m6A-SAC-seq在单核苷酸分辨率水平检测RNAm6A修饰

目的建立m6A特异性烯丙基标记测序(m6A-selective allyl chemical labeling and sequencing,m6A-SAC-seq)实验方法体系,在单核苷酸分辨率水平对RNA的N6-甲基腺苷(m6A)修饰进行检测。方法m6A烯丙基标记测序(m6A-SAC-seq)使用特异性甲基转移酶MjDim1对m6A添加烯丙基标记成为N6-烯丙基-甲基腺苷(am6A),使用I2处理产生N1,N6-环化腺苷(A)产物,在逆转录时引入突变,从而实现在单核苷酸分辨率水平的检测。通过HPLC法纯化甲基转移酶MjDim1,使用探针及液相色谱-质谱联用系统(LC-MS/MS)检测m6A的转换率,计算MjDim1活性作为质控。提取样品RNA,用烯丙基标记m6A,并用m6A-SAC-seq技术构建文库,测序后通过数据分析得到m6A位点信息,通过标准曲线校准计算得到m6A的含量。结果m6A-SAC-seq处理后,HIV逆转录酶识别环化的am6A位点,引入突变,但附近未修饰位点不发生突变。通过特定的A突变成T/C的突变位置(A to T/C)来识别m6A位点,并添加内参探针,用标准曲线来定量m6A含量。结论m6A-SAC-seq技术仅需30 ng的mRNA或去除了rRNA的总RNA样本就可以实现m6A位点在单核苷酸分辨率水平的检测。

中考中的数学活动考查题

教育部颁布的《课程改革实验区初中毕业数学学业考试命题指导》(2005年3月,以下简称《命题指导》)指出：“数学学业考试的主要内容是《课程标准》中所规定的相应数学知识、技能、方法的状况,利用有关知识解决问题的能力,从事基本的数学探究性活动的情况,以及相应的思维发展和特征,等等.”

简析数式探究题

数与式,是整个初中学段具有奠基意义的基础内容之一,也是中考的必考内容.最近几年,在新课程标准理念的指导下,考查数与式的基本概念、基本运算、基本应用的中考题,不断冲破传统命题格局,呈现出背景丰富、思维灵活、形式多样、设计新颖的特点. 数式探究题就是这类试题的典型题型. 中考中的数式探究题,取材于丰富多彩的数的领域, 有的探索数的奥秘,探求数的规律,扩大数的认知视野；有的则取材于智力趣题,意在激活思维,培养创新能力.

浅谈工会与职工的关系

浅谈工会与职工的关系何维志“工会必须密切联系职工，听取和反映职工的意见和要求，关心职工的生活，帮助职工解决困难，全心全意为职工服务。”新《工会法》中明确指出的这一条，应是当前工会工作必须遵循的根本原则。也只有真正摆正工会与群众的关系，才能名副其实地发...

初中数学的兴趣教学

爱因斯坦曾说：“兴趣是最好的老师。”学生也常说：“有兴趣就喜欢学。”、“有意思就愿意学。”是的，兴趣在教学过程中起着重要的作用，因而在教学中培养并激发学生兴趣，就成为教学过程中传授知识、发展智力、培养能力的重要手段。