俄罗斯鲟补体C7基因的克隆及表达分析

为研究俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)补体C7基因(AgC7)的功能,采用RACE (Rapid-amplification of cDNA ends)技术,获得AgC7的cDNA全长序列为3103 bp,包括开放阅读框(Open Read Frame,ORF) 2502 bp,编码833个氨基酸,5′-UTR (5′ untranslated region)和3′-UTR的长度分别为44和554 bp。同源性分析表明,AgC7与其他鱼类补体C7如斑点雀鳝(Lepisosteus oculatus)、斑点叉尾鲴(Ictalurus punctatus)、斑马鱼(Danio rerio)、大西洋鲑(Salmo salar)、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)氨基酸序列的一致性分别为56%、46%、49%、49%、47%,且都具有TSP1、LDLa、FIMAC和MACPF保守结构域。荧光定量qRT-PCR (quantitative Realtime PCR)结果表明,AgC7在血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、肌肉、皮肤、脾、胃和后肾组织中均可表达,且在肠中表达水平最高;用含有壳寡糖的饲料饲喂俄罗斯鲟60d后,AgC7在这13种组织中表达均有增加,在肠中增加量最高,约为对照组的1.51倍;嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)可诱导AgC7,在血液、鳃、头肾、肠、肝和脾6种组织中瞬时上调表达,随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低恢复至正常水平,其中,鳃中基因表达量的上调趋势最明显,最大表达量出现在感染后6h,为对照组的41.30倍,12h后基因表达下降并恢复至正常水平,表明AgC7基因可能参与了俄罗斯鲟抗细菌感染的免疫应答。俄罗斯鲟AgC7具有典型的补体C7基因特征,且壳寡糖刺激和病原感染后均可引起AgC7基因表达变化,补体C7可能参与了俄罗斯鲟的免疫应答。

0~#柴油对斑马鱼基因组DNA和环境DNA遗传毒性的RAPD比较

研究利用随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)技术,以斑马鱼基因组DNA和其养殖水体中的环境DNA(environmental DNA,eDNA)为模板,检测0~#柴油可溶性组分对斑马鱼(Danio rerio)遗传毒性的影响。结果显示,通过基因组DNA和eDNA扩增的RAPD图谱均可检测到0~#柴油对斑马鱼的遗传毒性。在未受到柴油暴露时,斑马鱼基因组DNA和水环境中eDNA在96h内的RAPD图谱均无明显变化;在不同浓度的柴油暴露下,随着暴露时间(0、24h、48h、72h、96h)延长,基因组DNA和eDNA的多态性位点减少,模板稳定性降低;随着柴油浓度(15%、50%、100%)的增加,基因组DNA和eDNA的多态性位点也减少,模板稳定性降低。这表明0~#柴油对斑马鱼基因组DNA和eDNA的遗传毒性均呈现时间-效应和浓度-效应关系,并且无论以斑马鱼基因组DNA还是eDNA为模板,柴油暴露组和未进行暴露的对照组的RAPD扩增图谱条带变化趋势一致。研究结果为通过RAPD技术检测柴油对水生生物的遗传毒性提供了新的研究思路和技术手段。