嗜水气单胞菌外毒素和外膜蛋白双基因融合表达载体的构建和高效表达

用基因融合方式 ,以嗜水气单胞菌基因组DNA为模板 ,设计引物通过聚合酶链式反应 (PCR)把去除部分毒性活性编码区的细胞毒肠毒素基因 (act)与去除信号肽的外膜蛋白基因 (OmpTS)连接一起 ,两基因之间插入一个link er(Gly4Ser) 3 经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,得到 2 .1kb的双基因融合片段 ,克隆于表达质粒pQE 30中 ,构建了双基因重组表达载体pQE30 /act GS ompTS ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,经IPTG诱导 ,表达出预期大小 (81.0kD)的融合蛋白Act GS OmpTS ,此蛋白占菌体总蛋白的 4 2 %。Westernblot检测结果显示 ,该蛋白与抗Act兔血清和抗OmpTS兔血清都呈阳性反应 ,表明融合蛋白保留了外毒素和外膜蛋白的反应原性 。

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的高效表达及其免疫原性

根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物 ,运用聚合酶链式反应 (PCR)扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSETA的BamHI和EcoRI位点 ,构建重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导获得高效表达 ,SDS PAGE蛋白电泳表明在 39 9kD处出现超强特异带 ,占总蛋白的5 1%。以Ni NTA Conjugate抗体进行Westernblot分析证明该 39 9kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Westernblot检测结果显示 ,该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的 36 9kD外膜蛋白均呈阳性反应 ,表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性 。

三株弧菌热休克蛋白70基因的克隆和序列分析

根据GenBank中同类蛋白序列设计特异PCR引物,从2株创伤弧菌Vibrio vulnificus和1株河弧菌Vibriofluvialis中扩增出热休克蛋白70(heat shock protein,hsp70)基因片段。对这3个片段进行克隆、测序和分析的结果表明,3个片段长均为1 911 bp,包含完整的hsp70 ORF,编码636个氨基酸。它们的氨基酸序列与GenBank中其它物种hsp70的氨基酸序列比较发现,2株创伤弧菌hsp70基因序列和同种其它菌株的同源性高,达98%以上;而河弧菌的hsp70序列属首次克隆;与多种原核和真核生物的hsp70氨基酸序列一起构建了系统进化树,结果支持传统的分类结果。

杜仲的研究与应用进展

简要介绍了杜仲这一中药传统习用的补益类抗衰老天然药用植物的分布地域、形态特征、适生条件等生物学习性，详细从传统医学及现代医学角度介绍了杜仲的药理、药效研究结果，重点叙述了杜仲发挥药效的８大主要有用化学成分，介绍了中国、日本、英国在杜仲深度开发方面的１９项公开专利。对杜仲药材生产的现状、存在问题进行了详细的讨论，提出了解决杜仲药材生产供不应求、药材资源合理利用与保护及提高药材品质的途径与对策。

植物次生代谢、离体培养条件下次生代谢物积累及其调控研究进展

简述了高等植物的几大类次生代谢产物及其合成途径，采用了大量研究实例以说明运用细胞工程生产代谢物的可能性，指出提高植物培养细胞中次生代谢物产量的各种调控途径，特别用研究实例来展示前体饲喂及诱导子添加对提高目的产物含量的显著效果。文末还对该科研领域存在的问题及未来研究重点进行了讨论。