槲皮素通过激活PTEN抑制PI3K/AKT及JNK信号通路诱导人乳腺癌细胞凋亡

目的研究槲皮素对乳腺癌MCF-7细胞增殖活性以及对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PTEN/PI3K/AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测(0、20、40、60、80、100)μmol/L槲皮素对MCF-7细胞增殖的影响;Hochesst33342染色观察细胞核数量以及核型的变化,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光细胞化学染色检测PTEN和磷酸化的JNK(p-JNK)表达,Western blot法检测PTEN、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、p-JNK、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白水平;加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理后,再次采用以上方法检测对细胞凋亡和相关蛋白表达的影响。结果随着槲皮素浓度的升高,细胞活性下降,细胞生长受到抑制,且具有浓度依赖性;细胞核浓缩增强、细胞凋亡增加;高浓度槲皮素显著增强PTEN蛋白表达和分布,降低p-PI3K、p-AKT蛋白水平,并抑制p-JNK蛋白的核表达。加入PI3K/AKT信号抑制剂LY294002处理细胞后,LY294002和槲皮素联合作用组细胞凋亡率增加,PTEN蛋白的表达也增强,槲皮素能明显增强LY294002对p-PI3K/AKT/PTEN蛋白的作用。结论槲皮素诱导MCF-7细胞凋亡,可能与激活PTEN的表达,抑制PI3K/AKT和JNK信号通路有关。

PTEN慢病毒过表达肝癌稳转株的构建及对Huh-7肿瘤活性的影响

目的构建过表达PTEN的人肝癌稳转细胞株,观察PTEN对肝癌细胞生物学行为的影响并探讨潜在机制。方法将编码PTEN的基因编码片段克隆到慢病毒载体pLV-puro-GFP,利用293T细胞得到慢病毒原液感染肝癌细胞Huh-7,嘌呤霉素筛选获得稳定过表达PTEN的Huh-7细胞。用RT-PCR、免疫荧光和Western blot法检测细胞内基因和蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移活性;探讨AKT抑制剂MK2206对稳转株的药理作用。结果成功构建了PTEN过表达的肝癌稳转细胞株(Huh-7/hPTEN)。与对照株Huh-7/EGFP相比,Huh-7/hPTEN细胞PTEN的蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),P53蛋白表达升高,Slug和AR的mRNA表达水平下降(P<0.01),HNF4α的mRNA表达升高(P<0.01),耐药蛋白ABCB1和ABCC2的表达下降,E-cadherin蛋白和mRNA表达升高(P<0.01),Vimentin的蛋白和mRNA表达下降(P<0.01),细胞迁移性能减少;Huh-7/hPTEN细胞对AKT抑制剂MK2206的利用率升高,并影响相关蛋白的表达。结论成功构建PTEN过表达肝癌稳转株,PTEN过表达可改善肝癌Huh-7细胞肿瘤生物学效应,致癌蛋白表达下降,迁移减弱。

PTEN协同槲皮素抗胃癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化进程的机制研究

探讨槲皮素(quercetin,Que)与人第10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)PTEN在胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的机制研究。通过单独使用不同浓度槲皮素或PTEN转染处理胃癌SGC-7901细胞,分别采用CCK-8法、流式细胞凋亡法及Western blot法检测两者单独使用对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达的影响。再通过两者联合处理胃癌细胞,采用RT-PCR法检测基因表达,Western blot法检测蛋白表达,细胞划痕和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,免疫荧光法检测EMT靶蛋白的表达。槲皮素单独处理细胞时,随着药物浓度的增加,剂量依赖地减弱SGC-7901细胞活性(P<0.01),诱导细胞凋亡,并促进PTEN蛋白表达(P<0.01),改变抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达(P<0.01),反转E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及转录因子(Slug)的表达(P<0.01)。PTEN单独转染细胞增加E-cadherin和Bax的基因和蛋白表达(P<0.05),降低Bcl-2、Vimentin以及转录因子Slug的表达(P<0.01),抑制细胞迁移;两者联合作用后,PTEN增强槲皮素对SGC-7901细胞抗癌能力,进一步抑制肿瘤迁移。PTEN增强槲皮素对胃癌细胞SGC-7901的抗癌作用,这种作用可能是通过共同抑制细胞核转录因子Slug实现的。