广州市从化区育龄人群α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查及基因鉴定结果分析

目的了解和分析广州市从化区育龄人群中α-珠蛋白生成障碍性贫血发病率及基因突变类型。方法应用血细胞分析和血红蛋白电泳对24083例育龄人群血样进行初筛,初筛阳性者采用跨越断裂点聚合酶链反应(GAP-PCR)和PCR反向点杂交技术检测α-珠蛋白变异基因,使用PCR反向点杂交方法检测β-珠蛋白17种常见突变基因。结果经基因鉴定共检出α-珠蛋白生成障碍性贫血基因异常者2596例,异常发生率10.78%。α-β复合基因突变者170例,复合发生率0.71%。在突变基因中,包括缺失型2550例,占98.23%;非缺失型46例,占1.77%。共含有14种基因突变类型,其中血红蛋白H(HbH)病5种,以--^(SEA)/-α^(3.7)为主;轻型4种,--^(SEA)/αα基因型达到了68.61%;静止型5种,占比最高的前两种基因型为-α^(3.7)/αα和-α^(4.2)/αα。αβ复合基因突变类型检出23种,检出率最高的前六种分别为--^(SEA)/β^(CD41-42),-α^(3.7)/β^(CD41-42),--^(SEA)/β^(654),--^(SEA)/-28,-α^(3.7)/β^(654)和-α^(3.7)/βCD17,占全部复合类型的75.27%。结论广州市从化区α-珠蛋白生成障碍性贫血基因异常发生率较高,基因突变类型和构成比具有自己的特点,是α-珠蛋白生成障碍性贫血一个较为特殊的区域。

中国“丝绸之路”地区血红蛋白病的遗传流行病学特点

对“丝绸之路”沿线陕、甘、新等省区的 2 2万余人进行了血红蛋白病调查 ,应用蛋白质一级结构分析技术 ,从 2 71例异常血红蛋白先证者中 ,发现变异体 2 4种 ,以HbDPunjab、HbGTaiPei、HbGCoushatta频率较高 ,呈梯度分布 ,其中HbJTashikuergan和HbTianshui为世界新种异常血红蛋白。采用基因鉴定技术 ,于 85例 β地中海贫血携带者中 ,确定基因突变类型 12种 ,以CD1 7(A→T)频率最高 ,其中 [- 2 8(A→G) .CD1 7(A→T) /N]双重突变杂合子 ,为同一染色体上的双重基因突变 ,极为罕见 ,CD8(-AA)、CDs 8/9(+G)为在中国人中首次发现。根据“丝绸之路”地区异常血红蛋白和地中海贫血的类型特点、地理及民族分布规律 ,本文认为①我国西北部民族主要由中亚高加索人 ,黄河流域汉族人和蒙古高原的古代游牧民族组成。②β地贫CD1 7突变基因可能起源于甘肃的陇原大地 ,随华人迁徙传入东南亚各地。③该地遗传背景复杂 ,突变基因具有高度的异质性 ,存在显著的遗传流行病学特点。

新疆地区苯丙酮尿症PAH基因新突变鉴定

苯丙酮尿症（PKU）是一种常见的可以造成儿童不同程度智力损害的先天代谢性疾病，属于常染色体隐性遗传，其主要致病因素是苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因的异常突变。这类突变包括所有外显子以及内含子、5＇-UTR和3＇-UTR区域等，突变的形式也多种多样，包括错义突变、小缺失、剪接位点突变、沉默突变、无义突变、小插入及大片段插入。

新疆地区苯丙酮尿症民族和地区分布特点

目的:探讨新疆地区苯丙酮尿症(PKU)的筛查、诊断、治疗以及民族和地区分布特点。方法:PKU新生儿筛查采用荧光分析法,诊断参照国际标准方法进行。治疗采用低苯丙氨酸饮食疗法。结果:通过新生儿筛查和全疆范围的走访调查,发现并确诊PKU患者44例,这些病人年龄跨度较大,失查、失治严重。他们分布于新疆15个地(州)、市,包括4个民族,有一定的民族和地区分布特性。结论:本项目基本掌握了新疆PKU的发病及分布特点,积累了治疗经验,为该地区今后制定防治战略提供了科学依据。

新疆维吾尔族苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的了解新疆维吾尔族苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变构成及特点。方法采用PCR产物直接测序的方法,测定9例维吾尔族苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因全部外显子及其启动子区域序列。结果在18个PAH等位基因中共检出15个不同的突变基因,检出率为83.3%(15/18),常见突变类型包括R243Q、EX6-96A>G和R111X,其余突变类型均为散在发生。从维吾尔族中检出的PAH突变基因均系在本民族中首次报道,其中5'-Flanking-480DelACT和5'-Flanking-626 G>C突变是世界新的PAH基因突变类型。L348V突变是国内未见报道的新突变。结论研究结果显示维吾尔族PAH基因突变表现出多样性、复杂性和特殊性,具有显著的民族特色。

应用二次 PCR 技术提高体外基因扩增的效率

自从1985年 Kary Mullis 等创立 PCR 技术以来。作为一种基因研究的新方法已经在许多领域内得到广泛应用。PCR 方法简便、快速、灵敏、特异,但实验易受诸多因素的影响,可以造成非特异性扩增产物或扩增产物的产量不足等现象,使实验达不到预期的结果。为此,我们建立了 PCR 二次扩增方法,弥补了第一次扩增时出现的缺陷,提高了扩增效率。

高原低氧环境对成年男性生精功能的影响

目的了解不同海拔高度与不同驻留时间对男性生精功能的影响。方法采用自身前后对照方法,对同一批进驻高原某部官兵,于上山前一个月、上山后半年、上山后一年和下山后半年四个时间段,分别观察不同海拔高度血清抑制素B(INHB)水平、精液质量及精子运动参数变化。血清INHB测定使用ELISA方法,正常值<150pg/ml;精液分析应用CASA系统完成。结果对同一批官兵,于上山前、中及下山后分别测定血清INHB浓度,结果显示,上山半年血清INHB水平显著升高,至一年血清INHB仍然维持较高水平,到离开低氧暴露环境半年时间后,血清INHB浓度虽有下降,但仍未完全恢复到上山前水平。精液质量检测发现,上山半年组与上山前相比,精子总数、精子密度、精子活力和精子活率显著降低,精液液化时间显著延长;上山一年组与上山前相比,精子活力和精子活率进一步明显减低,但精子密度大幅回升;下山半年后,除液化时间仍然明显延长之外,其它指标均已回复。精子运动参数观察表明,上山半年后,精子的鞭打频率显著增加,直线性、摆动性和前向性显著降低;到上山一年时,精子的直线速度、曲线速度、路径速度和侧摆幅度显著降低,但精子的前向性、摆动性、直线性及鞭打频率基本正常;下山半年后,精子的各项运动参数均已恢复到上山前状态。结论急进高原时,低氧暴露因素对男性生精功能有较严重的影响。随着时间延长,受机体应急和调节机制作用,机体的生精功能有所恢复。在脱离低氧暴露环境后,其生精功能逐步趋于正常,但这种复原将是一个缓慢的过程。

应用PCR技术检测HBsAg携带者血清中HBV DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例 HBsAg 携带者和58例正常人血清中的HBV DNA 特异性片段,通过与 HBsAg 滴度及 HBV 血清标志物进行对比分析发现 HBV DNA 阳性率与 HBsAg 滴度呈正相关(r=0.981,p<0.005),与 HBeAg 减低,抗-HBe 产生以及其后的 e系统消失过程呈相应递减趋势。并且在单项抗-HBs 阳性的血清中,HBVDNA 检出率可达10%。

苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因外显子5突变鉴定

目的研究新疆地区苯丙酮尿症(PKU)患者中苯丙氨酸羟化酶基因第5外显子的突变特点。方法应用PCR-SSCP分析技术结合基因序列测定方法进行筛查和鉴定。结果在37例PKU患者共74条染色体中,检出基因突变4种,即错义突变F161S、剪接位点突变IVS4-1G→A、错义突变R158Q及无义突变Y166X,其突变发生率分别为4.1%、1.4%、1.4%和1.4%,外显子5的等位基因突变频率是8.1%。对国内外研究资料和本文外显子5突变类型频率的比较分析显示,R158Q是欧洲及拉美等国普遍存在的突变型,IVS4-1G→A是亚洲黄种人常见的突变体,而F161S和Y166X则是新疆地区PKU患者特有的基因突变类型。结论新疆地区是我国与亚欧地区之间一个较为特殊的PAH突变基因分布带,是研究突变基因多样性、PAH基因异质性特点以及人类起源、迁徙等的理想资源库。

陕、甘、新地区β地中海贫血的突变基因分析

分析了丝绸之路沿线陕、甘、新三省区８５例β地中海贫血（β地贫）患者的基因突变。检出率最高的前４种突变为ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）、ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）、－２８位（Ａ→Ｇ）和ＣＤｓ４１／４２（－ＴＴＣＴ），占总检出率的７８．７％，是该地区主要的β地贫突变类型。此外还检出了ＣＤ８（－ＡＡ）、〔－２８（Ａ→Ｇ）ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ〕、ＣＤｓ８／９（＋Ｇ）、ＣＤｓ２７／２８（＋Ｃ）等共１２种β地贫的基因突变型。其中〔－２８（Ａ→Ｇ）ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ〕为同一染色体上的双重基因突变，未见文献报道；ＣＤ８（－ＡＡ）和ＣＤｓ８／９（＋Ｇ）为在中国人中首次发现；ＣＤｓ２７／２８（＋Ｃ）在我国也甚为罕见。研究表明，丝绸之路地区β地贫的类型及频率既与我国其他地区乃至东南亚各国不完全相同，又与邻近的中亚各地有一定差异。

新疆11例β地中海贫血CDs41/42(-TTCT)的基因分析

应用ＰＣＲ／ＡＳＯ技术对新疆的１１例β地中海贫血（地贫）进行基因分析。现已鉴定为ＣＤｓ４１／４２（－ＴＴＣＴ）基因突变，其中汉族８例维吾尔族２例，瑶族１例，均为杂合体。维吾尔族中的这种突变型系首次报道。这些先证者都有地贫症状，伴有程度不同的贫血和ＨｂＡ２增高（３．３９％～６．６７％），分散在新疆的广大地区。本文为了解这种突变类型在我国的分布情况提供了新的资料。

应用FQ-PCR技术检测乌鲁木齐地区性病病原体的流行病学分析

目的掌握本地区性病病原体的现行感染水平及发展规律,为控制该疾病的传播和流行提供科学依据。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术,定量测定病原体基因。结果连续4年对引起性病的5种主要病原体UU、HPV、HSV、NG及CT进行了检测,结果显示①阳性率分别为45·84%、29·68%、21·45%、9·09%和7·10%,与国内已有文献比较,本组UU感染率最高,而NG、CT却较低。②UU、NG及CT在女性中的阳性率高于男性,但HPV和HSV却低于男性,其性别差异与通常的认识既相一致(如UU、CT),也有不同(如HPV、HSV、NG)。③4年间UU、HPV和NG感染逐年升高,CT感染逐年下降,流行趋势与国内外相关报道存在较大差异。结论乌鲁木齐性病病原体的感染现状显示明显的地区特点,深入研究并从流行病学角度分析该地性病病原体的发生、发展趋势,对加强性病防治工作具有重要意义。

应用二次PCR技术提高体外基因扩增的效率

自1985年Mullis等创立PCR技术以来,作为一种基因研究的新方法,在传染病、遗传病、肿瘤及基因工程的诊断和研究等许多领域内得到广泛应用,是分子生物学研究技术的重大突破.PCR方法灵敏、特异、简便、快速,但实验受诸多因素的影响,可以造成非特异性扩增产物或扩增产物的产量不足等,使实验达不到预期结果.为此我们建立了PCR二次扩增方法,弥补了第一次扩增有时出现的缺陷,提高了扩增效率.

甘肃地区的血红蛋白病研究

本文总结了甘肃河西走廊沿线酒泉、张掖、武威、天水等地区血红蛋白病的类型及分布特点。分析该地区 5 7例异常血红蛋白的一级结构 ,确定 β链变异体 7种 ,α链变异体 6种 ,其中HbTianshui为世界新种异常血红蛋白。对 2 7例 β地中海贫血进行了基因鉴定 ,发现 4种突变型 ,以CD17(A→T)基因突变为主 ,检出的 β地中海贫血 [- 2 8(A→G)、CD17(A→T) /N]双重突变杂合子 ,为同一条染色体上基因的双重突变 ,极为罕见。根据河西走廊沿线血红蛋白病的地理及民族分布特点 ,作者认为①该地区的汉族人融合了部分其他高加索人种和蒙古人种的血缘。②推测 β地中海贫血CD17的突变基因可能起源于甘肃陇西地区 ,随华人的迁徙传入东南亚各地。③该地众多的异常血红蛋白变异体和地中海贫血基因突变型 ,说明这一地区遗传背景十分复杂 ,其基因的传递且具有高度异质性。

苯丙酮尿症的饮食控制与营养需求

高苯丙氨酸血症(HPA)中最常见的是由苯丙氨酸羟化酶缺乏所引起的苯丙酮尿症(PKU),患者约占HPA的98％。PKU的临床症状主要表现为神经系统发育异常,智能发育障碍等,严重者常危及生命。对于PKU的治疗,目前国内外均采取严格限制苯丙氨酸(phe)摄入的饮食疗法,在实施这一治疗方案后,患者的血浆phe浓度会被控制在适宜的范围内,但由此会因机体的营养成份摄入不足而影响其正常生长发育。如何对PKU患者进行科学。