神经生长因子在老年痴呆动物模型中的作用

将老年大白鼠(24个月)左侧海马繖部分切断,建立基底前脑胆碱能损害的老年痴呆动物模型。予侧脑室注射神经生长因子(NGF),分别在用药后15天和30天测隔区和海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性。以正常鼠组和细胞色素C注射组作为对照。损害后隔区和同侧海马ChAT活性显著减少;NGF15天治疗组,隔区和损害对侧海马酶活性显著增加,是正常组的130％;30天治疗组,同侧海马酶活性比细胞色素C组增加48％。结果表时,NGF对老年鼠基底前脑胆碱能系统损害的治疗是有效的。本文还讨论了NGF在损害后急、慢性期的作用机制。

神经生长因子(NGF)对老年痴呆治疗的展望

随着神经生长因子(NGF)的研究由外周神经转向中枢神经,它对基底前脑胆碱能神经选择性营养作用受到广泛重视。研究者们希望通过对中枢NGF的研究,阐明老年性痴呆的发病机制,找到防治它的新途径。本综述重点讨论老年记忆障碍的胆碱能假说和NGF对中枢胆碱能神经作用的最新研究进展,并探讨与临床应用有关的进一步研究方向。

荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测.荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用"实时定量PCR(real time quantitative PCR)"或"TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)".该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术.

分子诊断与分子治疗是当代医学发展的必然

科学与技术的发明与发现促进了医学科学诊断与治疗学科的与时俱进。分子生物学领域越来越多的发明成果应用于临床医学,促进了分子诊断与分子治疗学科的发展。分子诊断与分子治疗是当代医学科学发展的必然。

面对基因诊断技术发展的挑战

近十年来,以DNA分析为基础的基因(核酸)诊断技术已逐步成为实验诊断的常规技术而广泛应用于临床各学科领域,包括遗传学、肿瘤学、传染病学、血液学、输血和免疫学等方面.核酸检测技术的快速发展和疾病基因组研究信息日新月异,并由此带来的巨大产业前景和社会需求,使我国医药卫生工作者、从事诊断产业人士和相关行业及政府管理部门面临全面挑战,不得不认真思考对策.

老年记忆障碍的胆碱能假说与神经生长因子(NGF)

人的认知功能特别是记忆能力通常在正常衰老过程中逐渐下降。在老年痴呆等病理、性衰老过程中,认知功能障碍则更为突出。记忆力减退是Alzheimer′s型痴呆的首发症状。因此,探讨与年龄相关的记忆障碍的神经学机理,不仅在延缓正常衰老过程中认知能力下降方面有重要意义。

神经生长因子促进老年痴呆鼠学习记忆恢复和海马突触重建

切断老年鼠（２４月龄）左侧穹窿海马伞（ＦＦ），造成隔－海马胆碱能系统损伤的痴呆模型。用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫和体视学分析ＮＧＦ对模型鼠学习记忆和突触的影响。实验１个月后显示：（１）定位航行试验中，损伤组大鼠寻找平台的潜伏期，稳定后的平均值为４０ｓｅｃ，而ＮＧＦ治疗组为２２ｓｅｃ，相互间具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）；（２）空间搜索试验中，损伤组在原平台象限跨越相应平台位置次数为１．９次，ＮＧＦ治疗组为５．９次，两者间有统计学意义（Ｐ＜０．０１）；（３）损伤组损伤侧齿状回分子层突触数密度和面密度分别下降２９％和１９．０３％，平均面积增大１１．４％。ＮＧＦ治疗组，突触数密度和面密度与损伤组相比，有显著升高（Ｐ＜０．０５），而平均面积显著下降（Ｐ＜０．０５），都接近于正常组；（４）损伤组损伤侧齿状回分子层突触前终末内线粒体的体密度和数密度分别下降３０．７％和５６．５％，体积增大３７．０９％。ＮＧＦ治疗组的体密度、数密度和体积与正常组相比，差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。提示ＮＧＦ能够改善老年痴呆模型鼠学习记忆能力和促进海马突触重建。

支气管肺泡灌洗液脱落细胞端粒酶hTERT基因表达的检测

背景与目的:肺癌患者中端粒酶活性常呈阳性,常规检测端粒酶活性的方法易发生假阳性,端粒酶hTERT基因表达水平可反映端粒酶活性高低。本研究采用相对定量PT-PCR法检测肺癌支气管肺泡灌洗液脱落细胞端粒酶hTERT的表达情况,为肺癌的早期诊断、鉴别诊断提供帮助。方法:采用纤维支气管镜收集了20例可疑肺肿瘤患者支气管肺泡灌洗液,对脱落细胞分别送病理检测和RT-PCR相对定量法检测端粒酶hTERT基因表达,并随访术后病理检测情况,同时检测10例非肺癌病人的支气管肺泡灌洗液标本作为对照。结果:20例可疑肺癌经术后病理检测证实有19例为不同类型的肺癌,1例为炎性假瘤。在19例肺癌的支气管肺泡灌洗液中16例检出不同程度的端粒酶hTERT基因表达,细胞病理检测仅发现11例,阳性率分别为84.2%和57.9%,两者有显著性差异(P<0.01)。10例非肺癌病人的支气管肺泡灌洗液中均无端粒酶hTERT基因表达。结论:采用RT-PCR方法检测支气管肺泡灌洗液中端粒酶hTERT基因表达,较细胞病理检测有更高的敏感性,有助于肺癌的早期诊断和鉴别诊断。

广东地区丙型肝炎患者的HCV基因分型研究

目的了解广东地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型情况,为丙型肝炎病毒的诊断和预防提供有力依据。方法根据丙型肝炎病毒RNA全序列,在5′-NCR区设计引物,通过套式PCR扩增,特异性产物测序分析并分型。结果检测HCV感染样本58例,扩增出阳性样本47例,共检出3种基因型,分别为1b,2a和4型,其中1b占85.1%,2a占12.8%,4型占2.1%,4型为中国人群中极少报道被检出的罕见型。结论广东地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,与中国其它地区HCV基因型分布比较一致。

丙型肝炎病毒(HCV)荧光PCR(F-PCR)试剂盒的研制及与免疫学方法的比较

目的:用荧光PCR（Fluorescence PCR,F-PCR）方法研制丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）RNA检测试剂盒,通过临床验证,考核其性能,并与免疫学方法比较。方法:F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏度。结果:设计合成了HLV F-PCR诊断试剂盒。检测了 512份临床血清标本,以美国 Abbott公司的HCV ELISA诊断试剂盒和美国Biotronics公司的HCV荧光RT-PCR诊断试剂盒（B-PCR）为对照。阳性率30.5％,灵敏度97.3％,特异性98.1％。结论:F-PC的灵敏度显著优于ELISA,也高于B-PCR;三者的特异性无统计学差异。F-PCR试剂盒可以检测HCV的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。

荧光定量RT-PCR检测mdr-1基因表达

目的 :建立荧光定量RT PCR检测肿瘤细胞mdr 1基因表达的方法 ,了解肺癌组织中mdr 1的表达水平。方法 :建立荧光定量RT PCR方法 ,在PE770 0型检测仪上定量检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达水平 ,同时检测 45例初治肺部肿瘤病人组织标本。结果 :荧光定量RT PCR检测K5 6 2 /ADM耐药株和K5 6 2不耐药株细胞mdr 1基因表达 ,重复 10次实验所得结果平均分别为 (6 86± 0 6 5 )× 10 7拷贝 /μgRNA和 (8 49± 0 6 7)× 10 5拷贝 /μgRNA ,两者相差 80 8倍 ,变异系数分别为 9 5 %和 7 9%。 45例肺部肿瘤中 ,有 12例检出有mdr 1基因不同程度的表达。结论 :荧光定量RT PCR检测mdr 1基因表达方法 ,检测结果用绝对拷贝数来表示 ,定量准确可靠 ,并有利于标准的统一。有 1/4未经化疗的肺癌病人有一定水平mdr

神经生长因子对痴呆模型鼠海马突触素的影响

切断SD老年鼠(24月龄)左侧穹窿海马伞.造成隔海马胆碱能系统损害的痴呆模型. 用免疫组化和图像分析技术分析神经生长因子对痴呆鼠海马突触素的影响.实验证明损伤一个月后.损伤对照组损伤侧海马CAI区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别是减少了28.17% 、32.15%、17.36%和35.22%:NGF治疗组、损伤侧海马CAI区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量只减少了6.17%、5.52%、13.50%和3.81%.提示神经生长因子能够促使痴呆鼠海马内突触素含量的增多.

BCRP基因在乳腺癌组织中的表达及意义

目的 研究乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)基因在乳腺癌组织中的表达水平 ,探讨其与肿瘤病理分期、淋巴结转移的关系。方法 采用实时荧光定量 RT- PCR检测 5 1例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中 BCRP基因表达。结果 BCRP基因在乳腺癌组织中的阳性表达率、表达水平均显著高于癌旁组织 (P<0 .0 1、<0 .0 5 ) ;BCRP基因在 、 、 期乳腺癌组织中的表达水平无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;有淋巴结转移者的 BCRP基因表达水平显著高于无淋巴结转移者 (P<0 .0 5 )。结论 BCRP基因表达水平与肿瘤病理分期无关 ,与淋巴结转移有关 ,BCRP基因过表达可能在乳腺癌的多药耐药中起较重要的作用。

神经生长因子（NGF）对基底前脑NGF－受体阳性神经元损伤后的保护作用

切断老年鼠（２４月龄）左侧穹窿海马伞，造成隔海马胆碱能系统损伤模型。用免疫组化方法分析脑室注射ＮＧＦ对基底前脑神经生长因子受体（ＮＧＦ－Ｒ）阳性神经元损伤的影响、实验证明损伤一个月后，损伤对照组损伤例内侧隔核和斜角带核垂直支ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量分别减少了５９．４％和３７．２４％，残存的神经元发生萎缩及表面受体含量增加。ＮＧＦ治疗组，损伤侧的内侧隔核和斜角带核垂直支的ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量只减少４．４７％和２．３６％，细胞形态学参数及受体灰度值都类似于正常。提示ＮＧＦ对基底前脑ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元损伤后有较好的保护作用。

鼻咽癌外周血免疫指标研究

目的寻找合适的鼻咽癌外周血诊断指标。方法设立鼻咽癌组(83例)和非鼻咽癌、非肿瘤的其他疾病对照组(105例)。用ELISA法分别测试9种细胞因子在血浆中的含量,并进行统计分析。结果白细胞介素(IL)-4在鼻咽癌组显著上升,IL-6、IL-12、转化生长因子-β、干扰素-γ在鼻咽癌组显著下降(P<0.05)。结论上述细胞因子的组合变化有望用于鼻咽癌诊断。

幽门螺旋杆菌感染与上消化道症状的相关性研究

目的分析幽门螺旋杆菌(H.pylori)感染与不同上消化道症状出现的相关性。方法 199例患者的胃黏膜标本用来做本次研究,使用Real-time PCR检测H.pylori的保守基因ure以判断H.pylori的感染。结果 199例患者中,H.pylori阳性121例(60.8%),有反酸嗳气症状者65例(32.7%),恶心呕吐者8例(4%),食欲不振者65例(32.7%),慢性腹痛者89例(44.7%)。H.pylori感染与反酸嗳气(χ2=0.22;P=0.64)、恶心呕吐(χ2=0.01;P=0.92)及食欲不振(χ2=1.92;P=0.17)无显著相关性,但H.pylori阳性人群中出现慢性腹痛症状者明显多于H.pylori阴性的人群(χ2=8.33;P=0.004)。结论 H.pylori可能在慢性腹痛症状的出现过程中发挥着潜在的作用。

STAT3特异性小干扰RNA表达载体的构建及其对STAT3表达的抑制

目的 构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法 设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果 经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论 运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。

HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系

目的探讨肝癌病人HBV YMDD模序突变及其与肝癌发生的关系。方法用流过式反向斑点杂交结合血清生化指标分析慢乙肝组(CHB)、肝硬化组(LC)和肝癌组(HCC)中HBV YMDD模序突变情况。结果HCC组、LC组、CHB组HBV YMDD模序突变率分别为1.67%(1/60)、4.44%(2/45)和63.82%(30/47)。HCC组、LC组及CHB组中ALT(谷丙转氨酶)活性分别为(66±25)、(66.98±113)、(105±170)U/L,而AST(谷草转氨酶)活性分别为(152±108)、(74.13±58)和(57.2±56.6)U/L。HBV YMDD模序突变的产生与用药时间长短显著相关,HBV YMDD模序突变与ALT升高相关性不显著,但与AST升高显著相关。60例肝癌中有HBVYMDD模序突变的只有1例,突变率为1.67%。结论HBV YMDD模序突变的发生与肝癌发生不存在明显相关性,仅与拉米夫定用药时间长短显著相关。同ALT相比,AST更好地反映了HBV引起的肝病肝脏损坏的严重程度。ALT是拉米夫定用药过程中与HBV YMDD突变有关的较为敏感的肝功能生化诊断和病情监测指标。

苯丙酮尿症分子遗传学研究进展

苯丙酮尿症是由于苯丙氨酸羟化酶基因突变引起的常染色体隐性遗传病。文章综述了苯丙酮尿症中的苯丙氨酸羟化酶基因的定位、结构、突变、调控以及突变基因的体外表达和苯丙氨酸羟化酶的三维结构特点等分子遗传学进展,阐述了苯丙氨酸羟化酶基因的突变对苯丙氨酸羟化酶的体外表达及其三维结构的影响,以及部分基因型与表型相关的分子机制。

套式荧光实时RT-PCR检测结直肠癌患者外周血中CRD-BPmRNA

目的 研究结直肠癌患者外周血中CRD BPmRNA的表达,探讨其作为结直肠癌标志物的可行性。方法 用套式荧光实时PCR对 64例结直肠癌患者、20例胃肠道良性疾病患者和 25例健康成人进行外周血CRD -BPmRNA的检测,并对阳性PCR产物进行克隆、测序。结果 结直癌患者中, 28(43 8% )例检测到CRD BPmRNA表达,在良性病和健康人均无表达,两组差异显著(χ2 =26. 493,P<0. 001)。CRD -BPmRNA的表达与结直肠癌的Dukes分期有显著相关性(χ2 =8. 195,P<0. 05)。结论 在结直肠癌患者的外周血中,能够检测到CRD- BPmRNA的表达,CRD- BPmRNA可作为外周血中结直肠癌细胞的肿瘤标志物用于临床诊断。