组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制

目的 探索组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3的表达和慢性间歇性低氧小鼠肝损伤的影响及其机制。方法 将雄性C57小鼠随机分为正常组(control组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)和SAHA干预组(CIH+SAHA组),将CIH+SAHA组与CIH组小鼠放入低氧仓内进行间歇性低氧处理,每天8 h,持续4周,从第3周起,每日造模前给予实验小鼠腹腔注射SAHA 50 mg/(kg·d),给药持续2周。实验第4周后,测量小鼠体质量,然后处死小鼠,HE染色观察肝组织形态学变化,测定血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,Western blot检测小鼠肝组织中裂解型胱天蛋白酶3(c-Caspase-3)和Caspase-9的蛋白水平,TUNEL试剂盒检测小鼠肝组织细胞凋亡情况。结果 与control组相比,间歇性低氧4周后,CIH组小鼠肝指数显著升高且肝组织损伤明显,肝组织细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和c-Caspase-3的表达水平显著增高,肝组织细胞凋亡比例增加(P<0.05);与CIH组相比,CIH+SAHA组肝指数、ALT、AST水平以及Caspase-9和c-Caspase-3蛋白表达水平、肝组织细胞凋亡指标降低(P<0.05)。结论 SAHA可能通过抑制凋亡相关蛋白Caspase-9/Caspase-3,进而改善慢性间歇性低氧引起的小鼠肝损伤。

凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3在慢性间歇性低氧模型小鼠肝损伤中的作用

目的探索凋亡蛋白Caspase-9/Caspase-3在慢性间歇性低氧模型小鼠肝损伤中的作用。方法将雄性C57小鼠随机分为正常氧对照组(Sham)、慢性间歇性低氧组(CIH),CIH组小鼠放入低氧仓进行间歇性低氧处理(8 h/d,连续28d)。4周后HE染色显微镜下观察肝部病理形态学改变,比较两组小鼠血清指标白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平。用Western blot检测小鼠肝组织中凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的水平。结果与Sham组相比,CIH组肝组织形态学病理改变受损严重,白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平显著升高;凋亡蛋白Caspase3和Caspase9的表达上调。结论慢性间歇性低氧引起肝损伤,机制可能与凋亡蛋白上调相关。

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结论 CIH通过激活NLRP1炎性小体引起肝损伤。

室旁核血管紧张素Ⅱ在慢性间歇性低氧诱发大鼠高血压中的作用及机制

目的研究下丘脑室旁核(paraventricular nucleus,PVN)中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)在慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)诱发高血压大鼠中的作用及机制。方法将♂SD大鼠随机分为对照(Sham)组和慢性间歇性低氧(CIH)组(每日8 h,连续15d)。用无创套尾法测大鼠尾动脉收缩压(SBP)和动脉插管法记录平均动脉压(MAP)、心率(HR),用立体定位仪进行PVN核团定位并微量注射药物,用Western blot测定PVN中AngⅡ水平及AngⅡ1型受体(AT1R)蛋白表达。结果与Sham组相比,CIH组大鼠PVN内AngⅡ水平及AT1R表达明显增加。双侧PVN内微量注射AngⅡ(0.03、0.3、3 nmol),均可剂量依赖性地升高Sham组和CIH组大鼠MAP,且CIH大鼠MAP升高更明显;双侧PVN内微量注射AT1R阻断剂氯沙坦(50 nmol),对Sham大鼠血压没有影响,但可使CIH大鼠血压降低,并抑制AngⅡ升压作用。结论室旁核中AngⅡ及AT1R功能上调在慢性间歇性低氧诱发大鼠高血压中起重要作用。

微课堂在机能实验教学中的应用

微课堂或微课程是借助于多媒体、网络、录像设施及动画视频发展起来的新型课程资源模式,具有方便、快捷、微时代性等特征。微课堂对机能实验教学相当重要,教师通过微课堂教学改革教学模式和提高教学效率,以培养医学生素质、提高学生动手能力、发挥学生的主观能动性和培养医学生主动学习能力,为以后的临床教学提供帮助。

促肾上腺皮质激素释放激素促进慢性间歇性低氧模型小鼠血压升高

目的探索促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)促进慢性间歇性低氧(CIH)模型小鼠血压升高。方法将雄性C57小鼠随机分为正常氧对照组(Sham)、慢性间歇性低氧组(CIH),慢性间歇性低氧组(CIH)小鼠放入低氧仓进行间歇性低氧处理(每天8 h,连续4周)。HE染色观察脑部病理形态学改变,用Western blot测定PVN中CRH水平,用无创套法测小鼠的尾动脉收缩压(SBP)。结果与对照组(Sham)相比,慢性间歇性低氧4周之后,CIH组小鼠脑部神经元出现细胞肿胀,胞浆空泡化;CRH表达水平升高,SBP明显升高。结论慢性间歇性低氧时,下丘脑室旁核CRH神经元被激活,激活的CRH神经元可增强外周交感神经活动,促进血压升高。

基于生物信息学分析UBQLN4对乳腺癌的作用

目的 探讨在癌症基因芯片GEO数据库、Oncomine数据库、生存分析数据库(Kaplan-Meier Plotter)和蛋白-蛋白相互作用数据库(String)平台中,UBQLN4基因在乳腺癌中的高低表达及临床用药意义。方法 分别对GEO、Oncomine、Kaplan-Meier Plotter、String进行UBQLN4乳腺癌基因表达情况进行深度数据挖掘,分别比较不同类型肿瘤VS正常对应组织、不同种类乳腺癌组织VS正常乳腺组织中基因表达是否存在差异,这些差异基因中,是否存在共表达基因。根据UBQLN4基因的高低表达情况绘制生存曲线,进行UBQLN4基因与乳腺癌患者预后关系分析。并分析UBQLN4蛋白共表达网络,推测UBQLN4可能的相互作用蛋白及其生物学功能,了解紫杉醇对UBQLN4在乳腺癌中的敏感性。结果 检索GEO在GSE4107、GSE5563和GSE27447等3个数据集取交集,得到在乳腺癌组织高表达基因UBQLN4。检索Oncomine数据库发现,在乳腺癌中有3个数据集均显示乳腺癌中UBQLN4高表达,UBQLN4 mRNA共表达显示,UBQLN4与SSR2、ARHGEF2、RXFP4、KIAA0907、RIT1、SYT11、GON4L、ROBLD3等63个基因的mRNA存在着共表达情况;在String蛋白互作的数据库中,对UBQLN4蛋白共表达进行分析,结果显示UBQLN4与RPS27、MRPL24、SLC25A44、LAMTOR2、HAX1等蛋白具有相互作用关系。生存分析显示,UBQLN4mRNA在导管乳腺癌及对照乳腺组织中表达中位生存期分别为553d和517d,差异比较无统计学意义(HR=1.132,95%CI:0.598-2.142,p=0.7037)。UBQLN4mRNA在浸润性导管乳腺癌及对照乳腺组织中表达中位生存期分别为1329d和1466d,差异无统计学意义(HR=0.6711,95%CI:0.3061-1.471,p=0.2866)。应用String数据富集UBQLN4互作作用的可能相关蛋白RPS27、SSR2、RAB13、RAB25、SMG5,发现与UBQLN4相互作用的蛋白有5个,分别为作用评分均大于0.904,5个关联蛋白均属于蛋白编码基因,是核糖体结构成份。且SSR2蛋白也被发现了在各种癌症中存在高表达。在乳腺癌和结肠癌中,紫杉醇对UBQLN4较为敏感。结论 UBQLN4mRNA在乳腺癌中高表达,其蛋白与编码蛋白家族可能共同参与了核糖体结构的稳定性,但UBQLN4mRNA的高低表达与乳腺癌患者的预后无关,为考虑紫杉醇治疗乳腺癌提供参考依据。

慢性间歇性低氧对大鼠血压和交感神经活动的影响

目的研究慢性间歇性低氧对大鼠血压和交感神经活动的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为正常对照组和慢性间歇性低氧模型组(CIH),每组20只,分别采用无创套尾法监测大鼠尾动脉收缩压(SBP)随间歇性低氧时间的变化,在体记录大鼠的平均动脉压(MAP)和肾交感神经活动(RSNA),以及采用ELISA检测大鼠血浆中去甲肾上腺素(NE)的水平。结果间歇性低氧15 d后,CIH组SBP、MAP和RSNA较对照组明显升高;CIH组大鼠血浆中NE的含量较对照组明显升高(均P<0.05)。结论慢性间歇性低氧可引起大鼠血压升高和交感神经活动过度增强。

室旁核中硫化氢对大鼠血压和交感神经放电的影响

目的研究室旁核(PVN)中硫化氢(H2S)对大鼠血压和交感神经活动的影响。方法将♂SD大鼠用立体定位仪进行PVN核团定位并微量注射药物,并在体记录肾交感神经活动(RSNA)、平均动脉压(MAP)。结果双侧PVN内微量注射H2S供体NaHS(0.1、1.0、5.0、10.0、20.0 nmol),剂量依赖性地降低MAP和RSNA;PVN内微量注射H2S前体L-Cysteine(1nmol)增加内源性H2S的含量,同样也使MAP和RSNA明显降低;微量注射CBS抑制剂AOA(10nmol)抑制内源性H2S的生成,引起MAP、RSNA明显增加,而CBS激动剂SAM(10 nmol)则对MAP和RSNA无明显影响。结论 PVN中H2S参与了血压和交感神经活动的调控。

基于“互联网+”虚实结合的基础医学实验技能竞赛评价系统的建立、应用及体会

医学是一门实践性科学,基础医学实验技能竞赛是培养医学生实践能力的重要手段[1],旨在强调基础医学在医学教育中的重要地位,推动基础医学实验教学改革,全面提升医学生综合素质和人才培养质量。我校已进行了七届“安徽医科大学大学生实验技能大赛”,极大地激发了学生的学习主动性,加强了学生的科研协作精神和团队意识,提高了学生观察、分析和解决问题的能力,为优秀人材脱颖而出创造了有利条件。

L-半胱氨酸对慢性间歇性低氧大鼠血压和交感神经活动的影响

目的探讨L-半胱氨酸(L-cys)增加内源性H_(2)S对间歇性低氧引起的大鼠高血压的影响及机制。方法将雄性SD大鼠随机分为正常氧(Control)组、慢性间歇性低氧(CIH)组、正常氧L-cys干预(Control+L-cys)组和慢性间歇性低氧L-cys干预(CIH+L-cys)组。CIH组和CIH+L-cys组大鼠放入低氧仓进行间歇性低氧处理,每天8 h,连续15 d。L-cys干预组每天给予L-cys(10 mg/kg)灌胃。用无创套尾法测大鼠的尾动脉收缩压(SBP),PowerLab数据采集分析处理系统在体记录大鼠肾交感神经活动(RSNA),ELISA法测量血浆中去甲肾上腺素(NE)、H_(2)S含量和CSE、CBS活性。结果与Control组相比,间歇性低氧15 d后,CIH组大鼠SBP、RSNA,血浆中NE水平较升高,而血浆中H_(2)S水平降低;应用L-cys可增加CIH大鼠血浆中H_(2)S水平,显著抑制间歇性低氧引起的血压升高和交感神经活动过度激活。结论L-cys可能通过增加内源性H_(2)S改善间歇性低氧引起的高血压。

SOD拟似剂Tempol改善间歇性低氧小鼠主动脉舒张功能

目的探索超氧化物歧化酶(SOD)拟似剂四甲基哌啶(Tempol)对间歇性低氧小鼠血管舒张功能的影响。方法将雄性C57小鼠随机分为正常氧(Control)组、间歇性低氧(IH)组、间歇性低氧Tempol干预(IH+Tempol)组。IH组和IH+Tempol组小鼠放入低氧仓进行间歇性低氧处理,每天8 h,连续4周。IH+Tempol组在间歇性低氧处理最后一周每天给予Tempol(100 mg/kg)灌胃。离体血管张力测定系统检测血管的功能,荧光探测针-二氢乙啶(DHE)染色法检测血管活性氧(ROS)含量,ELISA法测量一氧化氮(NO)浓度。结果与Control组相比,间歇性低氧4周后,IH组小鼠胸主动脉对乙酰胆碱(ACh)引起的内皮依赖性舒张功能下降、心肌肥大,胸主动脉中ROS增加而NO水平降低;应用Tempol可使IH小鼠胸主动脉中ROS水平降低、NO浓度增加,改善间歇性低氧引起的内皮依赖性舒张功能受损和心肌肥大。结论Tempol可能通过降低ROS,增加NO的生物利用度,改善间歇性低氧引起的心血管功能障碍。

“三段式”机能学实验体系在整合课程中的应用

整合课程中的机能学实验以动物实验为主,不能满足本科医学教育标准对临床医学专业学生培养的基本要求。医学实验教学要不断更新教学理念,改变教学模式,改善实验教学软硬件。为了提高人才培养质量,采用人体机能学实验、动物机能学实验和虚拟仿真病例构建“三段式”机能学实验新体系,分别以血压调节和呼吸运动为主线进行内容上纵向的联系,真正实现以系统为中心、生理-病理生理-疾病的有机整合,并应用于心血管系统和呼吸系统的实验教学中,通过虚实互动,实现了基础与临床的结合,提高学生的实践能力和创新能力,有利于自主学习能力的培养,为进一步提升机能学实验教学在整合课程中的教学水平,培养高素质医学人才奠定基础。