I群禽腺病毒江苏分离株(FAVI-JS)的分离鉴定

通过形态学、致细胞病变和序列比较等对一株疑为I群禽腺病毒江苏分离株FAVI_JS进行了鉴定 ,试验结果表明 :该病毒为球形、无囊膜、二十面体对称 ,直径为 70nm～ 80nm ;不具有凝集鸡、鸭、鹅红细胞的能力但可以凝集大鼠红细胞。在鸡胚肾细胞 (CEK)上可致细胞变圆 ,折光性增强等病变 ;通过PCR方法扩增出的FAVI_JSL、R、ITR三个片段 ,经过测序分析并与GenBank上发表的属于血清I型的CELO病毒、FAV_1、FAV_A和血清 8型的禽腺病毒 (FAV_8)全基因组的相应序列比较 ,FAVI_JS与I群禽腺病毒各毒株在三个片段上同源性都很高 ,其中与血清I型的同源性高达 96 %以上 ,在根据对遗传上具有重要意义的ITR序列绘制的遗传进行树分析 ,FAVI_JS与Ⅲ群禽腺病毒EDS、Y81G4株明显属于不同的分支 ,而与群禽腺病毒 ,特别是与血清I型的禽腺病毒更接近 ,这些结果证明 。

传染性法氏囊病及其病原分子生物学研究进展

传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursaldisease virus,IBDV)引起的一种急性、高度接触性传染病。20世纪80年代中期以后,由于抗原变异和超强毒株在免疫鸡群的出现,使IBD的防控面临新的困难。文章简要概述近几年来,IBD在病原及分子生物学特性、抗原性、致病性、毒力与抗原的变异、疾病诊断和防制策略等方面的研究进展。

IBDV荧光定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

研究根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列设计了两条引物,通过RT-PCR技术对IBDV的VP2进行扩增,构建IBDV-VP2的标准品质粒,建立基于IBDV-VP2基因的荧光定量RT-PCR检测(QRT-PCR)技术和标准曲线,并检测该QRT-PCR体系的特异性、灵敏度和重复性,最后将该QRT-PCR体系应用于鸡外周血淋巴细胞(PBLs)中IBDV超强毒株(vvIBDV)复制规律以及临床样品的检测。结果表明,建立的QRT-PCR体系特异性好,不能与NDV、IBV及FAV1等发生反应,敏感度为1.51×101拷贝数/μl,扩增效率达1.018,重复性试验组内变异系数和组间变异系数均小于0.5%;在vvIBDV感染后6 h收获的细胞含病毒基因组拷贝数最高,对IBD疑似病例的检测敏感度高于套式RT-PCR技术。表明建立的反应体系特异、灵敏度高,并具有很好的稳定性,可应用于病毒复制水平的检测和临床样品的检测。

传染性腔上囊病病毒与禽腺病毒混合感染的分子鉴定

应用设计的分别针对传染性腔上囊病病毒(IBDV)VP2蛋白基因高变区(vVP2)和Ⅰ群禽腺病毒(FAV)六邻体(hexon)蛋白基因的特异性PCR引物,对临床疑似IBD病例的2只鸡的腔上囊样品和泄殖腔拭子样品分别进行IBDV和FAV的分子检测。结果显示,通过巢式PCR从2份腔上囊样品中均扩增出了471 bp的IBDV vVP2特异性目的片段;SspⅠ和SacⅠ的酶切分析以及序列测定分析证实,该目的片段属超强毒IBDV(very virulent IBDV,vvIBDV)的特征性序列,与常用疫苗株的亲缘关系较远。从2份泄殖腔拭子样品中均扩增出了900 bp的FAV特异性目的片段;序列测定和遗传进化分析表明,该片段在分子水平上属于血清1型FAV(FAV-1)。结果表明,该病例同时感染了vvIBDV和FAV-1。

广西地区传染性囊病病毒超强毒株的分离鉴定及其VP2基因高变区的序列分析

研究通过鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）接种、琼脂扩散试验、致细胞病变和RT-PCR等方法，成功从广西疑似病鸡的腔上囊组织中获得了8个传染性囊病病毒（IBDV）毒株，分离株可致攻毒鸡发病率100％，死亡率60％～90％；分子特征上，8个分离株VP2高变区在酶切位点和特征性氨基酸上均属于vvIBDV的特征。同源性分析表明，8个分离株之间在核苷酸和氨基酸上的同源性分别为96．8％～99．1％和95．9％～99．3％，与其他参考vvIBDV毒株的同源性分别为94％～97．7％和92．5％～97．3％，而与常用疫苗株Bursine-2、B87（in），变异株GLS，经典强毒株的同源性仅有90％左右。遗传进化树上，8个分离株与国内外参考vvIBDV同处于一个大分支，与疫苗株和经典强毒株的距离较远，8个分离株与中国内地毒株SD1／97的亲缘关系最近。研究表明，广西仍然存在vvIBDV的流行。

应用PCR技术对家禽病毒性肿瘤病进行鉴别诊断的研究进展

概述聚合酶链反应 (PCR)技术应用于家禽马立克氏病、禽白血病和网状内皮增生症鉴别诊断的研究进展 ,主要内容包括病毒的基因组结构特征 ,各病毒的特异性基因或序列及其 PCR引物的位置和序列 ,以及 PCR技术对肿瘤病特异鉴别诊断的应用。将 PCR技术与其它传统的技术进行比较 ,PCR技术具有敏感性高、特异性好、快速、简便的特点 ,是目前鉴别诊断家禽病毒性肿瘤病最有效的。

传染性法氏囊病病毒广西流行毒株的分离鉴定及其遗传进化分析

为了解传染性法氏囊病病毒(IBDV)广西流行株的遗传变异规律,本研究通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对2006年～2007年间采集自广西各鸡场的疑似传染性法氏囊病(IBD)的病料进行病毒分离,设计针对VP2高变区(vVP2)的引物对分离物通过RT-PCR进行鉴定及序列分析。共分离出9个IBDV毒株,其ELD50在105/0.2mL～106.5/0.2mL之间。分离株vVP2序列通过具有分型意义的酶切位点和关键位点氨基酸分析,证实9个分离株均属于vvIBDV。同源性分析表明,9个分离株之间在核苷酸和氨基酸的同源性分别为97.2%～100%和95.2%～100%,与vvIBDV参考株同源性分别为93.8%～98.2%和92.4%～98.6%,而与常用疫苗株Bursine-2、B87(in),变异株GLS,经典毒株,中等偏强毒力株YL052的同源性仅有90%左右。遗传进化分析发现,分离株与vvIBDV参考株同处于1个大分支,与DV86和OKYM株的亲缘关系最近,与2000年～2005年间广西分离的vvIBDV株距离较远,它们之间形成了明显的分群。研究表明,近2年来广西仍然存在vvIBDV的流行。

鸡传染性法氏囊病一个自然病例的病原分离及其分子特征分析

设计针对传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因高变区(vVP2)的引物对湖南永州送检的一群疑似传染性法氏囊病病例的法氏囊组织通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)接种的方法对阳性样品进行病毒分离,同时对IBDV分离株中的vVP2进行限制性内切酶分析和核苷酸序列测定,分析关键位点的氨基酸特征和同源性,绘制遗传进化树。结果成功分离出了4个IBDV毒株,其中HuN0801、HuN0802和HuN0803的特征性位点的氨基酸为222A、249Q、254G、256I、279D、284A、294I和299S,属于vvIDBV的特征,并与vvIBDV参考株具有较高的同源性;HuN0804的则为222P、249Q、254G、256V、279N、284T、294I和299N,符合弱毒株的特征,与弱毒参考株的同源性较高;4个分离株与常用疫苗株的同源性普遍较低。遗传进化分析表明,3个vvIBDV分离株与vvIBDV参考株和中等偏强毒力株YSLMB同处于一个大的分支,并与欧洲株DV86、湖南株HuN亲缘关系最近;而HuN0804与弱毒株、经典毒株和常用疫苗株同处于一个大分支。研究表明,本病例中存在不同致病型IBDV毒株的混合感染。

动物腺病毒载体的研究进展

腺病毒载体已成为近年来在基因治疗和重组疫苗研究方面的热点 ,文章较详细地叙述了腺病毒载体的构建基础、腺病毒载体的构建方法和各类动物腺病毒载体的研究现状以及腺病毒载体在应用时遇到的免疫学问题。并依据现有的腺病毒活载体的研究现状 ,讨论了动物腺病毒载体的发展趋势 ,提出在人类腺病毒载体应用遇到的免疫学问题上 。

禽腺病毒江苏株(JS)复制非必需片段的确定

利用PCR方法从一株Ⅰ群禽腺病毒的分离物 (FAVI JS)中扩增出其基因组的两个末端L片段和r片段、ITR片段 ,并分别克隆进pGEM Teasy载体 ,然后将L片段、r片段和ITR片段同时克隆进pHC粘粒载体中 ,获得质粒pHC FAVI r ITR L ,再在该克隆片段中插入增强型绿色荧光蛋白 (eGFP)基因 ,获得转移质粒载体pFAVI eGFP。将pFAVI eGFP转染已被该野生型Ⅰ群禽腺病毒分离物感染了的鸡胚肾细胞进行同源重组 ,通过无限稀释法筛选重组病毒 ,结果获得了表达增强型绿色荧光蛋白的重组Ⅰ群禽腺病毒rFAVI eGFP ,证明位于基因组右末端r片段和ITR片段之间的位点为病毒复制非必需区 。

鸡传染性法氏囊病病毒地方流行株VP1基因片段的扩增及序列分析

为了解鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)地方流行毒株在基因组B节段关键序列上的分子进化情况,通过反转录PCR(RT-PCR)技术对6个IBDV不同地方分离株的VP1基因中与病毒致病型相关的一个片段(1 518bp^1 997bp,共480bp)进行扩增,并对所获得的VP1 480bp片段进行核苷酸的序列测定,与IBDV参考株和常用疫苗株的相应序列进行比较分析和绘制遗传进化树。结果表明,6个分离株与参考株在VP1RNA聚合酶基序Ⅵ和基序Ⅶ上均保守,在特征性氨基酸位点上,3个广西分离株QX0604、WZ0704和NN0603与参考的vvIBDV相同,而分离株BH111(广西)、JS17(江苏)和HUN0804(湖南)则既具有vvIBDV的位点特征,又具有经典毒株特征,但不同毒株在不同位点上表现不同;在同源性分析上,JS17、BH111、QX0604、WZ0704和NN0603等5个毒株与参考用vvIBDV毒株的同源性较高,在核苷酸和氨基酸水平上分别为92.5%~100.0%和97.5%~100.0%,但与2个常用疫苗株和经典毒株的同源性仅分别为87.9%~90.0%和96.2%~96.9%,分离株HUN0804则与经典毒株和2个疫苗株更接近;在遗传进化树上,JS17和BH111等5个分离株与vvIBDV在一个分支上,亲缘关系更近,而HUN0804则与经典毒株和2个疫苗株在另一个大分支。表明不同分离株在VP1的功能基序上保持保守,但分离株在特征性氨基酸位点上则发生了变化,大多数分离株与常用疫苗株之间的同源性较低,亲缘关系较远。

近年来我国鸡传染性法氏囊病及其病毒分离株的变化特点

1IBD及IBDV的基本情况 传染性法氏囊病（infectiousbursaldisease，IBD）是小鸡的一种急性、高度接触性传染病。

多模式教学相结合在生理学教学中的探讨

生理学是一门研究正常生命机能的科学,文章结合专业特点,从应用多媒体课件进行教学、引入"以问题为核心"教学法、加强实验教学和加强教师自身综合素质四个方面入手,探索了一条在生物技术专业中如何开展人体及动物生理学教学的方法,并取得了良好的教学效果.

一起鸭多杀性巴氏杆菌和鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊治报告

文章报告了南宁郊区某农场30日龄小鸭发病的情况。病鸭表现为跗关节肿胀,无法站立,精神沉郁,口腔和鼻孔流出泡沫状液体。剖检病变以内脏出血,被覆有纤维性假膜为特征。从病鸭中分离出的细菌培养物,经培养特性、各项生化鉴定及动物致病性试验,确定该疫病由多杀性里默氏杆菌和鸭疫里默氏杆菌共同感染引起。据药敏结果,应用新霉素、庆大霉素进行治疗,结果有效地控制了该病。

生物技术专业《基因工程》课程教学探讨

本文从教材选择、优化教学内容、制作多媒体课件、提高教师综合素质等入手,探讨了生物技术专业《基因工程》教学方法,并取得了良好教学效果。

肉鸡细菌性软骨坏死伴发骨髓炎

本文对肉鸡细菌性软骨坏死伴发骨髓炎的简要历史、命名、临床症状、病变、传播、诊断及控制等进行简要的综述。

猪链球菌病的诊治报告

本文报告了南宁市郊某一个体养殖场仔猪发生链球菌病。从２０日龄开始发病，病猪发抖，不吃奶，４～５天后死亡。病变以内脏充血、出血为主要特征。从病死猪中分离出溶血性链球菌，经多项生化试验、动物致病性试验等，确诊该病是由兽疫链球菌引起的链球菌病。根据病原药敏试验结果，并结合实际情况，应用庆大霉素和恩诺沙星进行治疗，结果有效地控制了疾病的发生和发展。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒的研制及其应用

建立了快速鉴别诊断鸡肿瘤病的PCR技术 ,研制鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒。应用该试剂盒在两年多时间里 ,对来源于广西养鸡业发达地区的 13 9个鸡群共 5 0 5只病、死鸡的 15 70份肿瘤及可疑肿瘤组织病料进行了检测 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 74.0 6%、11.49%和 6.73 % ,肿瘤病的混合发生率为 16.83 %。结果表明 ,应用PCR技术建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒具有操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便等特点 ,不仅适用于临床肿瘤病的鉴别诊断 。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术的建立

根据病毒基因组特征,以聚合酶链反应(PCR)为基础,建立一种能快速鉴别马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)和网状内皮增生症(RE)3种常见鸡肿瘤病的诊断技术。研究确定以MDV的132 bpr及ALV和REV的LTRs作为PCR扩增的特异性基因片段,改进样品DNA的提取程序,优化PCR及三重PCR的反应条件及参数,并对该诊断技术的特异性、敏感性进行研究。结果表明:建立的诊断技术具有特异、敏感、快速、经济的优点,为开发鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒奠定了基础。