UPLC-QTOF-MS法研究甘油三酯作为水生环境中农药污染的潜在生物标志物

以鲫鱼为代表性研究对象,采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术,分别研究了3种农药(敌百虫,高效氯氰菊酯和吡虫啉)对其体内代谢的影响.通过Masslynx软件在MS E模式下采集数据,使用UNIFI软件进行自动检测和数据过滤,并将差异性物质与在线代谢组数据库进行比较,鉴定出甘油三酯类(TGs)物质具有明显差异.其中,吡虫啉对TGs代谢的影响最大,且肝脏的代谢差异比大脑更显著,低浓度的急性暴露诱导肝脏中的TGs积累,其含量与暴露浓度之间的关系符合Michaelis-Menten方程的增长趋势.结果表明,TGs可在短时间内(≤2 h)灵敏地反映农药吡虫啉的低浓度(≤20 ng/mL)暴露,可作为考察吡虫啉对水生生物毒性的潜在生物标记物,有助于建立一种快速、灵敏的预警方法.

有机磷农药残留前处理技术的研究

本实验主要是利用固相萃取技术对食品中有机磷农药前处理方法进行了研究。对自制的固相萃取小柱的选择参数进行了优化,建立合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法,确保色谱分析测定时无样品基质的干扰,从而为测定的结果提供了保证,并延长色谱柱的寿命,降低了实验成本。茶叶样品以丙酮为提取剂,超声波30 min后,经florisil柱(1000mg)+活性炭(50mg)混合柱浓缩净化,用10 mL的乙酸乙酯淋洗后,经色谱分析验证,所得回收率在73.7%以上,RSD在4.1%以下,结果令人满意。

7-甲基鸟苷在玻碳电极上的伏安行为研究

研究了修饰核苷7-甲基鸟苷(7-Methylguanosine)的电化学行为及测定方法.在pH 1.98的B-R缓冲液中,用循环伏安法(CV),线性扫描伏安法(LSV)、微分脉冲伏安法(DPV)等现代电化学技术研究7-甲基鸟苷在玻碳电极(GCE)上的伏安行为.实验表明,7-甲基鸟苷在+1.036 V(vs.SCE)电位处产生一个阳极氧化峰,峰电流与7-甲基鸟苷的浓度在5.0×10-5-2.0×10-6mol/L范围内呈良好的线性关系,最低检测限(D=2σ/K)为4.1×10-7mol/L.并用恒电位库仑电解法等方法对其氧化机理进行了较为详细的探讨,得到了可能的电极反应机理:7-甲基鸟苷在玻碳电极上的电极反应是属于失1质子和2电子的不可逆的氧化反应.

奋乃静和氟奋乃静的毛细管电泳柱端喷壁式安培检测

应用自组装毛细管电泳-安培检测装置,建立了同时分离检测抗精神病药奋乃静与氟奋乃静的新方法.在1050 mV(vs. Ag/AgCl)检测电位下,奋乃静与氟奋乃静的检出限分别达0.060 mg/L与0.075 mg/L.在最佳检测条件下,两组分的响应电流与浓度之间有着良好的线性关系,线性范围为0.75～75 mg/L.将方法用于药物片剂以及模拟尿样和血清样品中奋乃静和氟奋乃静的测定,结果令人满意.

毛细管电泳-柱端喷壁式电化学检测法用于利尿剂氢氯噻嗪和氨苯喋啶的研究

应用毛细管电泳 电化学检测法对利尿剂氢氯噻嗪和氨苯喋啶进行了研究。考察了电化学检测和电泳分离条件对氢氯噻嗪和氨苯喋啶分离、检测的影响,结果表明在最佳分离、检测条件下,两种待测物在8min内达到基线分离。氨苯喋啶和氢氯噻嗪的检测限分别达到0 29和0 25mg/L。对两物质于日内和日间重复测定7次,迁移时间的日内相对标准偏差(RSD)不大于1 6%,峰电流的日内RSD不大于3 1%;迁移时间的日间RSD不大于1 7%,峰电流的日间RSD不大于4 9%。将该方法用于复方氨苯喋啶成药中氨苯喋啶和氢氯噻嗪的分离和测定,成药的检测结果与标示量比较,相对误差小于4 6%。在模拟尿样中对氢氯噻嗪和氨苯喋啶进行标准溶液添加回收实验,其回收率分别为93 5%～96 7%和96 6%～97 2%,结果令人满意。

毛细管电泳安培检测法用于7-甲基鸟苷与丝裂霉素C分离检测的研究

建立了一种同时分离检测7-甲基鸟苷与丝裂霉素C的毛细管电泳-安培检测方法.在950 mV电极(工作电极:0.3 mm微型石墨圆盘电极;参比电极:Ag/AgCl;辅助电极:Pt丝)电位下,于20 mmol/L的磷酸盐缓冲体系(pH 9.4)中,采用18 kV的分离电压进行分离.在最佳条件下,7-甲基鸟苷与丝裂霉素C在10 min内实现分离,7-甲基鸟苷与丝裂霉素C的线性范围均为0.50～50 mg/L,检测限分别为0.050 mg/L与0.025 mg/L.将该方法用于模拟尿样和模拟兔血清样的检测,7-甲基鸟苷与丝裂霉素C的回收率为93.0% ～97.2%,结果令人满意.

毛细管电泳-电化学检测法用于中药石韦中绿原酸和槲皮素的同时测定

建立了毛细管电泳同时分离测定中药石韦中绿原酸、槲皮素含量的分析方法.采用柱端喷壁式三电极系统的电化学检测方式, 工作电极为0.5 mm碳圆盘电极;参比电极为Ag/AgCl;辅助电极为铂丝电极.以 70 cm(o.d.360μm, i.d.25μm)的熔融石英毛细管为分离通道,在最佳电泳介质(pH=7.0,10.0 mmol/L磷酸盐缓冲溶液)中,当分离电压为21 kV时,两待测物质在8 min内完全分离.在最佳分离、检测条件下,响应电流与浓度之间的线性关系良好,绿原酸、槲皮素的线性方程分别为:y=0.268 x + 1.088、y=0.312x + 0.822,相关系数大于 0.999,绿原酸、槲皮素检测限分别达 0.075μg/mL和 0.020μg/mL.该方法具有良好的重现性,峰电流的 RSD小于 3.5%.已成功的用于实际中药石韦和模拟血样中绿原酸、槲皮素的含量测定,结果令人满意.

毛细管电泳用于中药白鲜皮中生物碱的分析

建立了毛细管电泳同时分离白鲜皮中3种生物碱(胡芦巴碱、白鲜碱和胆碱)的的定量分析方法.以缓冲液H3BO3—Na2B4O7(pH=8.4,5 mmol/L)、添加剂3 mmol/L SDS和0.1%triton X-100为电泳运行液,24 kV为分离电压,分离在5 min内就可以快速完成.在230 nm检测波长处,3种组分的线性范围为:胡芦巴碱5～100μg/mL、白鲜碱5～75μg/mL、胆碱50～300μg/mL,检测限分别为1.4、1.4和16.0μg/mL.方法用于白鲜皮实际样品的测定,回收率范围在92.0%～101.0%之间。

毛细管电泳用于瑞香苷水解常数的研究

采用毛细管电泳-紫外检测法对瑞香苷进行了水解动力学研究.瑞香素是瑞香苷的水解产物.考察了瑞香苷(DN)和瑞香素(DP)的紫外吸收随水解反应过程的进行而发生的变化,计算得水解的速率常数,并总结了酸度和温度对速率常数的影响规律.当盐酸浓度为1.0 mol/L,温度为333、347、351、363、371 K时的水解常数分别为1.1×10-3、4.6×10-3、6.6×10-3、17.3×10-3、33.5×10-3min-1.同时,根据阿仑尼乌斯公式计算该反应的活化能为91.62 kJ/mol.此法用于测定瑞香苷水解常数简便、直观.

大黄酸微分脉冲伏安法的研究和应用

利用循环伏安法(CV)、线性扫描伏安法(LSV)、方波伏安法(SWV)和微分脉冲伏安法(DPV)等现代电化学技术,对大黄酸在玻碳电极(GCE)上的电化学氧化还原行为以及电极反应机理进行了研究,同时还建立一种灵敏的测定大黄酸的分析方法.实验结果表明,在 pH 4.6的B R缓冲液中,大黄酸在 0.492 V(vs.SCE)电位处产生灵敏的微分脉冲阴极还原峰, 该还原峰的峰电流值与大黄酸的浓度在 4.0×10-7 mol/L^1.0×10-5 mol/L范围内呈良好的线性关系,最低检测限(D = 3σ/K)为3.9×10-8 mol/L.该法已成功地用于大黄碳酸氢钠片剂和兔血清中大黄酸的测定,结果令人满意,其回收率介于90.0%~100.1% 之间.并进一步对大黄酸在玻碳电极(GCE)上的电化学反应机理进行了探讨.

毛细管电泳-柱端安培检测法用于抗癌药物2-氨基-6-巯基嘌呤和8-氮杂鸟嘌呤的研究

采用毛细管电泳-安培检测法建立一种简单、快速、有效的同时分析抗癌药物2-氨基-6-巯基嘌呤和8-氮杂鸟嘌呤的新方法.在长50 cm、内径为25μm的未涂层毛细管中,采用20 mmol/L磷酸盐(pH为7.0)缓冲液作为运行液,当分离电压为21 kV时,两组分在12 min内达到基线分离.在上述最佳分离条件下,当电极电位为1.050V、进样时间为10 s时,2-氨基-6-巯基嘌呤和8-氮杂鸟嘌呤的峰电流和浓度之间呈良好的线性关系,其相关系数分别为0.999 20、.999 0,检测限分别为3.0×10-7、2.0×10-7mol/L.7次重复实验2-氨基-6-巯基嘌呤和8-氮杂鸟嘌呤的日间峰电流RSD分别为2.44%3、.46%.利用该法检测了牛血清蛋白中的2-氨基-6-巯基嘌呤和8-氮杂鸟嘌呤,回收率分别为100%-113%,93.0-102%.

UPLC-QTOF-MS快速筛查与确证中药中马兜铃酸类物质

基于超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱技术,建立马兜铃酸类物质的高通量、高分辨筛查分析方法.对75个中草药、中成药等样品进行筛查,其中31种中草药、23种中成药、5种鱼腥草、9种鱼腥草滴眼液均有不同程度的马兜铃酸类物质检出.针对检出的6种马兜铃酸类物质建立定量方法,其线性相关系数R^(2)均大于0.994,各目标物的检测限在2.5~50μg·L^(-1)范围内,回收率在86.27%~106.89%范围内.该方法操作简便快速,适用于大批量样品的快速筛查分析.

质子转移反应-飞行时间质谱快速鉴别金线莲产地

建立一种基于质子转移反应-飞行时间质谱(PTR-TOF-MS)的不同产地金线莲快速鉴别方法.采用PTR-TOF-MS对不同产地(福建、广西、台湾)的66个金线莲样本进行指纹图谱采集.将检测到的指纹图谱与化学计量学结合,开发一种可应用于不同产地金线莲快速准确鉴定的新技术.结果表明,使用PCA主成分分析方法提取主成分数为4、判别分析方法为FDA(Fisher判别分析法)时建立的数学分类识别模型性能最好,识别准确率达到97.0%,可以实现不同产地金线莲的有效判别.

玻碳电极上美雄酮的电化学行为研究

以pH=2.0的0.04 mmol/L BR缓冲液为支持电解质,玻碳电极为工作电极,分别采用循环伏安法(cyclic voltammetry,CV)、线性扫描伏安法(linear sweep voltammetry,LSV)和微分脉冲伏安法(differential pulse voltammetry,DPV)等技术对玻碳电极(glassy carbon elecbrode,GCE)上美雄酮的电化学行为进行研究,并选定微分脉冲伏安法进行定量分析.美雄酮在-0.932 V(vs.SCE)处有一阴极还原峰,其峰电流与美雄酮样品浓度在2.0～60.0μmol/L范围内呈良好的线性关系,其最低检测限(D=2σ/K)为0.43μmol/L.该方法已成功地用于大力补药片和尿样中美雄酮的分析检测.并探讨了美雄酮在玻碳电极上的电极反应机理,该反应属于得到1个质子和2个电子的不可逆的还原反应.本研究为开发便携式实时兴奋剂检测器奠定基础.

金属有机骨架材料MOF-235的合成及其对甲基橙吸附性能的研究

对金属有机骨架材料MOF-235的合成、表征及其对甲基橙染料的吸附性能进行研究.采用水热法合成MOF-235材料,通过X-射线衍射、IR、SEM验证并表征其结构特点.运用动力学模型和热力学模型,研究MOF-235对甲基橙溶液的吸附性能.结果显示,该材料对甲基橙的吸附可在极短的时间内达到平衡,温度对吸附效果的影响不大.对实验结果进行吸附等温线和动力学方程拟合,结果表明,MOF-235材料吸附甲基橙的Langmuir等温方程拟合效果更好,吸附过程更符合二级动力学模型.

基于纳米金棒刻蚀的多色可视化传感器应用于乌头碱快速检测

目的基于纳米金棒刻蚀的多色可视化传感器快速检测乌头碱。方法采用H2O2-辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)-3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine,TMB)体系的氧化产物TMB2+刻蚀纳米金棒,产生不同颜色的溶液,并将其与酶联免疫吸附测定法联用,构建一种酶联免疫多色可视化传感器应用于乌头碱快速半定量分析。结果在最优条件下,纳米金棒溶液的局域表面等离子体共振吸收峰的位移与乌头碱浓度在5~35ng/L范围内呈现较好的线性关系,检出限为1.67ng/L。结论该方法具有快速、选择性好、灵敏度高、裸眼可视化半定量等优点,对乌头碱的快速检测有一定的实际应用价值。

毛细管电泳—安培检测法用于抗精神病药物氟奋乃静的检测

应用自组装毛细管电泳—安培检测装置,以微石墨圆盘电极(vs.Ag AgCl)作为工作电极,在1000mV检测电位下,0.02mol L(pH6.0)H3PO4-NaAc缓冲介质中,采用24kV分离电压作用于体系,建立了毛细管电泳—安培检测法测定抗精神病药氟奋乃静的新方法.在最佳检测条件下,响应电流与浓度之间有着良好的线性关系,线性范围达2个数量级(0.1-10μg mL),检测限为0.04μg mL.5次平行测定的相对标准偏差RSD(n=5)为5.8%.将方法用于西药氟奋乃静片剂中的主要成分氟奋乃静测定,准确度达94.5%,回收率范围为95.5%-97.1%.方法同样适用于模拟尿样中氟奋乃静的测定.

UPLC-MS/MS法研究敌百虫对鱼脑微透析样品中乙酰胆碱和胆碱含量的影响

采用微透析取样和超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)相结合,开发了一种定量分析有机磷农药敌百虫对鲫鱼脑部乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)影响的方法。探讨了有机磷农药的中毒机制,发现随着敌百虫暴露时间增长,鱼脑中ACh含量显著增加、Ch含量减少,说明有机磷农药抑制了生物体中胆碱酯酶的活性。

一株深海热液口嗜热芽孢杆菌SY27F代谢产物活性的研究

【目的】对一株来源于深海热液口嗜热芽孢杆菌的次生代谢产物进行抑菌活性和抗肿瘤活性的初步研究。【方法】采用纸片法和微量肉汤稀释法检测嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物的抑菌活性,采用CCK-8法测定其次生代谢产物的抗肿瘤活性。【结果】抑菌实验表明,嗜热芽孢杆菌代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,其最低抑菌浓度分别为1.56 mg/mL和3.13 mg/mL;细胞实验表明,其代谢产物对肿瘤细胞A549、HepG2、HeLa、MCF-7均有一定的抑制作用,其半致死浓度分别为0.390、0.451、0.704、1.105 mg/mL;与人肝肿瘤细胞(HepG2)相比,其对人正常肝细胞(L02)表现出良好的生物相容性。【结论】嗜热芽孢杆菌SY27F次生代谢产物具有一定的抑菌和抗肿瘤活性,可为寻找新型抑菌抗肿瘤活性物质提供优质资源。