一株中华绒螯蟹病原菌的研究初报

报道了从病蟹分离到一株致病性细菌主要特性的研究。腹腔接种细菌的小白鼠在２４ｈ内死亡（ＬＤ５０为２．４５×１０７个菌）；河蟹在经５×１０４个菌／ｍｌ的浸泡６０ｍｉｎ后，３０℃在１４～１８ｈ期间死亡４／６，３６ｈ全部死亡；２５℃经７２ｈ仍全部存活。根据形态、培养特性以及生理生化等特征，初步认为该菌归属假单胞菌属。

鳖的免疫途径和免疫效果的观察

用灭活嗜水气单胞菌浸泡、饲喂和注射三种方法免疫稚、幼鳖共计约５７００余只，并通过微量细菌凝集法测定了其中部分免疫鳖血清中的抗体滴度。结果表明：１．从出壳后浸泡组的鳖血清中不能测出抗体；２．从用不同免疫剂量饲喂组、出壳后浸泡加饲喂组和注射组的鳖血清中能测出相应抗体，组间在阳性率和滴度高低等与免疫次数、剂量和途径明显相关；３．在同时测定的未免疫的２２只鳖血清中没有发现特异性抗体。综上所述，通过应用浸泡结合饲喂法免疫稚、幼鳖能获得一定的免疫效果。

鲫与8种淡水鱼血清和体表粘液蛋白分子及其抗原相关性分析

应用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）、琼脂免疫扩散和免疫电泳分析比较了鲤形目鲤亚目的鲫与其他８种淡水鱼的血清、体表粘液蛋白及其抗原相关性。这８种鱼分别是鲤亚目鲤形科的鲤、鳊、草鱼，鳅科的泥鳅，鲇亚目鲇科的鲇，鱼尝科的黄颡鱼，鳢形目乌鳢科的乌鳢和合鳃目合鳃科的黄鳝等。结果表明，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱中各种鱼的血清和体表粘液共有和特有蛋白组分的比例数在不同目、科和种之间差别不明显。在琼扩图谱中，兔源抗鲫血清蛋白抗体与鲫血清和体表粘液蛋白产生２～３条沉淀带；在免疫电泳图谱中产生１０条以上沉淀带。该抗体不能与乌鳢和黄鳝的血清和粘液蛋白结合，但能与同目的其他６种鱼的血清和体表粘液蛋白产生不同数量的沉淀带，其数目、部位和密度与其亲缘属性相一致。此外，同种鱼类的血清和体表粘液抗原表现出明显的相关性。所有这些表明，不同鱼种的血清和体表粘液蛋白分子存在与亲缘程度相应的交叉抗原。

乌鳢不同组织的LDH同工酶的研究

本文报道了应用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳（ＰＡＧＥ）分离和研究成体乌鳢肝脏、骨骼肌、肾脏、心肌、卵巢、脑、脾脏、眼和血清９种组织器官中ＬＤＨ同工酶（乳酸脱氢酶同工酶）。结果表明：除眼、脾组织中的ＬＤＨ分别为７条和５条同工酶带；肝脏、骨骼肌为１条和２条酶带外，多数组织中ＬＤＨ表现为４条酶带。进一步的分析表明，ＬＤＨ同工酶在活力和组织分布方面具有明显的特异性：血清、卵巢、骨骼肌的ＬＤＨ＿１，活力最强，而在其它组织中则ＬＤＨ４的活力最强。

应用MTT测定PBMC增殖最佳条件的研究

对ＭＴＴ（噻唑蓝）测定离休ＰＢＭＣ（外周血单核细胞）增殖最佳实验条件进行了研究，结果表明，在测定由不同有丝分裂原（ＰＷＭ、ＳＥＢ和ＣｏｎＡ）诱导的ＰＢＭＣ增殖中，ＭＴＴ的Ｏ．Ｄ值和表示３￣Ｈ一ＴｄＲ摄取量的ｃｐｍ值呈正相关（ｒ＝０．９１５～０．９８２，ｐ＜０．０５，ｐ＜０．０１）。在ＰＢＭＣ密度为２．５×１０￣５／孔、孵育时间为４ｄ～６ｄ的条件下Ｐ／Ｈ比值最大，此外，细胞培养基中的血清种类及其浓度也是重要的影响因素。ＭＴＴ的浓度及催化形成噻唑盐的时间在达４ｈ后对Ｐ／Ｎ比值影响不大。所有这些表明，只要选择最佳条件，应用非同住素标记的ＭＴＴ法可在科研和常规检验时测定畜禽ＰＢＭＣ增殖。

存在于奶牛Ig重链和多种动物Ig分子的两种相同抗原结合位点的研究

在应用ＥＩＪＳＡ鉴定７株抗奶牛ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ＿１、ＩｇＧ＿２和Ｉｇ一轻链的单克隆抗体（ｍＡｂ）反应性中发现，这些ｍＡＢ均是特异地与相应ｌｇ分子中的轻链或重链的抗原决定簇结合，用夹心法和抑制法均证明了这点。还发现，在奶牛ＩｇＡ的ａ一链和ＩｇＭ的μ一链上有相同的结合位点。与其他动物血清和经盐析Ｉｇ的反应结果表明，其中有一株抗Ｉｇ一Ｌ（轻链）的ｍＡｂ能与狗和海狗Ｉｇ较好地结合，与马和骆驼的ｌｇ亲和力轻小，但不能与猫、豚鼠、大白鼠、猪和家兔的Ｉｇ结合。这表明，不同种的动物Ｉｇ存在着共同抗原决定簇。

锌对几种淋巴类细胞生长和功能影响的研究

本文研究比较了锌和螯合剂ＥＤＴＡ对淋巴类细胞株ＰＤｅ－Ｂ－１、Ｊｕｒｋａｔ、ＢｏＬｃＬ、６Ｃ９和奶牛ＰＢＭＣ增殖及功能的影响。除奶牛ＰＢＭＣ之外，锌对各株细胞的增殖和功能均无促进作用，在浓度为１０～１００μｍｏｌ／Ｌ时有明显抑制甚至毒性作用。ＥＤＴＡ对各株细胞的增殖只有抑制作用，在同一浓度时对杂交瘤细胞增殖和抗体分泌的抑制作用基本一致，而对ＰＢＭＣ增殖和Ｉｇ分泌的抑制程度却明显不同。各种细胞在耐受锌和ＥＤＴＡ毒性作用的浓度方面表现明显差异。此外，培养基中的血清具有缓解由锌引起的抑制细胞生长和细胞毒性作用。这些结果表示：１．适量锌对ＰＢＭＣ免疫应答的促进或缺锌导致对细胞增殖和Ｉｇ分泌程度不同的抑制作用，是因为不同功能的淋巴细胞对锌的需求不同，尤其是锌对免疫调节细胞在分泌淋巴因子等方面的作用而导致的；２．

奶牛离体PBMC和体内免疫应答的个体差异及其机理的研究

检测１５头奶牛离体外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）和体内产生抗体免疫应答的结果表明，１．０μｇ／ｍｌ的ＰＷＭ或ＳＥＢ使ＰＢＭＣ增殖达最高值，但在分泌Ｉｇ中却表现出不同作用；还发现在群体内离体细胞增殖强度的变异程度（Ｃ．Ｖ≤１２．５％）小于分泌的Ｉｇ量的变异程度（Ｃ．Ｖ＝３１．９％～６２．２％，其中个别Ｉｇ量超出ｘ±２ＳＤ）。１５头奶牛在实验期间（１８０ｄ）的１２次血清样品中ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２水平变异程度（Ｃ．Ｖ≤１０％）也小于它们个体之间的变异程度（Ｃ．Ｖ＝１１．８～１５．８％）。在对卵清蛋白为载体的异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）的特异性反应中，初次和再次反应的抗体滴度（ＩｇＧ１和ＩｇＧ２）呈明显相关（ｒ＝０．６９８和０．８６７，ｎ＝１５；Ｐ＜０．０１）；而个体之间抗体滴度的变异程度大（Ｃ．Ｖ＝２８．４％～３６．７％），个别超出ｘ±２ＳＤ。分析表明，在ＰＢＭＣ分泌Ｉｇ水平或抗体反应滴度变异的个体与ＰＢＭＣ增殖强度和血清Ｉｇ水平无关。这些说明在免疫功能正常并相近的同种动物群体内，仍存在一定数量的个体。

锌对离体boPBMC的增殖和分泌Ig的促进作用

应用￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＥＬＩＳＡ测定了锌和其它微量元素对离休ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌免疫球蛋白（Ｉｇ）的影响。结果表明，０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ的锌能促进ｂｏＰＢＭＣ增殖（Ｐ＜０．０５）和分泌Ｉｇ（ＩｇＧ＿１，ｐ＜０．０５；ＩｇＭ，Ｐ＜０．０１）；其它微量元素，诸如镍，铜，铁，镉等均无这种作用。此外锌对培养２d后的细胞不表现出促进作用的结果表明，锌主要作用于免疫细胞被活化的初始阶段，提高了细胞的增殖和分化能力。

全面落实新《动物防疫法》加强立健全动物防疫体系——各级政府负有“统一领导”的责任——研读《中华人民共和国动物防疫法》体会

导读:新的《动物防疫法》正是针对新形势、新阶段下,进行动物防疫的法律保障。文件中明确提出:"国家对动物疫病实行预防为主的方针"。同时明确各级政府要"统一领导",特别是要"加强基层动物防疫队伍建设,建立健全动物防疫体系"等。建立健全动物防疫体系既是努力目标,又是具有实实在在内涵的系统工程。笔者认为,最能体现《动物防疫法》新的内容主要反映在政府的责任方面。《动物防疫法》明确提出,"县级以上政府"要"建立动物疫病预防控制机构,承担动物疫病的监测、诊断、流行病学调查、疫情报告以及其他预防、控制等技术工作。"国务院兽医主管部门要对动物疫病状况进行风险评估,根据评估结果制定相应的动物疫病预防、控制措施。国家、省(市)"人民政府兽医主管部门应当根据对动物疫病发生、流行趋势的预测,及时发出动物疫情预警。"《动物防疫法》还明确规定"在动物疫病预防和控制、扑灭过程中强制扑杀的动物、销毁的动物产品和相关物品,县级以上人民政府应当给予补偿。"在队伍建设方面,首次明确了"官方兽医"和"执业兽医"的含义和职责。总而言之,新《动物防疫法》对免疫、检疫、疫情报告和处理等制度作出了修改,同时增加了疫病预防、疫情预警认定、风险评估、防疫保障机制、执业兽医管理等方面的内容。在文中专家就新修《动物防疫法》中新内容及特质,从专业角度进行了(解)研读(说明:国家大法,拟研度),特刊出,以馔读者。

奶牛的一种先天性免疫缺陷──牛白细胞粘连缺陷

奶牛的一种先天性免疫缺陷──牛白细胞粘连缺陷余为一，潘玲（安徽农业大学畜牧兽医系）随着畜牧业的良种化程度越来越高，即用极少的种畜进行繁殖而获得较高的经济效益，使一些潜在的遗传性疾病得以传播。近年来，在美国、日本和德国相继报道了奶牛的一种遗传性免疫缺陷...

SEB抑制PBMC免疫应答的作用及机理

葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）不仅不能诱导离体奶牛外用血单核细胞（ｂｏＰＢＭＣ）分泌Ｉｇ，而且还能抑制ＰＷＭ和ｒＨＩＬ一２诱导的ｌｇ分泌。这种抑制作用依赖抑制细胞的增殖和分化，即经ＳＥＢ处理并且经孵育的细胞及其培养上清液才具有明显的活性；但它们对成熟的Ｉｇ分泌细胞的抑制作用不明显。细胞表型则表明ＳＥＢ能优先诱导ＣＤ８￣＋细胞亚群的增殖。由此提示，ＳＥＢ选择性地诱导抑制细胞而调节Ｉｇ的分泌。

水产动物常见病原菌的耐药性分析及中草药体外抑菌活性的检测

目的了解安徽省水产动物常见病原菌的耐药现状和耐药机制，探讨27种单味中草药和5个中草药复方配伍对耐药菌株的体外抑菌活性。方法分别采用K—B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测常见病原菌的耐药性和ESBLs，同时使用平板打孔法和改良微量稀释法检测中草药的体外抑菌活性。结果4种常见病原菌的23个分离株对常用的5类抗生素均呈现不同程度的耐药性，其中铜绿假单胞菌的耐药谱最广，对14种抗生素的耐药率均为100％。供试菌中仅检出2株铜绿假单胞菌为产ESBLs株，检出率为8．69％。黄连、大黄、金银花、夏枯草、地锦草、丹皮、马齿苋和连翘8种中草药对供试耐药株均有较强的抑制活性，其中黄连、大黄和金银花的抑菌活性尤为明显，其MIC值分别介于1．96～125g／L、7．84～125g／L和15．68～250g／L。5个复方配伍中以复方5的配伍效果最好，其MIC值为1．96～15．68g／L，抑菌活性显著优于单味药；其次是复方1和复方3，其MIC值为1．96～62．72吕／L；复方2和复方4的配伍效果差，其MIC值为31．36～125g／L。结论4种23株常见病原菌均为耐药菌株，产生ESBLs是铜绿假单胞菌高度多重耐药的主要机制之一。黄连、大黄、金银花和复方5配伍对常见病原菌耐药株具有良好的抑菌活性。

MHC分子多态性的起源、演变与抗病机理

主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)的概念源于解释异体间组织排斥和相容现象,现已拓展为与抗感染以及所有免疫反应相关的基因群。MHC是现有物种形成前就存在的原始基因。在进化过程中,MHC基因在物种之间和种群的个体之间都产生了明显差异。物种之间的差异主要是基因结构的不同,如有无基因框架和高度可塑性区、单一或重复基因座,还包括等位基因的排列方式以及不同数量的基因座和等位基因。亲缘关系较近的物种之间MHC基因结构相近,其差异表现在有无基因组单元重排方式和假基因。同种动物的MHC等位基因表现高度多态性序列。MHC基因是脊椎动物多态性最高的基因,其遗传基础是等位基因的点突变,即核苷酸发生替换。产生MHC多态性的原因主要是环境中病原压力。许多研究已经探明了与特定病原抗病相关的MHC的单倍型或MHC分子中的特定位点。MHC分子中肽结合区(Peptide binding region,PBR)是多态性最高的区段,PBR和抗原肽之间的亲和力与动物的抗病性/易感性关系最密切。分子生物学和生物信息学技术提供了研究MHC多态性,特别是探明MHC与抗原肽互相作用机理的理想工具。

鸡γ-干扰素基因的克隆与原核表达

应用反转录-聚合酶链式反应(RT PCR)技术,通过一对自行设计的引物,从经ConA诱导活化的鸡脾淋巴细胞的RNA中扩增出一特异性基因片段,其大小约为500bp。该片段经酶切和测序鉴定为鸡IFN γ基因。将其插入原核表达载体pGEX 4T 1,并导入大肠杆菌BL21细胞中,经IPTG诱导培养,获得分子量约为43000的蛋白带,表明所克隆的CHIFN γ基因在原核细胞中得到表达。

新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建

应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。

中华鳖普通变形杆菌的分离鉴定及其致病性研究

国内外已研究证实变形杆菌能感染多种动物，引起食物中毒、尿路感染和伤口感染而导致败血症。近年来国内学者也陆续报道变形杆菌可与嗜水气单胞菌等细菌混合感染鳖，引起鳖的穿孔病和白斑病。但有关变形杆菌在鳖细菌性疫病中出现的频率和致病机理尚未见报道。作者在鳖细菌...

中华绒螯蟹腹水病病原分析

从六安地区患腹水病的中华绒螯蟹(Eriochersinensis)体内分离到一株病原菌(HX4菌株),经API/ATB半自动化鉴定和分子遗传学鉴定,确定为拟态弧菌(V mimicus)。应用PCR技术、电镜技术、组织细胞模型和动物实验对该菌的毒素共调菌毛(ToxinCoregulatedPilus,TCP)、外毒素和内毒素等毒力因子研究的结果表明,HX4菌株为TCP+株,在pH6 7定居因子培养基中,30℃需氧培养条件下可较好表达TCP;TCP+菌对肠管的黏附率为(32 19±0 14)%、对HEp 2细胞的黏附菌数为16 03±4 66、对中华绒螯蟹的毒力(LD50)为2 08×106CFU·mL-1,均显著高于TCP-菌,其相应值分别为(0 52±0 06)%、6 8±2 06和2 09×107CFU·mL-1;外毒素具有很强的细胞毒性(TCID500 25μg)、肠毒性(皮肤蓝斑直径15mm)和中华绒螯蟹致死性(LD501 40μg),而内毒素对中华绒螯蟹基本无致病性。由此可见,TCP和外毒素是拟态弧菌HX4菌株的2种重要毒力因子,在细菌致病过程中起重要作用。

应用多重PCR检测水生动物源气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布

粘附素(aha1)、气溶素(aerA)和细胞兴奋性肠毒素(alt)是气单胞菌的主要毒力因子。根据aha1、aerA和alt基因序列设计三对引物建立了可同时检测三种毒力基因的多重PCR方法(MPCR)。该方法扩增出气单胞菌的aha1大小为1087bp,aerA为721bp,alt为480bp,其敏感度为102CFU·mL-1。而对金黄色葡萄球菌、恶臭假单胞菌、拟态弧菌以及非致病性气单胞菌均未扩增出任何条带。用限制性内切酶EcoRⅤ、BamHⅠ和FbaⅠ分别酶切PCR扩增产物,均获得与预期一致的酶切图谱。用建立的MPCR对15株水生动物源气单胞菌安徽分离株进行毒力基因检测,结果显示在13株致病性气单胞菌中10株细菌的毒力基因型为alt+aha1+aerA+,2株为alt+aha1-aerA-,1株为alt+aha1+aerA-;alt、aha1和aerA基因在气单胞菌中的携带率分别为100%、84.62%和76.92%。表明气单胞菌安徽分离株的主要毒力基因型是alt+aha1+aerA+的高毒力表型,alt毒力基因普遍存在于不同表型种气单胞菌中。

蟹源致病性拟态弧菌的编码鉴定及其特性分析

从病蟹体内分离到 1株致病菌 (H4株菌 ) ,经细菌编码鉴定法确定为拟态弧菌 (Vibrio mimicus)。对 H4株菌及其胞外产物的生物学特性检测结果显示 :(1) H4株菌对弧菌抑制剂 O/ 12 9、多粘菌素敏感 ,能在无盐胨水中生长 ,拉丝试验阳性 ,氧化酶阳性 ,VP阳性 ,发酵葡萄糖产酸不产气。这些生物学性状符合《伯杰氏细菌鉴定手册》中对拟态弧菌的描述 ,证实了编码鉴定结果的正确性 ;(2 ) H4株菌能粘附人及多种动物红细胞 ,使红细胞发生凝集 ,且该凝集现象不能被 D-甘露糖所抑制 ,推测红细胞膜上存在的血凝素受体不含有甘露糖结构 ;(3) H4株菌的胞外产物具有致死性、溶血性和蛋白酶活性 ,表明胞外产物中至少存在溶血素和胞外蛋白酶