基于表面增强拉曼光谱的牛肝菌主成分分析及快速鉴定

2021年《中国疾病预防控制中心周报》指出蘑菇中毒是我国最严重的食品安全问题之一,2021年发生蘑菇中毒事件327次,涉及923例患者,其中20例死亡,总死亡率为2.17%,事件中共鉴定出毒蘑菇74种。牛肝菌由于味道鲜美,是人们最喜爱的菌类之一。由于烹调不当或是混入有毒牛肝菌,就会发生牛肝菌中毒事件。如何快速得出牛肝菌的主成分并进行鉴定,成为了一个迫切需要解决的问题。该研究从楚雄市鸿福农贸市场上购买的10个新鲜牛肝菌样品,使用菌盖进行徒手切片,用微波法制备的纳米银溶胶制成银胶装片,置于DXR显微拉曼光谱仪的10倍物镜下,获得10个样品的表面增强拉曼光谱(SERS)。通过对SERS的分析发现10个样品中,样品7、8、10主成分相同,样品6、9主成分相同,其余样品主成分各不相同。以样品1为例,主成分有L-苯基丙氨酸(1583 cm^(-1)环内C—C伸缩振动、1199 cm^(-1)NH 2摇摆振动)、L-组氨酸(1572 cm^(-1)C C伸缩振动、COO-不对称伸缩、1229 cm^(-1)面内环变形振动)、异亮氨酸(1342 cm^(-1)C—H、N—H变形振动、486 cm^(-1)COOH摇摆振动、353 cm^(-1)骨架振动)、L-天冬氨酸(1136 cm^(-1)C—N伸缩振动)、甘氨酸(1386 cm^(-1)COO-变形振动、889 cm^(-1)C—C伸缩振动)、蛋氨酸(681 cm^(-1)C—S反对称伸缩振动)、吡喃糖化幌物(973 cm^(-1)对称环振动)。采用光谱软件OMNIC Specta的建库功能随机挑选10个样品的一条谱线进库,建库后可快速进行光谱匹配度的检索,通过匹配度的高低鉴定待测样品。在10个样品中,除2、10号样品的匹配度小于60%外,其余样品的匹配度都大于60%。样品7、8的匹配度接近且有交叉,说明样品7、8是同一品种,而样品6、9的匹配度接近而交叉项少,说明这两个样品是同一品种或相近品种。DNA检测结果表明样品7、8、10同为白牛肝菌,而样品6、9同为薄瓤假美柄牛肝菌。该实验为牛肝菌的主要成分检测和快速鉴定提供了一种简单可靠的方法。同时,该方法对野生蘑菇的物种鉴定具有很大的应用潜力,在野生菌中毒病例中,迅速确定毒蘑菇种类,从而为抢救病人赢得时间具有重要的意义。为此首次对野生蘑菇子实体进行SERS研究。

解淀粉欧文氏菌噬菌体Kuerle的分离、基因组测定及其裂解功能分析

【背景】解淀粉欧文氏菌(Erwiniaamylovora)是仁果类果树火疫病的病原体,对全球苹果和梨的生产构成严重威胁。随着抗生素耐药菌株的出现,火疫病的防治面临巨大的挑战。【目的】分离一种新的裂解解淀粉欧文氏菌的噬菌体,并分析该噬菌体裂解相关基因的功能,为火疫病的防治提供新的选择。【方法】以解淀粉欧文氏菌Ea102为宿主菌,采用双层平板法从流行火疫病的果园土壤中分离噬菌体。通过噬菌斑和透射电镜观察其形态。用PacBio测序技术测定噬菌体基因组,SPAdes组装序列,RAST注释基因组。通过大肠杆菌原核表达系统分析噬菌体Kuerle的裂解机制。【结果】分离纯化出一株裂解解淀粉欧文氏菌的噬菌体,命名为Kuerle。Kuerle由二十面体衣壳的头部和短尾组成,潜伏期约为50 min,裂解量约为240 pfu/cell。噬菌体基因组全长75599 bp,GC含量48.0%,末端有393 bp的重复序列,未发现与溶原调控相关的基因。共预测到85个开放阅读框(open reading frame,ORF),其中33个已知功能蛋白中包含一个由3550 aa组成的巨大病毒颗粒相关的RNA聚合酶(virion-associated RNA polymerase,vRNAP),该vRNAP是Schitoviridae科噬菌体的主要特征之一。病毒粒子和基因结构表明噬菌体Kuerle属于有尾噬菌体类的Schitoviridae科病毒。聚集在DNA晚期表达区的3个裂解相关基因holin、endolysin和spanin组成了“裂解盒”。在大肠杆菌中Kuerle-holin的表达会抑制细胞的生长,而Kuerle-endolysin的表达可裂解细胞。二者共表达时Kuerle-holin会加速Kuerle-endolysin引起的细胞裂解。用叠氮化钠抑制细菌的一般分泌系统(Sec)或Kuerle-endolysin N端信号序列的缺失均会导致endolysin裂解功能丧失。上述结果表明噬菌体Kuerle具有pinholin-SAR endolysin裂解系统。Kuerle-holin(pinholin)使细胞质膜去极化以激活分泌的Kuerle-endolysin(SAR endolysin)降解肽聚糖层。【结论】Kuerle是一株烈性噬菌体并且Kuerle-endolysin抑菌效果显著,为后续火疫病生防试剂的制备提供了理论依据和研究材料。

36例致幻牛肝菌中毒临床特征分析

目的分析致幻牛肝菌中毒患者的流行病学特征、临床表现及救治情况,为临床诊断和治疗提供参考。方法回顾性分析我院2015-2022年36例致幻牛肝菌中毒患者的流行病学资料、临床表现、实验室检查、治疗及转归,并对患者进食的蘑菇进行物种鉴定。结果36例中,32例中毒时间在6-9月;24例中毒地点在城镇,12例在农村;23例患者进食多餐后中毒。35例患者进食蘑菇经图谱辨认为兰茂牛肝菌,7例经基因序列比对明确鉴定为兰茂牛肝菌。中毒潜伏期1~48 h,中位数(四分位数)为19.0(12.0,24.8)h。36例均有幻视症状,21例兴奋躁动、易激惹,29例意识障碍,21例运动障碍,19例语言障碍,18例伴有胃肠道症状。实验室检查16例患者白细胞计数、中性粒细胞百分比升高,淋巴细胞百分比降低。经液体复苏结合镇静、抗精神病药物治疗,所有患者治愈出院,其中33例7 d内出院。结论致幻型牛肝菌中毒主要发生在夏秋季,中毒蘑菇以兰茂牛肝菌为主,多餐食用中毒发生率高,典型症状为幻视,通过积极对症支持治疗,患者均能够痊愈。

白毒伞蕈中毒23例临床分析

目的:探讨白毒伞蕈中毒的临床特征及其治疗方法。方法:对我科2004年6月至8月间集中收治的23例白毒伞中毒患者的临床表现、实验室检查、对治疗的反应进行回顾性分析。结果:全部患者首发症状均为胃肠道症状。及时洗胃的3例患者转氨酶正常,余未洗胃的20例患者均有严重转氨酶升高,升高高峰时间为4～6d。3例凝血酶原时间延长,1例不凝。入院后经积极的血液灌流、解毒、保肝、抗炎、支持治疗,12例治愈,11例死亡,死亡率47%。结论:白毒伞中毒以损伤肝脏为主,早期检查肝功能,及时血液净化和综合治疗是避免发生致死性肝损害的唯一途径。

人胸膜间皮瘤与结核型胸膜炎的傅里叶红外光谱分析（英文）

研究以上皮型胸膜间皮瘤,纤维型胸膜间皮瘤,结核型胸膜炎与正常胸膜组织为材料,通过傅里叶变换红外光谱分析组织中生物大分子的结构及含量的改变。研究发现,四种胸膜组织的傅里叶红外光谱较为相似,但存在明显区别,四种胸膜组织红外光谱数据方差差异极显著(sig.<0.001),说明胸膜间皮瘤中生物大分子的含量及结构发生了明显变化,主要包括:(1)胸膜间皮瘤蛋白质酰胺Ⅰ带及酰胺Ⅱ带,核酸1 232cm-1峰强,脂类物质2 922cm-1峰强均显著高于正常人胸膜组织,与正常胸膜组织存在显著区别;纤维型胸膜间皮瘤中,蛋白质酰胺Ⅰ带及酰胺Ⅱ带峰强,与核酸密切相关的1 078cm-1峰强,以及与脂类物质相关的2 922和2 854cm-1峰强均显著高于上皮型胸膜间皮瘤(p<0.05);结核型胸膜炎蛋白质酰胺Ⅰ带及酰胺Ⅱ、核酸1 232和1 078cm-1峰强略有增加,但与正常胸膜组织差异不显著(p>0.05),与脂类物质含量有关2 922cm-1峰强、2 854cm-1峰强,极显著地高于正常胸膜组织(p<0.01),显著高于胸膜间皮瘤(p<0.05)。(2)蛋白质、核酸、脂类物质的相对峰强I1 641/I2 922,I1 641/I1 232,I1 232/I1 078,I1 078/I1 546,I1 078/I2 854,I2 922/I1 232,I1 458/I1 400能有效放大四类胸膜组织间的差异,其效果优于峰强效果,可作为胸膜间皮瘤诊断的优化指标。(3)上皮型胸膜间皮瘤中指示核酸分子中磷酸二酯键的C—C/C—O的1 078cm-1峰强以及指示脂类物质的2 854cm-1峰强显著低于纤维型胸膜间皮瘤和正常胸膜组织(p<0.05),表明上皮型胸膜间皮瘤中磷酸二酯键断裂程度较高,DNA受损严重,膜脂过氧化降解明显。说明上皮型胸膜间皮瘤恶化程度高于纤维型胸膜间皮瘤。(4)胸膜间皮瘤蛋白质酰胺Ⅰ带、Ⅱ带谱带、核酸1 232cm-1峰、脂类物质1 458cm-1处CH2振动及1 400cm-1处CH3振动红移,说明蛋白质分子间的氢键受到破坏,核酸分子的氢键结合力减弱,核酸分子的双链结构受到一定程度的破坏,肿瘤组织中膜脂的亚甲基链趋向无序。(5)傅里叶红外光谱能有效区分纤维型胸膜间皮瘤、上皮型胸膜间皮瘤、结核型胸膜炎、正常胸膜组织,为胸膜间皮瘤与结核型胸膜炎的早期、快速诊断提供了可靠的数据。

致命鹅膏菌中毒尸检1例报道

近年来国内外关于鹅膏菌中毒的报道屡见不鲜,研究众多,但缺乏对致命鹅膏菌中毒组织病理学的研究。本文主要对1例致命鹅膏菌中毒死亡病例进行病理分析及相关文献回顾,帮助了解致命鹅膏菌中毒所致肝、肾、神经及其他器官损害的临床病理特征,为开展积极的临床诊疗提供相关依据。1材料与方法1.1临床资料患儿女性,3岁6个月。因进食野生菌后频繁呕吐2天,抽搐伴意识障碍18 h急诊入院。患儿既往无特殊病史,此次进食野生菌量约50 g,进食11 h后出现恶心、呕吐,21 h后出现腹泻,32 h后出现高热、抽搐伴意识障碍。入院查体:患儿昏迷,呼之不应,颜面浮肿,四肢时有抽搐。

大姚县恶性胸膜间皮瘤20例临床分析

分析大姚县发现的２０例恶性胸膜间皮瘤。全部病例均有直接或间接青石棉接触史。病变在右侧胸膜者１４例，左侧６例，１例合并腹膜间皮瘤。主要临床表现为胸痛、咳嗽、呼吸困难、胸腔积液、发热及远处转移。Ｘ线表现以弥散性胸膜增厚、散在结节状增厚及波浪状增厚，部分呈驼峰样改变为特点。胸水细胞学阳性率３７．５％，针刺胸膜活检阳性率８０％。本病预后差，经随访，２０例均在发病后２年内死亡，自然病程１２．７月。

PSORA:一种基于高通量测序的T-DNA插入位点分析方法

【目的】建立一种批量分析T-DNA插入位点的简单、有效的方法。【方法】提供一种基于高通量测序技术的T-DNA插入位点的分析方法,将其命名为PSORA:Parallel sequencing of one round amplicons。首先对一轮交错式热不对称PCR(TAIL-PCR)的扩增产物进行高通量测序,随后通过生物信息学分析T-DNA插入位点,该方法降低了TAIL-PCR过程中对特异性扩增的要求。PSORA中使用的引物一侧为简并引物,另一侧为T-DNA特异性引物。在特异性引物的5’端设计6 nt的样品标签(Barcode),用于标记不同的转化事件。所使用的5个转基因烟草株系(L1、L6、L9、L15和L19)由农杆菌介导质粒pBI121转化获得。此外,通过标准PCR对PSORA的结果进行验证。【结果】利用PSORA对5个转基因株系的T-DNA插入位点进行分析,结果显示,L6含2个插入位点(NW_015801367的36316 bp处和NW_015950898的42202 bp处),L9、L15和L19各含1个插入位点(L9的插入位点为NW_015943682的235969 bp处;L15的插入位点为NW_015802951的60529 bp处;L19的插入位点为NW_015863435的12188 bp处),L1的插入位点未能成功获取。对生物信息学分析结果进行PCR验证,含不同插入位点的转基因株系之间可互为阴性对照,野生型(WT)作为空白对照,结果表明,在各转基因株系中均得到与预期一致的特异性扩增,该结果验证了PSORA的有效性。【结论】PSORA是一种分析T-DNA插入位点的有效方法,可以同时分析多个插入事件,相对于传统的染色体步移方法更简便、快速。

意大利蝗卵发育过程中血蓝蛋白基因表达分析

【目的】意大利蝗Calliptamus italicus是新疆草原的主要优势危害种,以卵在土壤中越冬。呼吸代谢可反映蝗卵的生理状态,呼吸蛋白对于呼吸系统不完善的蝗卵尤为重要。本研究旨在明确意大利蝗卵发育过程中血蓝蛋白基因的表达情况。【方法】采用实时荧光定量PCR方法检测不同发育阶段的蝗卵以及1龄蝗蝻的血蓝蛋白2个亚基基因Hc1和Hc2的表达量。【结果】根据解剖形态观察,将意大利蝗越冬卵的整个发育过程分为10个阶段,包括9个卵发育阶段(C-Ⅰ-C-Ⅹ)和1龄蝗蝻阶段(C-Ⅹ)。Hc1和Hc2在越冬蝗卵各发育阶段以及1龄蝗蝻中均有表达。其中,在蝗卵早期发育阶段(C-Ⅰ,C-Ⅱ和C-Ⅲ),Hc1表达量逐渐增加,C-Ⅲ阶段表达量显著高于C-Ⅰ和C-Ⅱ阶段;滞育阶段(C-Ⅳ,C-Ⅴ和C-Ⅵ),胚胎发育停滞,Hc1表达量较C-Ⅲ,C-Ⅶ和C-Ⅷ阶段低;滞育后发育阶段(C-Ⅶ和C-Ⅷ),蝗卵解除滞育,快速发育,Hc1表达量较早期发育阶段和滞育阶段高,其中,C-Ⅷ阶段Hc1表达量最高(212.3156±10.5470),显著高于其他所有阶段;1龄蝗蝻(C-Ⅹ)的Hc1表达量最低,为0.4017±0.1010。Hc2表达量在C-Ⅴ阶段最高(679.7511±54.5719),显著高于其他所有阶段;除C-Ⅴ阶段外,其他各阶段之间Hc2表达量差异均不显著。Hc1在蝗卵滞育后阶段高表达,而Hc2在蝗卵滞育阶段高表达。【结论】血蓝蛋白亚基基因Hc1和Hc2在整个意大利蝗卵发育过程均有表达,且具有阶段特异性。Hc1与Hc2协同作用为蝗卵发育供氧,其中,Hc1主要负责蝗卵滞育后发育期间的氧气运载,而Hc2主要维持滞育期间的氧气运载,且载氧效率较低。研究结果可为进一步探讨意大利蝗卵的抗逆机制提供科学依据。

中医治疗闭经规律探究

通过查阅古今文献并结合自身临证经验,探讨闭经的病机、治法,总结闭经的治疗规律。通过探究发现,闭经一症之病机无非虚、实二途,虚责之肝血、肾精、肝脾肾气之不足,实责之痰湿、瘀血、气郁阻遏,无论何种病机,总致胞宫经血不能按时蓄溢,从而使得闭经一症得以发生。在治疗闭经一症时,必须遵循中医学辨证论治的基本原则,根据患者不同的病机与证候,采用有针对性的治疗方法与方药,虚则补精、血、气,实则泻痰、瘀、郁,使患者的正气得培,邪气得去,经水能正常蓄溢,则闭经一症自当治愈。

虫螨腈中毒4例分析并文献回顾

目的探讨急性虫螨腈中毒的毒性机制、临床特点、治疗及预后,为此类患者的救治提供临床参考。方法回顾分析2020年6月至12月楚雄彝族自治州人民医院收治4例虫螨腈中毒患者的临床资料,同时检索万方数据库、维普数据库、中国知网(CNKI)、美国国立医学图书馆(Pubmed)数据库、Medline数据库2000年1月至2020年12月关于虫螨腈中毒的相关文献,合并资料并进行分析。结果文献中查找14例虫螨腈中毒患者,结合本院4例患者,共18例纳入分析。18例中毒患者中,男女比例为13︰5;中毒方式为1例腹腔注射,1例皮肤接触,16例口服中毒;中毒潜伏期0~14 d。其中1例仅报道3 d好转出院,无后期随访报道,因此临床症状方面纳入17例患者进行分析,17例(100.0%)患者均出现高热、出汗,15例(88.2%)出现意识混乱或昏迷,4例(23.5%)出现视力障碍,3例(17.6%)出现肌肉强直、牙关紧闭,3例(17.6%)出现下肢无力、瘫痪,3例(17.6%)出现排尿困难,3例(17.6%)出现腹痛,1例(5.9%)出现皮疹。实验室检查方面,13例(76.5%)肌酸激酶增高,4例(23.5%)丙氨酸转氨酶增高,2例(11.8%)肌酐增高,2例(11.8%)淀粉酶增高,1例(5.9%)高度房室传导阻滞、窦性停搏、休克。18例患者经清除消化道残余毒物、补液、碱化尿液、血液净化等治疗,1例仅报道3 d好转出院,1例19 d好转出院;16例患者死亡,死亡距接触毒物时间4~20 d。结论虫螨腈中毒致死率极高,主要机制为解耦联氧化磷酸化,靶器官为能量需求较高的心脏、肌肉、视网膜和中枢神经系统,无特效解毒药。治疗方法包括胃肠道毒物清除及对症支持治疗,血液净化的有效性尚待研究。

从少阳经论治慢性荨麻疹

通过查阅古今文献并结合自身临证经验,探讨从少阳论治慢性荨麻疹的理论依据、具体辨治方法。从慢性荨麻疹一症的发病形式与规律、病机过程等来看,慢性荨麻疹一症的发生与少阳经的关系尤为密切。治疗慢性荨麻疹应当从少阳经立论,以具有和解少阳,透邪解表作用的小柴胡汤进行治疗,方能收到较好的疗效。

纳洛酮联合醒脑静治疗镇静安眠药物中毒临床疗效观察

目的纳洛酮联合醒脑静治疗急性镇静安眠药物中毒的复苏疗效观察。方法对留观治疗的急性镇静安眠药物中毒的125例患者随机分成两组。单用纳洛酮组和纳洛酮与醒脑静联合治疗组两组。主要观察指标:服药量,服药到开始治疗时间,开始治疗时间到神志、肢体自主运动恢复正常时间。结果自治疗到神志恢复正常时间明显缩短。醒脑静加纳洛酮组(2.5±0.8)h,纳洛酮组(4.2±2.1)h,两组差异有显著性(P<0.01)。结论纳洛酮加醒脑静治疗组能有效快速解除镇静安眠药物的中毒症状、体征,使患者生命体征迅速得以平稳至正常,意识障碍快速恢复正常,是抢救镇静安眠药物的较佳药物。

治疗类风湿关节炎傣药概述

本文对傣药治疗类风湿关节炎的理论基础、单味药及复方治疗类风湿关节炎研究现况进行梳理,认为傣药治疗类风湿关节炎理论丰富,临床疗效可靠,可成为防治类风湿关节炎重要的卫生资源。目前,傣药治疗类风湿关节炎的物质基础相关研究已逐步展开,在化学成分与药理药效方面取得一些成果,初步明确了其药理机制,但在研究深度与广度上尚待加强,今后研究可从多味傣药协同治疗的机理机制方面开展。

浅谈如何培养初中生良好语文学习的习惯

语文是一种工具,学好语文学科又是学好其他学科的关键。语文的学习必须结合生活,因为语文的外延和生活的外延是相等的,所以语文需要终身学习。要做到这一点,必须养成良好的语文学习习惯,这种习惯是学好语文的基础。所以加强对学生语文学习习惯的培养,是我们初中语文教师教育教学的重要内容之一。

农场活动对小学生习作能力培养的实践研究

为了提高学生的习作能力,我利用学校的“开心农场”开展实践活动.通过带领学生有序观察农场植 物,参与栽种、采摘、销售等活动,激发兴趣,积累习作素材.并教给观察、习作的方法,利用精彩课文作平台, 读、仿、写相结合.让学生由仿写句到仿写段、篇,一步一步,由扶到放,逐步学会独立创作,提高习作能力.