乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBVDNA实时荧光定量PCR的方法，并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物，并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件；将T载体与HBVRT区扩增后纯化的产物进行连接反应，然后转染大肠杆菌（DH5a），经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落，提取质粒，制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1：10的缓冲液倍比稀释，制作标准曲线，线性方程为：Y=-3．344X＋37（r2=0．9999）；通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBVDNA，表明其最低检测限为5×10^2 IU／mL；拷贝数介于5×10^2～5×10^8 IU／mI。之间的HBVDNA浓度与ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法；该方法可用于乙型肝炎患者病情监测，有效指导临床用药；联合该法与血清标志物检测，可更准确评价HBV感染者病情。

563株肺炎克雷伯杆菌临床分布及耐药性分析

目的调查我院2006年1月至2010年12月分离的肺炎克雷伯杆菌的耐药趋势,为临床治疗提供可靠依据。方法收集送检标本中分离的肺炎克雷伯杆菌株,按全国临床检验规程分离鉴定,并采用KB法进行药敏试验,用WHONET5.4软件进行统计分析。结果本院5年间共分离出563株肺炎克雷伯杆菌,以痰标本分离率最高(64.48%)。肺炎克雷伯杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率为0%,对氨苄青霉素的耐药率高达98%以上;对庆大霉素、头孢呋肟钠、头孢西丁的耐药率总体上呈上升趋势。结论对肺炎克雷伯杆菌进行及时鉴定和药敏分析,把握其耐药趋势,可有效指导临床合理用药。

乙型肝炎病毒逆转录酶基因突变的临床意义

目的 分析服用核苷酸类似物的乙肝患者逆转录酶（RT）基因突变模式及其与生化指标的相关性,探讨该基因突变的临床意义。方法 采用半巢式PCR对634例来自武汉地区的乙肝病毒感染者血浆HBV进行扩增后,Sanger测序法进行基因序列分析; 将RT基因突变组与野生组和各表型突变组中患者的谷氨酸氨基转移酶（ALT）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）和HBV DNA阳性率作比较。结果 在测序成功的622例患者中,144例（23.15%）发生RT基因突变。他们在11个位点（rtM204,rtL180,rtA181,rtN236,rtV173,rtL80,rtM250,rtS202,rtV207,rtV214和rtV84）出现碱基突变。在突变组中,患者的ALT,HBeAg和HBV DNA阳性率显著高于非突变组（P〈0.05）。表型分析显示：拉米夫定（LAM）耐药最常检测到,占52.78%,其次为阿德福伟（ADV）耐药占27.78%和恩替卡韦（ETV）耐药占6.94%,多重耐药LAM＋ADV于18例患者中检出12.5%。多重耐药组患者ALT,HBeAg和HBV DNA阳性率高于其他耐药组（P〈0.05）; ADV耐药组患者ALT,HBeAg和HBV DNA阳性率高于LAM,ETV耐药组。结论 HBV RT区域的突变形式与血清学指标ALT,HBeAg和HBV DNA阳性状态有显著关联,该基因的突变形式可用作患者临床表现的指示指标。

结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗效果的监测价值

目的探讨结核感染T细胞斑点试验对结核病治疗疗效的监测意义。方法本研究采用T-SPOT.TB试剂盒,检测T细胞中γ-干扰素对结核分支杆菌特异性多肽类早期分泌性抗原靶标6-k D(ESAT-6)和培养滤液蛋白(CFP-10)的应答,对比113例结核感染者治疗前与治疗后T-SPOT.TB结果的变化,其结果根据对该试验中两种抗原的联合与各自应答来分析。结果 113例感染者在治疗后T-SPOT.TB结果转阴者有42例(37.2%)。其中,CFP-10转阴率占48.9%(P<0.001),ESAT-6转阴率占20.0%(P=0.238)。ESAT-6的斑点形成细胞(SFCs)/2.5×105外周血单核细胞(PBMCs)的平均数在治疗前和治疗后分别为18.47和16.29(P=0.16),而CFP-10的SFCs/PBMCs的平均数在治疗前和治疗后分别为22.83和15.31(P<0.01)。结论结核病治疗对于T细胞中γ-干扰素引起的ESAT-6和CFP-10抗原应答影响不同,CFP-10的定量应答才是结核病治疗的更有效监测手段。

200例乙型肝炎患者HBV基因型分布及临床意义

目的探讨200例武汉地区乙型肝炎病毒（HBV）感染者病毒基因型的分布及其与肝病严重程度的相关性。方法采用半巢式PCR对200例来自武汉地区的乙肝病毒感染者血浆HBV进行扩增后，Sanger测序法进行基因分型。结果200例HBV血浆样本的基因型分布为B型142例（71．0％），C型55例（27．5％），D型1例（O．5％）和B／C混合型1例（O．5％），B／F／G混合型1例（O．5％）。在基因型B和基因型C中，无症状携带HBV患者、轻中度慢性乙肝患者、重度肝炎及肝硬化患者、肝癌患者的构成比分别为：37．32％，44．37％，14．08％，4．23％和23．64％，36．36％，21．82％，18．18％，两种基因型在肝病严重程度中的构成比差异有统计学意义（P〈O．05）。结论分离的200例HBV样本基因型以B，C为优势基因型，且基因型与HBV感染者发生肝病的严重程度有显著相关性。

血清降钙素原对老年人感染性疾病的诊断价值

目的评价血清降钙素原（PCT）对老年人感染性疾病的诊断价值。方法收集在武汉大学人民医院诊治的老年患者的血清标本，行降钙素原检测，并与微生物培养结果进行比较分析。结果感染组PCT浓度为（4．48±13．09）ng／ml，高于非感染组（0．07土0．02）ng／ml（t=5．31，P〈0．05）。细菌感染组、真菌感染组、混合感染组PCT浓度分别为（9．97土21．65）ng／ml，（5．92±8．82）ng／ml，（14．13士21．41）ng／ml，三组问PCT浓度差异无统计学意义（t=-1．08，P=0．284；t=-0．80，P=0．425；t=-2．14，P=0．064），若以血清PCT≥0．115ng／ml为诊断感染的阳性临界值，其敏感度、特异度分别为77．80％，93．80％。结论血清PCT检测敏感度高于培养，对老年感染患者具有重要的早期、快速诊断价值。

量子点联合磁微粒技术检测HBsAg方法的建立及评价

目的建立并评价一种基于量子点、磁微粒技术检测HBsAg的方法。方法以针对HBsAg不同抗原决定簇的抗体与量子点及磁微粒偶联,利用双抗体夹心原理检测HBsAg,用荧光定量PCR(qPCR)、ELISA法同时检测120例临床标本,并对比分析其检测效果。结果磁微粒(magnetic nanoparticles,MMS)、量子点(quantum dots,QD)偶联抗体最佳浓度分别为50μg/ml、25μg/ml,本法对HBsAg最低检出浓度为1ng/ml;本法的敏感度、特异性分别为93.3%、86.7%;本法检测效果与ELISA一致,但其检测速度更快。结论基于量子点、磁微粒技术检测HBsAg的方法方便、迅速,具有较高的敏感度与特异性,可以作为HBsAg快速筛查的方法。

武汉地区泌尿道感染病原菌的分布及耐药性分析

目的：调查武汉地区泌尿道感染病原菌的分布及耐药情况，为诊断和治疗泌尿道感染提供可靠依据。方法对2012年1月1日-2014年6月30日武汉大学人民医院泌尿道感染患者尿培养分离出的5378株病原菌的分布及耐药性进行回顾性分析，使用BD Pheonix-100进行细菌的鉴定及药敏，真菌使用显色平板进行分离鉴定。结果泌尿系感染患者尿液培养分离出病原菌5378株，共104种，其中革兰阴性菌2945株，占54.8％，以大肠埃希菌为主；革兰阳性菌1657株，占30.8％，以肠球菌属为主；真菌776株，占14.4％。主要分离菌对抗生素的耐药情况不同：大肠埃希菌对青霉素的耐药率最高，均＞83％，未发现碳青霉烯类耐药菌株；发现对万古霉素和利奈唑胺耐药的肠球菌，耐药率均在0.3％以上；MRCNS的检出率＞83％。结论泌尿系感染病原菌中以大肠埃希菌最常见。β-内酰胺酶抑制剂复合制剂可作为大肠埃希菌感染的经验性用药；MRCNS检出率增高，应引起密切关注。

湖北汉族RhD阴性住院患者Rh表型分布特征研究

目的探讨湖北地区汉族RhD阴性住院患者Rh表型的分布特征。方法采用3个不同批号的抗-D血清对筛查的RhD阴性患者标本进行确认,612例确认RhD阴性患者标本用Rh分型试剂检测Rh表型。结果 612例RhD阴性患者中,A型和O型女性人群显著多于男性,共检出7种Rh表型,其中ccee的表型频率为62.1%,Ccee的表型频率为27.6%,CCee的表型频率为6.5%,ccEe的表型频率为1.6%,CcEe的表型频率为1.5%,ccEE和CcEE的表型频率均为0.3%。结论湖北地区汉族RhD阴性住院患者,A型和O型女性多于男性,Rh表型频率以ccee表型为最高,ccEE和CcEE表型为最低,为临床RhD阴性患者安全输血具有重要的临床意义。

抗-D抗体产生人群Rh分型与输血安全探讨

目的探讨产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性湖北汉族人群Rh分型分布特征及输血安全。方法对968例确认为Rh阴性的人群进行抗体鉴定,对检出红细胞同种抗-D抗体的人群进行Rh分型,并分析其接受Rh阴性或Rh阳性含红细胞血制品输注时产生其他抗-Rh抗体的产生风险。结果在确认为Rh阴性的968例人群中检出红细胞同种抗-D抗体103例,其抗-D抗体发生率为10.4%;在产生抗-D抗体人群检出ccee和Ccee两种Rh分型,以ccee为最常见,约为79.7%(82/103);该人群接受Rh阴性或Rh阳性血制品输注导致抗-Rh类抗体产生风险最高分别为17.93%、33.89%;该人群接受Rh分型不一致血制品输注所产生的抗-Rh类抗体主要为抗-C。结论产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性人群接受Rh分型不一致血制品输注时有产生红细胞同种抗体的风险;在有条件且非紧急情况下,该人群可接受Rh分型一致的血制品输注。

EDTA抗凝标本保存条件和时间对微柱凝胶法检测血型的影响

目的探讨不同保存条件下保存时间对微柱凝胶法检测血型的影响。方法随机选取体检健康人群128例EDTA-K2抗凝标本室温保存,另128例EDTA-K2抗凝标本4℃保存,观察开始溶血和完全溶血时间,对未溶血标本、部分溶血和完全溶血标本分别用微柱凝胶法进行血型鉴定。结果EDTA抗凝标本在室温和4℃条件下保存1周均无溶血发生;第14天时,常温保存标本约有1/3开始溶血,4℃保存标本只有少量发生溶血;常温保存标本第35天时均完全溶血,而4℃保存标本第77天时均完全溶血。标本未溶血时,正反定型结果均清晰可见;标本发生部分溶血时,正定型结果无影响,反定型结果有影响;标本完全溶血时,正反定型结果均有严重影响。结论在室温和4℃条件下,EDTA抗凝标本的最佳保存时间为1周,此时用微柱凝胶法检测血型不受影响;常温标本保存35天内、4℃标本保存77天内,对反定型有影响,此时用微柱凝胶法检测血型须谨慎;常温标本保存超过35天、4℃标本保存超过77天则不宜用微柱凝胶法检测血型。

抗-D产生人群Rh分型特征调查

目的探讨产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性湖北汉族人群Rh分型分布特征及输血安全。方法对2011年9月至2016年9在武汉大学人民医院住院的968例确认为Rh阴性的人群进行抗体鉴定,对检出红细胞同种抗-D抗体的人群和120例Rh阴性且未产生抗-D抗体的对照组人群进行Rh分型。结果在确认为Rh阴性的968例人群中检出红细胞同种抗-D抗体103例,其抗-D抗体发生率为10.6%;在产生抗-D抗体人群检出ccee、Ccee和cc Ee三种Rh分型,其表型频率分别为78.6%(81/103)、18.5%(19/103)和2.9%(3/103);在对照组检出ccee、Ccee、cc Ee和CCee四种Rh分型,其表型频率分别为72.5%(87/120)、20.0%(24/120)、2.5%(3/120)和5.0%(6/120)。两组受检者的Rh分型比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论产生红细胞同种抗-D抗体的Rh阴性人群表型以ccee型最为常见,其次为Ccee和cc Ee型,这对临床Rh D阴性患者安全输血具有重要意义。

长桥牵手跨伶仃——深中通道伶仃洋大桥建设纪实

浩瀚辽阔的伶仃洋之上,桥塔矗立、桥面蜿蜒入海,深中通道如长虹卧波串联起珠江两岸,即将成为支撑粤港澳大湾区发展的“交通脊梁”。4月28日9时37分,广东省交通集团有限公司在建的国家重大工程深中通道伶仃洋大桥合龙,标志着项目桥梁工程实现全线合龙,距离项目建成通车更进一步。

铜绿假单胞菌1238株对碳青霉烯类抗生素耐药性分析

目的调查武汉大学人民医院近5年铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率及其变迁情况。方法收集临床分离的铜绿假单胞菌进行培养并行药敏试验。结果分离出铜绿假单胞菌的标本以痰为主(74.80%),主要分布于神经外科(20.27%)和呼吸内科(13.00%)。2006—2010年铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率依次为17.4%、38.1%、55.5%、27.8%、37.9%(P<0.01),对美罗培南的耐药率依次为11.1%、41.0%、41.5%、23.3%、33.1%(P<0.01)。结论铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药率自2006—2008年呈明显上升趋势,2008—2010年有所下降,临床应根据药敏结果合理用药,以减少和延缓耐药菌株的产生。

乙型肝炎病毒耐药突变检测方法应用研究进展

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一项全球性公共卫生问题,其是引起慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的主要致病因素。目前,治疗HBV感染的药物主要分为两类:干扰素(interferon,IFN)和核苷/核苷酸类似物(nucleic acid,NA),其中后者通过作用于病毒基因活性区发挥抑制病毒增殖的功能,但在该类药物治疗中易致HBV基因组突变,从而使HBV产生耐药性,最终降低疗效,甚至无治疗效果。尽管目前对HBV感染的治疗取得了一定进展,然而,如何能持久地抑制病毒复制,始终是临床面临的主要挑战。因此,对耐药突变进行早期、快速检测具有重要临床意义,这样可降低肝脏相关疾病发生和患者死亡风险,使慢性HBV感染的监测达到最优化。理想的HBV耐药突变检测方法需具备灵敏度和准确度高、重复性好、易操作、高通量、能够检测出混合新突变株的特点。现将HBV耐药突变检测方法研究和临床应用进展阐述如下。

风险管理在输血相容性检测工作中的应用效果评价

目的探讨输血相容性检测工作中的风险管理实施方法及应用效果。方法选取2013年7月至2015年6月在我院接受输血治疗并进行输血相容性检测的16957例患者作为对照组，未采取风险管理措施；2015年7月至2017年6月在我院接受输血治疗并进行输血相容性检测的19011例患者作为观察组，采用风险管理措施。比较两组的风险事件发生率及医患满意度。结果观察组风险事件发生率为0，对照组为0．09％，两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。观察组医患满意度为98．33％，与对照组的71．25％比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论在输血相容性检测工作中实施风险管理，可以有效预防和减少风险事件发生，提高医护人员及患者满意度，保障临床输血．安全。

重症监护病房多重耐药鲍曼不动杆菌中armA和rmtB基因调查分析

鲍曼不动杆菌是一种全球性的机会性院内感染的革兰阴性球杆菌,可引起肺部、泌尿道、血液、皮肤和软组织等感染.因其对多种药物产生耐药性倾向,有的分离时即多重耐药,甚至泛耐药,鲍曼不动杆菌感染成为一个重大的公共卫生问题[1-2].

不同生活环境对女性IgM抗A、抗B抗体效价的影响

目的:探讨不同地区生活环境对女性IgM抗-A、抗-B抗体效价的影响。方法:用盐水介质凝集法检测35例海南赴武汉地区实习女性大学生在实习前和实习后IgM抗-A、抗-B抗体效价值,同时随机选取40例武汉本地实习女性大学生作为对照。结果:海南女性大学生来武汉实习前后IgM抗-A、抗-B抗体效价差异有统计学意义(P<0.05),实习前IgM抗-A效价为224±181、IgM抗-B效价为160±96,实习3个月后IgM抗-A效价降为74±45、IgM抗-B效价降为63±32;而武汉本地女性大学生在实习前后IgM抗-A、抗-B抗体效价差异无统计学意义(P>0.05)。结论:不同地区生活环境可影响女性IgM抗-A、抗-B抗体效价值。

恶性肿瘤患者红细胞同种免疫评价分析

目的:通过分析恶性肿瘤患者红细胞同种抗体分布、是否发生输血反应及其与年龄、疾病状态等因素的关系来评价恶性肿瘤患者红细胞同种免疫状况。方法:对3 172例输血的恶性肿瘤患者用全自动分析仪进行红细胞同种抗体筛查,对筛查阳性者进一步鉴定其特异性,然后分析红细胞同种抗体类别及产生患者输血史、妊娠史、年龄、疾病状态、是否发生输血反应等。结果:在3 172例输血的恶性肿瘤患者中共检出7例红细胞同种抗体,发生率约为0.22%,其中RH系统4例(3例抗-E、1例抗-cE)占57%,MNS系统2例(均为抗-M),约占29%,Lewis系统1例(抗-Lea),约占14%;恶性肿瘤早期和中期各有4例和3例;40~50岁年龄组4例,其他年龄组各1例;7例患者均有输血史或(和)妊娠史;输血前后均未发生输血反应。结论:恶性肿瘤患者红细胞同种免疫发生率较低,这可能与患者的年龄、疾病状态及所接受的治疗等因素相关;产生的红细胞同种抗体以有临床意义的抗Rh类抗体为主。

脆弱性理论视角下传统生鲜食品市场公共卫生风险及其治理

随着我国城市治理中风险因素的增加,传统生鲜食品市场已成为我国大型城市治理中的脆弱环节。为避免暴发由传统生鲜食品引发的公共卫生危机,有必要对我国传统生鲜食品市场内蕴藏的公共卫生风险进行分析与评估,进而提升我国公共卫生风险治理的能力。本文以脆弱性理论为研究视角,分析传统生鲜食品市场存在的公共卫生风险,论述我国传统生鲜食品市场在自然、社会、管理以及技术系统等方面的薄弱环节。在此基础上,本文对我国传统生鲜食品市场在脆弱性系统环境下存在的潜在、次生风险提出了有针对性的治理对策。