外泌体在糖尿病视网膜病变的机制研究进展

外泌体是广泛存在于人体,由机体细胞产生并分泌的纳米级细胞外囊泡,能相对稳定地存在于各种生物组织和体液中,并携带特定的miRNA、蛋白质、转录因子等多种信息分子,参与调控体内多种疾病的病理生理过程。近年来随着外泌体在各学科研究的不断深入,其在眼科学领域的研究也迅速开展,目前发现外泌体在糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性、自身免疫性葡萄膜炎、角膜病及青光眼等多种疾病中发挥重要作用。随着生活水平的提高,全世界糖尿病视网膜病变致盲人数逐年增加,而糖尿病视网膜病变机制研究未明,近年许多研究发现外泌体在其中发挥着重要作用,本文对外泌体在糖尿病视网膜病变的发生、发展机制的最新研究进展进行综述。

前列腺素衍生物拉坦前列素(适利达)与噻吗心安治疗青光眼的临床对比研究

目的 :验证前列腺素衍生物拉坦前列素 (适利达 )治疗青光眼的临床疗效和安全性。方法 :采用双盲、随机对照的方法 ,对46例原发性开角型青光眼和高眼压症患者进行为期12周的研究 ,观察其降眼压疗效和不良反应。用0 005 %拉坦前列素每日滴眼1次与0 5 %噻吗心安每日滴眼2次进行随机对比。治疗前 ,治疗后2周、6周及12周随访 ,测量眼压并观察眼局部及全身不良反应。结果 :在入选的46例患者中 (拉坦前列素组22例 ,噻吗心安组24例 ) ,拉坦前列素组平均眼压下降值为 (7 86±2 39)mmHg(下降31 1 % ,P<0 001) ;噻吗心安组为 (6 24±2 58)mmHg(下降24 9 % ,P<0 001)。两组之差1 62mmHg(P<0 01)。拉坦前列素组2例有眼部异物感及充血 ,未发现其他与药物有关的眼部和全身不良反应。结论 :拉坦前列素的降眼压疗效优于噻吗心安 ,且无明显毒、副作用 ,1天仅用1次 ,是理想的抗青光眼药物。

新生乳鼠视网膜细胞诱导骨髓间质干细胞向视网膜神经样细胞分化

目的探讨体外培养的新生乳鼠视网膜细胞对骨髓间质干细胞的诱导分化作用。方法取成年Wistar大鼠股骨全骨髓细胞体外培养,经多次传代后获得高纯度的骨髓间质干细胞。以新生乳鼠视网膜细胞作诱导条件,采用分层共培养的方法诱导骨髓间质干细胞。倒置相差显微镜观察骨髓间质干细胞与新生乳鼠视网膜细胞共培养后形态的改变;免疫组织化学法检测诱导后的细胞巢蛋白(nestin)、神经丝蛋白(NF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微丝微管相关蛋白-2(Map-2)、Thy11、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)等特异性标记物的表达;RT-PCR进一步分析诱导后细胞表达nestin、NF、NSE、Thy11及Ran等mRNA的情况。结果新生乳鼠视网膜细胞作诱导剂,诱导48h后可见部分细胞长出突起并向视网膜神经元特性样的细胞分化,最长可维持10d。结论骨髓间质干细胞在体外培养的新生乳鼠视网膜细胞的诱导作用下可以向视网膜神经元样细胞分化。

组织工程化角膜基质的构建与移植实验

目的探讨以可降解高分子材料聚羟基乙醇(PLGA)为支架体外构建组织工程化角膜基质的可行性.方法将培养的角膜基质细胞接种于具微孔的可降解高分子材料PLGA内,构建成组织工程化细胞-PLGA复合物,将该复合物移植到兔眼角膜基质层间.分别于移植后1、2周,1、2、3、4个月取材,光学显微镜、电镜观察细胞与PLGA材料的结合情况.裂隙灯显微镜和组织切片检查组织工程化角膜基质的透明性、可降解性以及生物反应性.结果角膜基质细胞能与PLGA高分子材料较好地结合,移植到兔眼角膜层间的组织工程化角膜基质7 d后呈半透明,2周见新生血管从角膜缘向植片方向生长,1个月开始材料降解,3～4个月时大部分材料降解,且新生血管减少,但是移植物呈半透明状.结论PLGA虽然具有组织相容性好、无毒、无免疫性和可降解的特性,但不适合作为构建要求具有很好透明性的角膜组织的支架材料.

高三尖杉酯碱作为难治性青光眼滤过手术辅助药的临床研究——中远期临床分析

目的 评估高三尖杉酯碱 (homoharringtonine ,HH)作为青光眼滤过手术辅助药的中远期疗效和并发症。方法 采用前瞻性随机对照方法将 63例 ( 73只眼 )难治性青光眼随机分为HH组 3 2例 ( 3 7只眼 )和对照组 3 1例 ( 3 6只眼 )。所有病例均接受同一标准的小梁切除手术。术毕及术后HH组分次球结膜下注射高三尖杉酯碱 ,每次 0 1ml ( 0 1mg) ,对照组未用药。术后随访观察 5～ 8年 (平均 6 4年 )。采用寿命表分析法统计。结果 至最后一次复查时 ,HH组功能性滤过泡的累计百分率为 73 0 % ,对照组为 44 2 % (P <0 0 1 ) ;HH组手术成功的累计百分率为 75 7% ,对照组为 41 7% (P <0 0 1 )。用药组角膜上皮缺损发生率为 1 8 9% ,对照组为2 7% (P <0 0 5)。HH组薄壁滤过泡的发生率为 41 0 % ,对照组为 2 3 0 % (P <0 0 5)。结论 高三尖杉酯碱是一种有效、相对安全的难治性青光眼滤过手术的辅助药。

高三尖杉酯碱与5-氟尿嘧啶在青光眼滤过性手术应用中的对比研究

本文采用随机、双盲及前瞻性方法,将高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,H.H)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)用于难治性青光眼滤过手术。比较了两者对滤过手术疗效的影响及其毒副作用。其中,H.H组24只眼,5-FU组23只眼。随诊10～20个月(平均18个月),研究结果显示:(1)H.H组功能性滤过泡累计百分率为84.9％,显著高于5-FU组(62.2％)(P<0.05);(2)H.H组的累计手术成功率为85.7％,显著高于5-FU组(61.1％)(P<0.05),(3)H.H组角膜上皮缺损的发生率为20.8％,低于5-FU组(52.2％)(P<0.05)。其他并发症两组间无差别。

青光眼手术后低眼压及其防治

近几年来 ,随着丝裂霉素C在青光眼手术中的广泛使用 ,薄壁滤过泡及其产生的术后低眼压和低眼压性黄斑病变的发生率明显增加 ,是影响青光眼患者术后视力的重要原因。本文就青光眼术后低眼压的概念及其对眼组织结构和功能的危害 ,术后低眼压产生的病理机制 。

体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的 :探讨体外诱导小鼠胚胎干细胞 (ESCs)分化为神经干细胞 (NSCs)的可能性。方法 :ESCs经胚胎体阶段 ,以视黄酸及视网膜m櫣ｌｌｅｒ细胞诱导 ,在NSCs选择性培养基中筛选培养扩增 7d ,观察形态变化 ,采用RT-PCR法检测nestin、glutaminase、Brn - 3基因表达及免疫细胞化学法检测nestin等NSCs特异性标志物 ,并对其扩增及分化能力进行观察。结果 :ESCs经初级诱导 ,NSCs选择性培养基筛选培养 7d后 ,形成大量神经球样结构 ,可扩增传代。绝大部分神经球样结构呈nestin抗原阳性 ,整合BrdU ,表达nestin、glutaminase、Brn - 3基因 ,且可分化为神经元及神经胶质样细胞。结论 :视黄酸及m櫣ｌｌｅｒ细胞诱导的ＥＳＣｓ,经选择性培养基筛选培养可获得NSCs 。

泪道浚通联合硅胶管植入术治疗上泪道阻塞的疗效观察

目的观察泪道浚通联合硅胶管植入术治疗上（全）泪道阻塞的手术疗效。方法浚通泪道后，在“软泪道探针”的辅助下，从泪小点植入硅胶管，留置3—6个月后拔管。结果共治疗患者415例471眼，硅胶管平均留置3．4个月，拔管后平均随访15．1个月，随访率为96．18％。共治愈349眼（77．04％），好转39眼（8．61％），失败65眼（14．35％），总有效率为85．65％。术后出现泪小点撕裂12眼（2．65％），硅胶管部分脱出8眼（1．77％），泪小管息肉3眼（0．66％），无其他并发症。结论泪道浚通联合硅胶管植入术损伤性小、成功率高、并发症少，是治疗上（全）泪道阻塞的良好选择。

高度近视眼睫状沟间距的差异性及其与角膜水平直径的相互关系

背景 水平睫状沟间距（STS）和角膜水平直径是选择可植入接触镜（ICL）型号大小的重要参考指标,尺寸和型号不合适的ICL可引起术后多种并发症.既往已有较多关于正常眼的相关研究,但高度近视眼的相关测量结果鲜有报道. 目的 探讨高度近视眼不同径线STS的差异性,研究不同测量仪器获得的水平STS与角膜水平直径的差异及其相互关系.方法 于2013年4-6月收集中山大学中山眼科中心拟行ICL植入术的高度近视眼患者26例48眼,平均球镜值为（-12.93±3.87）D,平均散光度为（-1.37±1.02）D.应用超声生物显微镜（UBM）测量受检眼45°、90°、135°、180°4个不同径线的STS,使用OrbscanⅡz角膜地形图和IOLMaster测量受检眼的角膜水平直径,不同径线间STS的总体差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验.采用Bland-Altman一致性检验法分析UBM测得的水平方向STS与OrbscanⅡz或IOLMaster测得的角膜水平直径的一致性. 结果 UBM测得的45°、90°、135°、180°径线方向上STS平均值分别为（12.06±0.50）、（12.27±0.50）、（12.03±0.46）和（11.84±0.47） mm.除45°径线与135°径线的STS之间差异无统计学意义（P=0.817）外,45°与90°、45°与180°、90°与135°、90°与180°、135°与180°径线STS之间的差异均有统计学意义（P=0.036、0.026、0.020、0.000、0.045）.OrbscanⅡz测得角膜水平直径为（11.56±0.40） mm,与180°水平径线的STS差异有统计学意义（t=-4.384,P=0.000）,Bland-Altman一致性分析显示两者结果一致性欠佳,95％可信区间（CI）为-0.57 ～ 1.12 mm.IOLMaster测得角膜水平直径为（11.98±0.41）mm,与180°水平径线的STS差异有统计学意义（t=2.368,P=0.000）,Bland-Altman一致性分析显示两者结果一致性欠佳,95％ CI为-0.96～0.67 mm.IOLMaster比ObrscanⅡz测得的角膜水平直径长,且差异有统计学意义（P=0.020）,两种仪器测量Bland-Altman一致性分析显示95％ CI范围虽然较窄,为-0.73 ～-0.13 mm,但是平均差值较大,为-0.43 mm,两者一致性较差.结论 高度近视眼不同径线方向上STS并不完全相等,垂直方向最长,水平方向最短.采用IOLMaster和OrbscanⅡz所测量的角膜水平直径推算UBM测量的STS并不准确.三者在临床上不能相互替代用于计算ICL型号的大小.

LASIK术后质量分数0．5％氯替泼诺滴眼液应用的随机对照研究

背景近视性准分子激光角膜原位磨镶术（LASIK）后需局部使用糖皮质激素滴眼液已成为共识，具有良好抗炎效果且不良反应小的糖皮质激素滴眼液有利于术后角膜上皮的快速修复。目的评估质量分数0．5％氯替泼诺滴眼液在LASIK术后的『临床应用效果。方法采用前瞻性随机对照研究设计。本研究经中山大学中山眼科中心伦理委员会批准，所有患者纳入前均充分了解本研究的内容并签署知情同意书。112例224眼纳入研究，其中共97例194眼完成随访。双眼接受近视性LASIK的患者以随机数字表法分为0．5％氯替泼诺滴眼液点眼组（试验组）54例108眼和对照组43例86眼，两组患者年龄及术前等效球镜度差异均无统计学意义（P〉0．05）。两组的基础治疗方法一致。试验组从术后第1天开始局部点用0．5％氯替泼诺滴眼液，每日4次，共1周，对照组以同样的方法点用妥布霉素地塞米松滴眼液。分别于术后1d、1周、1个月对2个组患者的主观症状进行评分，并行裸眼视力、最佳矫正视力（BCVA）、眼压、中央角膜厚度、角膜荧光素染色检查，同时观查术眼的术中和术后并发症情况，以评价0．5％氯替泼诺滴眼液点眼的安全性。结果在随访过程中，未观察到与药物相关的全身和眼部严重并发症。术后1d、1周和1个月，试验组和对照组主观症状评分（包括眼痛、异物感、视物模糊评分）比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后1周，试验组和对照组校正后的实际眼压分别为（16．27±3．31）mmHg和（17．49±4．48）mmHg，差异有统计学意义（t=-2．113，P=0．036）；术后1个月，试验组和对照组校正后的实际眼压分别为（15．01±3．22）mmHg和（15．304-4．17）mmHg，差异无统计学意义（t=-0．532，P=0．595）。术后1d，试验组发生轻度弥漫性层间角膜炎（DLK）者7眼，对照组为5眼，差异无统计学意义（X^2=0．153，P=0．926），术后1周和1个月两组中均未发现DLK。术后1d、1周和1个月两组间的角膜荧光素染色评分差异均无统计学意义（Z=-0．566，P：0．571；Z=-0．689，P=0．491：z=-1．628，P=0．103）。结论0．5％氯替泼诺滴眼液用于LASIK术后可以有效控制术后炎症反应和DLK，并且减少了传统糖皮质激素升高眼压的风险。

高三尖杉酯碱和青光眼滤过性手术的实验研究

目的:观察中药高三尖杉酯碱对滤过道伤口愈合过程的抑制作用。方法:用20只家兔制成抗青光眼滤过性手术模型(后唇巩膜咬切术),采用随机对照法,每只兔的一眼结膜下注射高三尖杉酯碱,另一眼注射生理盐水。结果:术后十四天,实验眼的眼压下降比对照组明显(P<0.05),滤过泡的存留数也明显多(14/6),病理组织学检查见实验眼滤过道单位面积的成纤维细胞数比对照组少(P<0.01),未见严重和持久的眼部毒副作用。结论:本研究提示高三尖杉酯碱能明显抑制青光眼滤过性手术后滤过道的瘢痕化,促进滤过泡的形成,为今后的临床应用提供了有力的依据。眼科学报 1995;11:76—79。

川芎嗪抑制人视网膜母细胞瘤SO-RB50生长机制的研究

目的:研究川芎嗪对人视网膜母细胞瘤(RB)SO-RB50细胞增殖的影响,并探讨其作用与趋化因子CXCR4表达水平之间的关系。方法:体外培养人SO-RB50细胞,经川芎嗪处理不同时间后,应用MTT法检测SO-RB50细胞的增殖抑制;采用荧光定量逆转录PCR和蛋白免疫印迹法分别从基因和蛋白质水平检测川芎嗪对SO-RB50细胞趋化因子受体CXCR4表达的影响,进而应用流式细胞仪检测SO-RB50细胞的细胞周期分布。结果:MTT结果显示川芎嗪对人SO-RB50细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);细胞周期结果显示川芎嗪处理后的SO-RB50细胞G0/G1期增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);通过荧光定量逆转录PCR及蛋白免疫印迹实验证明,川芎嗪能下调人SO-RB50细胞CXCR4的表达水平。结论:川芎嗪对人SO-RB50细胞的增殖有明显抑制作用,且能下调SO-RB50细胞中与肿瘤发生及生长密切相关的CXCR4表达水平。

piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建

背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景。目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50。结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率最高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著。结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。

川芎嗪对角膜基质细胞中趋化因子受体CXCR4的影响

目的研究川芎嗪对大鼠角膜基质细胞的影响,并探讨其与趋化因子受体CXCR4表达水平之间的关系。方法 8～10周龄SD大鼠,分离培养角膜基质细胞,用细胞免疫荧光法检测CXCR4的表达;大鼠角膜基质细胞经不同浓度川芎嗪处理后,应用MTT法检测其对大鼠角膜基质细胞的增殖影响;采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR,RT-PCR)、Western blot印迹法分别从mRNA和蛋白质水平检测不同浓度川芎嗪对大鼠角膜基质细胞中趋化因子受体CXCR4表达的影响。结果细胞免疫荧光结果显示大鼠角膜基质细胞表达CX-CR4;MTT结果显示川芎嗪对大鼠角膜基质细胞增殖有明显的抑制作用,与予磷酸盐缓冲液处理的对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR检测显示,与对照组比较,川芎嗪处理后大鼠角膜基质细胞中CXCR4 mR-NA表达明显下降(P<0.05);Western blot检测显示,川芎嗪能够下调大鼠角膜基质细胞CXCR4的表达且呈剂量依赖关系。结论川芎嗪对大鼠角膜基质细胞的增殖具有明显抑制作用,其抑制作用与促细胞增殖的趋化因子受体CXCR4的下调密切相关。

施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用

目的 探讨施万细胞条件培养基对大鼠骨髓间质细胞的诱导分化作用。方法 从大鼠骨髓中分离培养间质细胞并传至第 6代 ,诱导前 2 4h加 1μg·L-1碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促分裂 ,再以施万细胞条件培养基作诱导剂 ,观察细胞形态的变化 ,并采用免疫组织化学法对诱导后一周的细胞进行Map 2及NSE、GFAP表达的检测。结果 诱导后 48小时间质细胞在形态上表现为神经元样 ,神经元样细胞呈Map 2及NSE阳性 ,而GFAP显阴性。结论 施万细胞的上清液能诱导骨髓间质细胞分化为神经元样细胞。

川芎嗪抑制人视网膜母细胞瘤WERI-Rb1细胞增殖的机制研究

目的探索川芎嗪(TMP)对WERI-Rb1细胞增殖的影响及TMP下调人WERI-Rb1细胞中趋化因子受体4(CXCR4)的转录的分子机制。方法 (1)TMP及CXCR4的拮抗剂AMD3100药物分别处理WERIRb1细胞,相同浓度PBS及DMSO作为对照,活细胞成像仪观察WERI-Rb1细胞形态及密度变化。(2)WERIRb1细胞经TMP处理后,采用荧光定量逆转录PCR、免疫荧光及蛋白免疫印迹法分别从mRNA和蛋白质水平检测TMP对WERI-Rb1细胞CXCR4及NRF1表达的影响。结果 (1)活细胞成像仪观察发现TMP处理组与AMD3100处理组的细胞状态较正常组差,增殖明显受抑制。(2)荧光定量逆转录PCR结果显示:与对照组比较,TMP处理组WERI-Rb1细胞中CXCR4和NRF1mRNA表达均明显下降(P<0.05);免疫荧光及蛋白免疫印迹实验结果显示,与对照组比较,TMP处理组WERI-Rb1细胞中CXCR4和NRF1蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论TMP对WERI-Rb1细胞的增殖有明显抑制作用,且能下调WERI-Rb1细胞中CXCR4及NRF1的表达水平。

神经营养因子诱导成年鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的研究

目的 探讨神经营养因子诱导成年大鼠骨髓基质细胞成神经细胞的可能性,为神经再生及视神经疾病的治疗提供一种新方法。方法 从大鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞并传至第6代,诱导前24h光用含1μg/L bFGF及 20％FBS的DMEM培养液培养,以促迸细胞分裂,然后用神经生长因子（NGF）和脑源性神经生长因子（BDNF）作诱导剂,观察细胞形态的变化,并采用免疫组织化学法检测诱导后的细胞表达Nestin、NF、NSE、Map-2、GFAP等特异性标志物。结果 诱导后1h,部分细胞的形态已发生改变,5h后大部分细胞不仅在形态上表现为神经元样特征,而且Nestin、NF、NSE及Map-2等特异性抗体呈阳性表达,而GFAP抗体表达呈阴性。结论 神经营养因子能将骨髓基质细胞诱导成神经元样细胞。

光强度与近视的关系及其机制的研究进展

近视的发生发展受到环境因素的影响。户外活动被证实可减少近视的发生,且该保护作用与较高的光强度相关;提高光强度抑制了动物的实验性近视,而视网膜多巴胺系统在其中发挥重要作用,瞳孔收缩和角膜变平可能也参与其中。本文总结了近年来对光强度与近视关系的临床研究、动物实验及其机制方面的研究成果,为进一步探究近视发生发展机制及防治策略提供参考。

诱导多能干细胞向神经视网膜细胞定向分化的研究进展

视网膜退行性病变是造成视觉损害乃至失明的重要原因,由于成年视网膜组织无法自我更新病变中丢失的细胞,导致视网膜退行性病变具有不可逆性。诱导多能干细胞具有自我更新和多向分化的巨大潜力,是建立疾病模型、研究细胞替代疗法的理想供体。本文重点论述诱导多能干细胞的获取及其向神经视网膜细胞定向分化方面的研究进展,为视网膜退行性病变的实验室研究和临床诊治提供一定参考。