应用高剂量辐射花粉授粉及幼胚培养诱导苹果单倍体

以 10 0 0～ 150 0Gy剂量的γ射线处理‘红星’苹果花粉 ,以此花粉给‘贝拉’、‘辽伏’和‘富士’苹果授粉 ,获得 3个品种的幼胚 ,经幼胚培养得到各品种的单倍体植株。试验结果表明 ,影响高剂量辐射花粉技术生产苹果单倍体效率的主要因素是早期落果、幼胚败育和带胚乳幼胚不能培养再生植株。初步研究表明 2 5日龄幼胚 (胚珠 )

农杆菌介导的小麦活体转化

将含有NptII基因表达载体的农杆菌滴入小麦小花中进行小麦活体转化 ,通过对幼胚和成熟种子进行卡那霉素抗性初步筛选 ,并通过PCR和Southern杂交进行分子水平鉴定。结果显示 ,在所试的 5个品种 (系 )中 ,获得转化植株效率为 2 .0 %～ 3 .2 % 。

苹果单倍体原生质体培养再生植株

以富士单倍体试管苗幼叶和幼叶诱导的愈伤组织为材料制备原生质体 ,采用不同培养方法获得原生质体愈伤组织 ,在分化培养基上成功地诱导原生质体来源的愈伤组织再生不定芽。试验结果显示试管苗幼叶诱导的愈伤组织是制备高质量原生质体的良好材料 ,每g愈伤组织可制备原生质体 4 3× 1 0 6个 ;海藻酸钠球培养法是苹果原生质体培养的适宜方法 ,最终植板率达 1 5 % ;在分化培养基中添加精氨酸能有效提高愈伤组织不定芽分化能力 ,原生质体来源的愈伤组织分化频率高达 8 8%。

大豆幼胚培养直接成苗影响因素研究

为建立大豆幼胚培养直接成苗方法,分别研究了大豆幼胚胚龄、幼胚预处理方法、培养基及大豆品种对大豆幼胚培养直接成苗的影响。结果表明:15 d胚龄的幼胚平均萌发率为23%,20 d及以上胚龄的幼胚萌发率高于70%,20 d胚龄的幼胚虽能萌发,但芽和根的正常生长较为困难。在低温(4℃)、高温(37℃)和GA(100 mmol.L-1)预处理幼胚2 d再进行培养条件下,高温预处理平均成苗率达75%;而低温和GA预处理的成苗率只有4%。所试几种培养基对幼胚成苗效果没有显著影响。不同品种中,极早熟品种日本晴和台农292成苗率分别为74%和72%,早熟品种台湾75和苏早1号成苗率均为64%,夏大豆临豆8号成苗率(54%)最低。

不同基因型苹果的离体再生特性及其对NaN_3的反应

不同基因型苹果叶片培养物再生特性不同，主要表现在再生频率的高低和再生类型的差异。通过培养基中的激素和培养过程的光照调节，可以有效地提高各基因型品种的再生频率。不同基因型苹果叶片培养物对ＮａＮ３诱变处理的反应不同，总体而言，其存活率和再生频率均随ＮａＮ３浓度的提高而下降。不同基因型苹果的适宜ＮａＮ３浓度应有所不同，以３０％存活率为标准，对Ｍ２６、嗄拉、首红、长富２及岩富１０进行诱变处理的适宜浓度分别为３ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、３ｍｍｏｌ／Ｌ、２ｍｍｏｌ／Ｌ和２ｍｍｏｌ／Ｌ。

RPW2表达载体构建及对烟草的遗传转化

将RPW2基因插入表达载体pBI121的表达盒中,构建了RPW2组成型表达载体。通过农杆菌叶盘转化法转化烟草叶片,经卡那霉素筛选、PCR扩增和Southern杂交鉴定证明,RPW2基因已成功转入烟草细胞中,获得6个转基因株系。RT-PCR半定量分析表明,转基因烟草株系的叶片中有RPW2基因的表达。不同转基因株系的基因表达量不同,转基因株系T-R2和T-R4表达量较高。转基因植株叶片上人工接种烟草赤星病菌液检测转基因植株的抗病性,结果表明,与对照植株相比,转RPW2基因植株对烟草赤星病抗性显著增强,说明RPW2基因在烟草中也具有抗病能力。另外,转基因株系间RPW2基因表达量虽有差异,但抗病性与其他株系相比没有显著差异。

中棉所12(Gossypium hirsutum C.V.Zhongmian 12)体细胞胚发生及植株再生

通过对不同外植体的研究，发现幼胚下胚轴是理想的外植体材料；２，４Ｄ和ＺＴ是中棉所１２体细胞胚发生的关键植物生长调节物。从愈伤组织诱导到大量再生植株只需４个月左右的时间。

植物组织培养材料分化与脱分化过程中的生理生化变化

细胞分化和脱分化是植物组织培养再生植株的重要生理过程。细胞学、细胞化学和发育生物学等方面的研究积累了大量资料;联系激素作用机理从分子水平认识细胞分化的机理也有许多研究。无论从哪方面看,细胞内外化学物质的变化是细胞分化的物质基础,而对细胞分化及脱分化过程中生理生化变化的研究是认识其本质的重要方面。本文就细胞分化与脱分化的有关生理生化问题的研究作一简单的介绍。

大豆Lea5基因过表达提高烟草抗旱和耐盐性的研究

大豆Lea5基因是LEA基因家族成员之一。为分析大豆Lea5基因的功能,构建了大豆Lea5基因植物过表达载体p BI121-Lea5。通过农杆菌介导法转化烟草,获得TL-06、TL-09、TL-17和TL-32等4个转大豆Lea5基因烟草株系。RT-PCR分析表明大豆Lea5基因在4个转基因烟草株系的T2代植株均有不同程度的表达。以转基因TL-09和TL-32株系T2代植株为材料,进行了干旱和盐渍处理,结果表明,2个转大豆Lea5基因烟草株系T2代植株对干旱和盐渍的抗性显著强于野生型烟草,说明大豆Lea5基因可以提高植物抗干旱和盐碱的能力。

大豆Lea5基因的克隆与表达分析

为了解高温处理促进大豆幼胚萌发成苗的分子生物学机制,采用经典的基因表达差异显示技术,分析大豆品种日本晴高温处理的幼胚与对照组材料的差异表达基因。对其中一个差异表达基因K6进行了测序和比对分析,结果表明该基因序列与大豆Williams 82基因组中的Lea5基因相似度高达99%,可以确定为Lea5基因。Blastp比对分析结果表明大豆Lea5蛋白为LEA-3亚家族成员。利用蛋白质分析软件分析了Lea5基因推测的蛋白质结构的特点,结果表明该蛋白质由113个氨基酸组成,相对分子量为12.283 k D,等电点高达10.12。该蛋白质不形成典型的二级结构。RT-PCR分析表明该基因表达具有组成型特点,在大豆幼胚发育过程中稳定表达,在大豆的根、胚轴和叶片等器官中均有表达。

高剂量γ射线辐照花粉对苹果座果结实的影响

高剂量γ射线处理花粉影响苹果的座果结实，剂量越高，结实率越低，１０００～１５００Ｇｙ的剂量处理花粉，大部分花粉仍具活力，适于授粉，辐照花粉引起的严重落果主要发生在授粉后的２０～３０ｄ内，在试验的２个品种即Ｂｅｌａ、辽伏和富士中，１０００～１５００Ｇｙγ射线处理花粉均能诱导产生一定数量的种子。

T-DNA诱发的小麦强分蘖突变体研究初报

利用农杆菌介导的小麦活体转化技术转化多个小麦品种,得到一定数量的小麦转化体植株。在小麦品种鲁麦21的遗传转化体T0代植株中发现一强分蘖突变体,通过PCR技术和Southern杂交技术证明该突变体含有T-DNA序列;该突变体表现为单基因隐性突变,在突变体T3代中均能通过PCR扩增到T-DNA内的序列,表明该突变体为T-DNA插入诱发的突变体。通过对该突变体初步分析表明突变基因与温度应答有关,随温度的降低,突变体分蘖速度加快。

植物抗旱耐盐基因的研究进展

近几年许多与植物抗旱耐盐相关基因被克隆和分析,同时通过转基因技术将这些基因转到植物中异源表达,能显著提高转基因植物的抗旱耐盐能力。这些基因主要包括渗透调节基因、蛋白类基因(如信号传导中的蛋白激酶基因)及转录因子等。在逆境条件下,渗透调节基因通过合成脯氨酸、甜菜碱、糖类和多胺类等渗透调节物质维持植物中的渗透平衡;蛋白激酶基因产物是细胞信号传导中的组分,这些基因能促进植物对干旱失水反应和逆境信号的传递,启动抗逆基因的表达;转录因子通过与相关基因的特异性结合来调控其表达,进而产生相关调控蛋白等物质增强植物在逆境中的生存能力。本文主要综述了这三类抗逆基因的研究现状及其生物学机理,讨论并分析这些基因在应用中尚待解决的问题,为发掘更多的抗逆性的基因资源和进一步开展分子育种工作提供参考。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)cspB基因转化烟草(Nicotiana tabacuum)的研究

细菌冷休克蛋白cspB是原核生物RNA的分子伴侣,含有原始型的冷休克结构域,具有与核酸结合功能,可以防止RNase对mRNA的降解,也能纠正mRNA的折叠错误。为了寻找作物改良的潜在基因资源,从枯草芽孢杆菌XS-01基因组中克隆出cspB基因,并与pBI121构建成pBI121-cspB植物表达载体。利用叶圆盘转化法转化烟草,通过卡那霉素筛选和PCR、Southern杂交鉴定5个转化体株系。除TN010外,其他转基因株系在外观形态与野生亲本的没有差别,但TN001和TN011育性降低,TN010和TN012则完全丧失育性。干旱处理结果表明,转基因植株在土壤水分恢复后10 d,其平均单株干物质质量较之野生亲本的显著增加;叶片光合速率测定结果表明,在干旱处理时,转基因植株和对照亲本叶片光合速率均显著下降,在土壤水分恢复后,转基因植株的光合速率能快速恢复,但对照亲本的恢复缓慢。实验结果说明,cspB能够促进植物细胞从逆境伤害中快速恢复功能。

辐射诱发梅花（Prunus mume Sieb et．Zucc）突变体的研究

用５０Ｃｏγ射线不同剂量辐照送春、宫粉、骨里红等５个梅花品种的夏季芽条，随即芽接。结果表明，嫁接成活率随辐照剂量的增加而下降，适宜剂量为２０～３０Ｇｙ。在３０Ｇｙ处理的送春试材中，发现了一个节间比亲本紧凑、叶形呈披针状的突变株，但花态和花色均无明显变化，连续４年转接繁殖，突变体性状稳定。通过对叶片形态、组织学观察，以及叶绿素含量和同工酶测定分析，表明该突变体与亲本有明显差异。

超声波辅助农杆菌介导的小麦遗传转化初步研究

报道了一种改进的小麦转化方法——超声波辅助的农杆菌转化法。发芽的小麦种子经超声波处理20min后再经农杆菌浸染,浸染后的种子按正常播种和栽培管理至结实,对收获的成熟种子进行卡那霉素抗性筛选。结果表明,受试的4个小麦品种均得到抗性后代,PCR扩增结果证明这些抗性植株是转化植株。GUS染色结果表明不经超声波处理的种子几乎看不到转化的细胞,但经过超声波处理的种子,幼苗基部的细胞转化成功。研究表明,利用超声波辅助的农杆菌转化方法转化小麦能产生可遗传的后代。

cspB异源表达对提高转基因烟草植株耐高温能力的影响

为了解枯草芽孢杆菌cspB基因在植物中异源表达对植物应对逆境的影响,将cspB基因插入到pBI121的35S启动子下游取代原有的gus A基因,该基因的植物表达载体被命名为p BI121-csp B,通过农杆菌介导的转化法转化烟草,通过筛选培养获得转基因植株。RT-PCR分析表明,转基因烟草株系中均有csp B基因表达,其中TN012株系中表达量较大。转基因植株TN012和非转基因对照植株经38℃高温处理一周,再在25℃条件下恢复生长,经过7d的恢复生长,TN012的生物量明显高于对照植株。高温处理前,TN012与对照植株光合速率无明显差异,高温处理后TN012的光合速率显著高于对照植株的。TN012细胞中的可溶性蛋白在高温处理后明显上升,而对照植株的则明显下降。结果表明csp B基因植物异源表达提高植物对高温的抗性,cspB基因可以作为用于耐高温作物育种的基因资源。

如何提高生物化学课堂教学质量水平

针对生物化学课程内容抽象、不易理解等特点,从合理选用教学方法、将多种教学方式运用于课堂教学、将多媒体教学与传统的黑板式教学手段相结合等多个方面,探讨如何提高生物化学课堂教学质量水平。

秋葵幼胚培养试验初步研究

以秋葵幼胚为试材,筛选较适合幼胚萌发和成苗的培养基,并研究胚龄分别为开花后4 d、6 d、8 d、10 d的幼胚萌发率和成苗率.结果表明,秋葵幼胚萌发和成苗的适宜培养基分别为Qz(Ms+0.1 mg/mL BA+1.0 mg/mL GA3)和QG(Ms+0.5mg/mL GA3);开花后8 d的幼胚萌发率和成苗率最高.由此建立秋葵幼胚培养的方案.

通过苹果原生质体融合获得融合体再生植株(简报)

苹果品种 Gala和富士单倍体原生质体经 PEG诱导融合 ,6 0 d左右培养产生愈伤组织 .该愈伤组织经分化诱导的再生植株 ,通过细胞学 ,同工酶和 RAPD鉴定 ,再生植株 RH-