13对马铃薯青枯病的防效达73.9%～ 89.7% ,0 70 2菌株达 6 0 .9%～ 88.2 %。两生防菌剂在北京郊区南口和河北张北县无病地试验 ,对马铃薯具有促生增产作用 ,菌株GP7- 13可增产马铃薯 17.3%～ 6 0 .3% ;0 70 2增产 2 6 .9%～ 6 1.2 %。

我国植物青枯菌菌株的遗传多样性和组群划分

采用15条随机引物对我国11个省(市、区)6种不同寄主植物的43个青枯菌代表性菌株和4个国外青枯菌菌株,进行了PCR扩增。引物OPB11、OPA15、OPE1和OPZ10对上述所有菌株扩增获得了相似的产物电泳图谱,分别具1～5条谱带不等;引物OPB7、OPA10和OPF1对马铃薯菌株获得了相同的产物图谱,但对其它寄主菌株的产物间有明显差别;引物OPA14、OPG6、OPG14、OPF5、OPK14、OPK20和OPK17对于不同菌株的扩增产物多态性很强。供试菌株被聚类为2个组群,即组群A和组群B。组群A中又可分为7个亚组(A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7),其中A1含有2个类型(A1-1、A1-2);组群B中也可分为2个亚组(B1、B2),其中B1含有3个类型(B1-1、B1-2、B1-3),B2也含有3个类型(B2-1、B2-2、B2-3)。RAPD组群A中包含了27个来自我国不同地区的马铃薯菌株,主要是3号小种、生化变种2;组群B中含有20个来自不同地区、不同寄主的菌株,分属于其它不同的小种和生化变种。研究结果表明,我国青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的地理来源关系不大,而与寄主来源有明显相关性。此外,通过对我国青枯菌菌株组群进行同源性PCR分析表明,来源自马铃薯的3号小种菌株属于美洲分支“Americanum”,而来自其它寄主的青枯菌1号、5号小种菌株属于亚洲分支“Asiaticum”。

甘蓝型油菜抗菌核病扩展的遗传分析

以核盘菌菌丝体接种 11个油菜品种 (系 )的离体叶片 ,结果表明不同品种间病斑大小差异显著 ,病斑随接种后时间延长呈逻辑斯蒂曲线增长 ,抗、感品种之间抗病斑扩展的差异显著。条件方差分析表明 ,草酸浸根处理第 3d到第 4d ,油菜抗毒素的条件广义遗传力达 0 .784;草酸浸叶柄处理第 3d到第 4d ,加性方差占总方差 2 3.1% ,处理第 4d到第 5d加性方差下降为 0 ,表明条件加性效应值和条件显性效应值在不同的时段是不同的。

应用单克隆抗体免疫学技术检测种姜姜瘟病的初步研究

姜瘟病是由青枯病菌(PsedomonasSolanacearum)引起的一种细菌病害,俗称姜腐烂病。70年代以来,我国山东、浙江、福建和四川等生姜集产区均遭到其不同程度的危害。病地一般减产1至2成。

用ELISA和Dot-ELISA方法检测植物病原的比较研究

比较了ELISA和Dot-ELISA方法检测番茄巨芽类菌原体(Tomato Big Bud Mycoplatma-Like Organism,TBB-MLO)、番茄斑萎病毒(Tomato Spotted Wilt Virus,TSWV)和青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum)的差异,结果表明,两种方法对番茄斑萎病毒无明显差异,对番茄巨芽类菌原体,用Dot-ELISA比用ELISA的检测灵敏度高50—100倍,对青桔假单胞菌,用Dot-ELISA比用ELISA检泓抗原的灵敏度高20倍,而检测抗体的灵敏度高100倍。

冰核活性细菌与植物霜冻的研究概况

长期以来认为植物霜害是零度以下低温(-2—-5℃)和霜敏感植物生理特性所引起的冻害。近年来,国外研究证明,植物体上广泛存在的具冰核活性的细菌(简称INA)是植物发生霜害的关键因素,这类细菌可在-2—-5℃诱发植物细胞水结冰而发生霜冻;也有研究证明,由于细胞水具过冷却作用(supercooling),在没有冰核细菌存在的条件下,能耐-7—-8℃低温而不发生霜冻。这些新发现。

药剂防止玉米霜冻的初步研究

检测结果表明,青冈县育苗玉米上普遍存在着冰核细菌,并以草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)占绝对优势,它是诱发和加重当地玉米霜害的关键因素。经人工霜箱和田间试验结果表明,当霜冻叶温为—5～—3.1℃时,抗霜剂1号和抗霜素1号防止玉米霜冻效果分别为49～94%和49～90%,防效显著,有一定应用价值。结果证明,用药剂防除冰核细菌减轻农作物霜害是一条可行的途径之一。

高GC含量青枯菌aac基因PCR扩增体系的建立与优化

通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施,建立并优化了PCR扩增体系,成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2 434 bp且GC含量高达70.9%的aac基因。PCR反应体系为20μL包括5%DMSO2、.5 mmol/L MgCl2、500μmol/L dNTP、10 pmol/L引物1、.25 UTaq酶、50 ng模板DNA。首先采用热启动PCR:95℃5 min,保持80℃,加入Taq酶;然后采用二步PCR:5个循环包括变性95℃1 min,65℃1 min;最后采用降落PCR:30个循环为95℃1 min,78℃1 min,每个循环降低0.5℃,72℃3 min;补充10个循环为95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min。该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法。

大白菜细菌性叶斑病病原菌鉴定及其寄主范围的测定

1988年秋,在北京和内蒙的大白菜上发生一种叶斑病,难以确诊何种病害,从其病叶分离到10个菌株,做了致病性测定,革兰氏染色、菌体形态、培养性状、生理生化反应,DNA的G+C含量测定及血清学反应鉴定,结果证明,这10个菌株均属菊苣假单胞菌Pseudomonas cichorii(Swingle)Stapp 1928。该病菌国内无发生记载,对大白菜危害国内外未曾有过报导,称之大白菜细菌性叶斑病。经人工喷雾接种结果表明,该病菌除危害大白菜和油菜外,还能不同程度地侵染甘蓝、菜花、番茄、青椒、芹菜、莴笋、芥菜、萝卜、黄瓜和菜豆,但不能侵染甜菜。

我国几种禾谷类植物上Xanthomonas campestris致病变种的研究

从我国新疆、内蒙、西藏、北京和山东等省区的小麦、大麦、野黑麦、冰草、偃麦草和雀麦上分离到13个黑颖病菌株,在苗期、分蘖期和孕穗期,喷雾接种16属27种禾本科植物,对其中感病的6属15种植物和燕麦又做注射接种。根据各个菌株对小麦、大麦、黑麦、冰草、偃麦草和雀麦的致病性差异,初步将其划分三个致病变种:1.禾谷类致病变种]X.campestris pv.cerealis(Hagborg)Dye.]:包括7个菌株,自然条件下发生在冰草、雀麦和偃麦草上;人工接种还可侵染小麦、大麦和黑麦。2.小麦致病变种(X.campestris pv.undulosa):包括4个菌株,自然条件下发生在小麦上,人工接种可侵染大麦和黑麦,但有一个菌株注射接种能轻度侵染雀麦。3.大麦致病变种(X.campestris pv.hordei):包括2个菌株,自然条件下发生在大麦上,注射接种能轻度侵染偃麦草。13个菌株喷雾接种猫尾草、早熟禾、画眉草、马唐、狗尾草、稗草、披碱草、羊茅草和水稻、均不侵染。

青枯菌无毒自发突变株接种花生引起的生化变化

花生经青枯菌无毒自发突变株ＡＰ７接种后，体内过氧化物酶的活性会增高。经无毒自发突变菌株ＡＰ７接种后的花生叶片组织粗提液对青枯菌的致病菌株有强烈的体外抑菌作用。将这种粗提液与致病菌株同时注入花生叶片内，亦表现出抑制发病作用，而且这种抑病作用随着粗提液浓度下降而减弱．

马铃薯青枯病抗源筛选

马铃薯青枯病抗源筛选中国农业科学院植保所张长龄，何礼远，华静月，唐银东马铃薯青枯病（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ）是一种世界性病害，在中南美洲、大洋洲、东南亚、南亚以及非洲各国马铃薯上严重为害。在我国，从７０年代中...