人绒毛膜促性腺激素β亚基和补体C3d片段组成的单链多肽的生物合成

利用PCR方法在hCGβcDNA 3’端产生一个Bam HI酶切位点,将此cDNA克隆入pBS HindⅢ和Bam HI位点之间。用T3、T7引物从正反两个方向同时测序,确证其序列正确性。将C3d3 cDNA从pSG5·PSG5·C3d3·YL·C3d3·YL切出与hCGβ串联构建成质粒pBS-hCGβ-C3d3。然后构建表达载体pVL1393-hCGβ-C3d3,并与线性化核型多角体杆状病毒(AcNPV)基因组DNA共转染昆虫细胞Sf9,以噬斑法筛选出重组病毒AcNPV-hCGβ-C3d3。以重组病毒AcNPV-hCGp-C3d3转染Sf9细胞,收集的条件培液经检测,确定其具有远远高于hCGβ-oLHα的结合活性。经hCGβ单抗亲和层析柱分离纯化后,以SDSPAGE和Western blot均证实了表达产物的存在,分子量与预期的hCGβ-C3d3一致,并具有hCGβ的免疫学活性。