基于液相色谱-串联质谱肽组学技术鉴定地龙制剂中的多肽及含量检测

建立了液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)肽组学鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽及高效液相色谱(HPLC)检测多肽含量新方法。本文联用LC-MS/MS与De novo分离初步鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽成分,采用化学合成法制备多肽,进一步利用HPLC验证并测定其多肽含量。总共鉴定出482个多肽序列,对相对强度和评分较高的10条多肽进行化学合成,成功在多肽地龙蛋白压片糖果实际样品中验证到氨基酸序列为LAPVNKPGRF(LF-10)的多肽,实验测得LF-10的含量为0.00182%。LC-MS/MS与De novo的联用为地龙多肽类成分的鉴定分析提供有力的支持,建立的LF-10多肽HPLC定量分析方法简便易行、准确可靠,有助于多肽地龙蛋白压片糖果的质量控制及地龙多肽的进一步研究。

Fe_(3)O_(4)@ZIF-8-表面辅助激光解吸/电离质谱法检测美洲大蠊多肽

本实验在室温下合成了以Zn作为金属中心,2-甲基咪唑作为连接剂的磁性金属有机框架材料Fe_(3)O_(4)@ZIF-8,以Fe_(3)O_(4)@ZIF-8作为固体基质,通过建立Fe_(3)O_(4)@ZIF-8-表面辅助激光解吸/电离质谱(SALDI-MS)法,实现了美洲大蠊小分子多肽IPMTAPGL-NH_(2)、LTAPGL-NH_(2)、SLMTGPGL-NH_(2)、SLHTAPGL-NH_(2)的快速检测。实验优化了基质浓度、检测限和点样方法等条件,考察了该基质对美洲大蠊多肽IPMTAPGL-NH_(2)的质谱信号影响。与传统基质辅助激光解析电离质谱法(MALDI-MS)相比,Fe_(3)O_(4)@ZIF-8-SALDI-MS法检测背景更干净,目标多肽响应更强,检测灵敏度更高。该法可应用于血样中美洲大蠊多肽IPMTAPGL-NH_(2)的快速检测。

银离子信号放大电化学免疫法检测H1N1流感病毒

提出了一种新型高灵敏度的电化学分析方法,用于H1N1流感病毒的检测。双抗夹心免疫反应在酶联免疫吸附剂测定(ELISA)板上进行,纳米银-二氧化钛-壳聚糖(Ag-TiO2-CS)复合物标记的多抗作为信号源,经氨水溶解后产生的电活性的Ag+,结合高灵敏度的电化学方法间接检测H1N1流感病毒。通过对实验条件的考察可知,Ag-TiO2-CS标记过程简单易行,电化学反应结果提示,电介质对峰电流影响较大。实验结果表明,在优化的条件下,H1N1流感病毒浓度在1×10-5~10μg·mL-1范围内,电化学信号强度与病毒浓度呈多项式曲线关系,H1N1流感病毒浓度在1×10-5~0.1μg·mL-1范围内,电化学信号强度与病毒浓度呈线性关系。所构建的电化学免疫传感器结合了ELISA易操作性和电化学的高灵敏度,同时双抗夹心免疫法又表现出高选择性,可为新型电化学免疫分析提供新的思路。

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽(PAP-3)与不同浓度的顺铂(DDP)单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响;Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示,与DDP单独给药相比,PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强;PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高(P<0.05)。与对照组相比,DDP组中,p62蛋白水平降低,LC3II蛋白水平升高,LC3II/I的比例也升高,表现出细胞自噬流的活化;与DDP组相比,联合给药组中p62蛋白水平回升,LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少,而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测,PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平,抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高,增加细胞对DDP的敏感性,从而诱导HepG2细胞凋亡。

毛细管电泳-大体积样品堆积法测定地龙蛋白粉中地龙多肽

建立了一种简单灵敏的毛细管电泳-大体积样品堆积法同时分离检测4种地龙多肽,方法成功用于地龙多肽VQ-5、OEP3121、F-1及AQ-5的富集。实验中采用了高效毛细管电泳的大体积进样法并对电泳条件进行优化,获得最优条件:堆积电压为-20 kV,堆积时间为2 min,进样压力为20.68 kPa,进样时间为33 s,检测波长为215 nm。实验结果显示,4种地龙多肽可在11 min内完全分离,在各自线性范围内呈现良好的线性,相关系数均大于0.99,富集因子在7.7~30.3之间。将所建立的方法用于地龙蛋白粉中多肽的测定,测得地龙蛋白粉中多肽AQ-5的含量为0.0012%,回收率在91.97%~102.67%之间。该方法简单,快速且准确,适用于实际样品的分析。

有机框架材料在多肽富集的应用

生物医药领域近年来发展迅猛,多肽类药物因其生物学活性高、毒性小、生物相容性好等优势,在肿瘤治疗、细胞活性模拟、抗体检测等领域展开广泛应用,多肽的检测分析也成为研究的一大热点。传统的色谱法、溶剂沉淀法、离心超滤法和固相萃取法对多肽能够展现富集效果,但富集的效率往往不够理想。近年来,以有机框架材料为代表的纳米材料,在气体吸附、荧光、传感和催化等领域展开了广泛应用。有机框架材料凭借着独特的结构尺寸,成为了一类理想的生物吸附剂。由于其具有表面可修饰性,能够大大提高对多肽的富集效率。本文着重介绍近5年来金属-有机框架材料(metalorganic frameworks,MOFs)和共价-有机框架(covalent-organic frameworks,COFs)在多肽富集中的应用。

混合胶束毛细管电动色谱法测定片仔癀中有效成分

采用混合胶束毛细管电动色谱法(mixMs-MEKC)同时分离检测片仔癀中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、麝香草酚、人参皂苷Rb1及牛磺胆酸钠5种有效成分。实验发现,采用单一胶束5种目标化合物不能完全分离,当采用胆酸钠-十二烷基硫酸钠(SC-SDS)二元混合胶束时5种化合物达到完全分离。实验优化了混合表面活性剂的浓度、缓冲溶液pH值、分离电压和进样时间等条件对分离效果的影响。在最优化的电泳条件下,5种化合物在16min内得到基线分离,且线性关系良好,检测限(S/N=3)分别为0.2μg/mL、0.08μg/mL、0.01μg/mL、0.2μg/mL、0.2μg/mL。将该方法应用于片仔癀中上述化合物含量的测定。

毛细管电泳安培检测法测定密蒙花中的黄酮类化合物

采用毛细管电泳-安培检测法(CE-AD)对蒙花苷、刺槐素、木犀草素和芹黄素四种黄酮类化合物进行分离分析。在电极电位为+0.95V(vs.Ag/AgCl),电泳运行液为pH=9.00的60mmol/L Na2B4O7-120mmol/L NaH2PO4缓冲溶液,分离电压为18kV时,四种黄酮类化合物得到完全分离。在最优的条件下,四种黄酮类化合物的检出限(S/N=3)为0.2～0.005μg/mL。该方法可用于中药密蒙花中上述黄酮类化合物含量的测定。

毛细管电泳在中药研究中的应用概述

本文简要介绍了毛细管电泳技术,重点综述了近几年毛细管电泳在中药研究中的应用概况,并分析了该技术在中药研究中的发展前景。

毛细管电泳法分离检测三种肾上腺素类化合物

采用毛细管电泳法对去甲肾上腺素、去氧肾上腺素和异丙肾上腺素三种肾上腺素类化合物进行分离检测.在电泳运行缓冲液为100mmol/L NaH2PO4(pH=5.2)中,当分离电压为22kV时,三种肾上腺素类化合物在12min内达到基线分离.在最优的条件下,各组分的峰面积与待测物浓度在0.02-50μg/mL范围内呈良好的线性关系,检测限均为0.01μg/mL.将该方法用于加标尿样中上述三种分析物的测定,回收率为94.89%-105.9%.

基于功能化的纳米锐钛矿TiO2膜修饰电极的乌药醚内酯电化学传感器及其应用研究

将功能化的纳米锐钛矿TiO2(介笼结构)修饰电极作为乌药醚内酯电化学传感器的氧化还原探针,实现电化学方法检测乌药醚内酯。实验优化了电极修饰液用量、支持电解质和仪器参数等条件。在最优化的条件下,乌药醚内酯的线性范围为0.1~20μg/mL,检测限为0.058μg/m L。将所建立的电化学新方法应用于乌药中乌药醚内酯类的含量测定及药材真伪的鉴定,测得其平均含量为0.303 mg/g,并实现乌药与其伪品荆三棱药材的快速鉴别。

药学专业分析化学教学实践与体会

分析化学是研究物质的组成、含量、结构和形态等化学信息的分析方法和理论的一门科学。临床检验、药品鉴定、新药研制、药品质量的控制、中草药有效成分的分离检测。

芒果苷在玻碳电极上的电化学行为及分析应用研究

详细研究了芒果苷在玻碳电极上的电化学氧化行为,建立了芒果苷的微分脉冲伏安法(DPV)测定方法,其氧化峰电流与浓度呈良好线性关系,线性范围为3.5×10-8-1.6×10-6 mol.L-1;检测限为1.6×10-8 mol.L-1.该方法用于知母中芒果苷含量的测定,结果较为满意.此外,亦对芒果苷的电化学氧化反应机理进行了初步探讨.

1-乙基-3-甲基咪唑L-乳酸盐作为手性配体用于氨基酸的手性拆分

基于手性配体交换机理,研究了以手性离子液体1-乙基-3-甲基咪唑L-乳酸盐([EMIM][L-Lac])为手性配体拆分色氨酸对映体(Trys)、苯丙氨酸对映体(Phes)和酪氨酸对映体(Tyrs)的方法。实验考察了背景电解质和中心离子种类、手性配体与中心离子的浓度及比例、运行缓冲液pH等因素对Trys、Phes和Tyrs手性拆分的影响。研究发现,当运行缓冲液为40.0 mmol/L[EMIM][L-Lac]、20.0 mmol/L氯化铜(pH 4.5)时,3对对映体均能得到良好的手性拆分。为了验证[EMIM][L-Lac]的良好性能,实验进一步将L-乳酸(L-Lac)作为手性配体用于Trys的手性拆分。对比实验发现,单独使用L-乳酸,DL-Try只能得到部分拆分,加入离子液体1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐(EMIM-Ace)后,DL-Try分离情况得到了很大改善,但出峰时间延长至30 min以上。而使用[EMIM][L-Lac]时,Trys的出峰时间均在15 min以内。实验最后还对手性拆分机理做了进一步讨论。实验结果表明:在EMIM-Ace辅助L-Lac体系中,EMIM-Ace仅被用于抑制电渗流,并未参与手性配体交换反应;而在[EMIM][L-Lac]体系中,参与手性配体交换反应的主要是未解离的[EMIM][L-Lac],而不是解离后的L-乳酸根离子形成的L-乳酸。

反向胶束电动毛细管色谱-直接紫外检测法测定康复新液中氨基酸

本文建立了一种反向毛细管胶束电动色谱-直接紫外法同时分离检测亮氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、脯氨酸5种氨基酸。在检测波长为200nm,分离电压-20kV,压力进样34.5kPa×5s的条件下,以含有0.4mmol/L十六烷基三甲基氯化铵(CTAC),6%(V/V)乙腈的40mmol/L KH2PO4-110mmol/L NaOH(pH=11)为运行缓冲液,5种目标氨基酸在10min内达到基线分离,检测限可低至0.07μg/mL。将该方法用于康复新液中所含人体必需氨基酸亮氨酸和缬氨酸进行测定,加标回收率在77.41%～112.6%之间。本实验所建立的方法简单、快速、有效,为康复新液中氨基酸的直接测定提供新方法。

环糊精修饰毛细管胶束电动色谱同时分离检测橙皮苷和柚皮苷对映体

本文利用环糊精修饰毛细管胶束电动色谱法（CD-MEKC）同时分离检测橙皮苷和柚皮苷对映体。实验优化的条件为：以60mmol/L胆酸钠（SC）＋30mmol/L羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）＋20 mmol/L NaH2PO4-100 mmol/L NaOH（pH=9.0,97%（V/V））＋3%（V/V）甲醇为运行缓冲液,分离电压25kV,紫外检测波长214nm。在上述最佳条件下,橙皮苷和柚皮苷对映体在9min内得到完全分离,橙皮苷对映体的检测限（S/N=3）分别为0.13μg/mL和0.25μg/mL;柚皮苷对映体的检测限（S/N=3）分别为0.14μg/mL和0.07μg/mL。将所建立的方法用于胃苏颗粒制剂中橙皮苷和柚皮苷的对映体测定,回收率在86.0%～113.2%之间。

大体积样品堆积-微乳液胶束电动色谱法测定5种黄酮类化合物

本文利用大体积样品堆积-微乳液胶束电动色谱法(LVSS-MEEKC)测定5种黄酮类化合物。采用LVSS对样品进行富集,最佳条件为:分离电压20kV,进样时间20.7kPa×55s,堆积时间1.25 min,堆积电压-20kV。最佳MEEKC条件为:以20mmol/L硼砂-40 mmol/L NaH2PO4(pH=9.0)+0.3%十二烷基硫酸钠(SDS)+1%乙酸乙酯+2%正丁醇为运行缓冲液,分离电压20kV,检测波长214nm。在最优化的分离条件和富集条件下,5种黄酮类化合物在12min内得到基线分离,5种成分的检测限(3倍信噪比)低至ng/mL级。将所建立的方法用于人尿加标样品的测定,加标回收率在92.50%~110.0%之间。

门诊高血压患者自我管理干预效果分析

目的分析门诊高血压患者自我管理干预效果。方法选取2012年1月～2013年5月本院门诊收治的120例高血压患者,按数字法随机的分为观察组与对照组各60例,对照组患者进行一般的健康教育,观察组患者进行高血压患者自我管理干预,患者随时进行复诊。观察两组患者生活行为、相关知识掌握情况及血压控制情况等。结果经干预后,观察组患者按时服药、合理饮食、戒烟戒酒、定期检查、生活规律情况明显优于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者相关知识掌握优良率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组血压值控制达标、血压测量频率达标情况明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自我管理干预能有效的提高门诊高血压患者的自我管理能力,改善患者日常生活方式,增加患者对高血压相关知识的掌握,减少并发症的发生,值得在临床上推广与应用。

毛细管电泳-柱端安培检测测定莲子心中荷叶碱、芦丁和金丝桃甙的含量

采用毛细管电泳-柱端安培检测测定莲子心中荷叶碱、芦丁和金丝桃甙的含量.研究了检测电位、运行缓冲液浓度和pH值,分离电压和进样时间对分离和检测的影响.以微碳圆盘电极(Ф=0.5mm)为工作电极,检测电位为+0.95 V(vs.Ag/AgCl),pH为7.25的50 mmol/L Na2B4O7和100 mmol/L NaH2PO4缓冲液为运行液,当分离电压为15 kV时,3种分析物在15 min内完全分离.荷叶碱、芦丁和金丝桃甙的检出限(S/N=3)分别为0.02μg/mL、0.05μg/mL和0.04μg/mL.该方法已成功地应用于莲子心中上述3种活性成分的测定.

蜚蠊的化学成分与质量控制研究进展

蜚蠊是传统的昆虫药材,其临床应用广泛,具有通利血脉、促进上皮细胞移行生长、加速组织修复及良好的抗菌、消炎、去腐生肌作用。本研究就近几年相关研究报道中关于蜚蠊主要化学成分及其质量控制这两方面进行综述。以期为蜚蠊的综合利用提供参考。