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猪带绦虫乳酸脱氢酶基因的序列分析、克隆表达和免疫学分析
被引量:
10
1
作者
杜武英
黄江
+4 位作者
胡旭初
余新柄
徐劲
廖兴江
戴佳琳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期246-251,共6页
目的利用生物信息学方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中识别乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A),分析和预测其编码蛋白的结构和功能,并对其进行克隆表达和免疫学特性研究。方法利用NCBI和ExPASy中有关基因、蛋白的序列和结构信息分...
目的利用生物信息学方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中识别乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A),分析和预测其编码蛋白的结构和功能,并对其进行克隆表达和免疫学特性研究。方法利用NCBI和ExPASy中有关基因、蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其它生物信息学分析软件包,从猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别乳酸脱氢酶A(TsLDH-A)的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白的结构与功能;并将TsLDH-A克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中诱导表达,表达产物经纯化后用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果该基因全长1 332bp,编码331个氨基酸。其氨基酸序列与其它物种LDH-A氨基酸序列一致性可达54%,具有乳酸脱氢酶保守结构域。其编码的蛋白理论分子量为3 5461.1Da,有3个跨膜区和多个磷酸化位点,蛋白的理化性质较稳定。预测有4个主要的B细胞抗原表位,L-乳酸脱氢酶活化位点之一的His192包含于表位190-199aa中。酶催化位点的3个关键氨基酸在空间结构上相互靠近。PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-TsLDH-A构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白能被TsLDH-A重组蛋白免疫的SD大鼠血清、感染了猪带绦虫的病人血清及猪血清识别,表明其具有较好的免疫原性和免疫反应性。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了TsLDH-A的全长序列并预测得到其编码蛋白的结构与功能方面的信息,该基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达。
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关键词
猪带绦虫
乳酸脱氢酶A
序列分析
克隆表达
免疫学特性
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职称材料
胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPII抗原的应用研究
被引量:
3
2
作者
吕刚
谢协驹
+3 位作者
余新柄
陆家海
林琼莲
莫燕娜
《海南医学院学报》
CAS
2000年第2期72-74,共3页
目的 :建立一种简易快速 ,适于基层或流行病学调查的自测式胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测恶性疟原虫中 H RPII抗原 ,判定是否现症感染。方法 :用 GICA测试条检测全血及滤纸血样中的 H RPII抗原。结果 :40例恶性疟全血及滤纸血 H RPI...
目的 :建立一种简易快速 ,适于基层或流行病学调查的自测式胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测恶性疟原虫中 H RPII抗原 ,判定是否现症感染。方法 :用 GICA测试条检测全血及滤纸血样中的 H RPII抗原。结果 :40例恶性疟全血及滤纸血 H RPII抗原阳性检出率均为 1 0 0 ,与镜检结果相符合 ;2 5例间日疟均为阴性。结论 :GICA检测血中恶性疟原虫 H RPII抗原特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,滤纸血的应用使样本的采集、保存和运输更为便利 ,适合大规模流行病学调查和基层使用 ,有广泛应用价值。
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关键词
恶性疟原虫
HRPⅡ抗原
胶体金层析法
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职称材料
题名
猪带绦虫乳酸脱氢酶基因的序列分析、克隆表达和免疫学分析
被引量:
10
1
作者
杜武英
黄江
胡旭初
余新柄
徐劲
廖兴江
戴佳琳
机构
贵阳医学院多媒体形态学实验室
中山大学中山医学院寄生虫学教研室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期246-251,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30760227)
贵州省科技攻关项目(黔科合NY字2008-3060)
2009年贵阳市应用技术开发资金(黔科农合同字3-005)联合资助
文摘
目的利用生物信息学方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中识别乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A),分析和预测其编码蛋白的结构和功能,并对其进行克隆表达和免疫学特性研究。方法利用NCBI和ExPASy中有关基因、蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其它生物信息学分析软件包,从猪带绦虫成虫全长cDNA质粒文库中识别乳酸脱氢酶A(TsLDH-A)的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白的结构与功能;并将TsLDH-A克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠杆菌BL-21/DE3中诱导表达,表达产物经纯化后用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果该基因全长1 332bp,编码331个氨基酸。其氨基酸序列与其它物种LDH-A氨基酸序列一致性可达54%,具有乳酸脱氢酶保守结构域。其编码的蛋白理论分子量为3 5461.1Da,有3个跨膜区和多个磷酸化位点,蛋白的理化性质较稳定。预测有4个主要的B细胞抗原表位,L-乳酸脱氢酶活化位点之一的His192包含于表位190-199aa中。酶催化位点的3个关键氨基酸在空间结构上相互靠近。PCR、双酶切及DNA测序结果均表明重组质粒pET-28a(+)-TsLDH-A构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL-21/DE3中获得表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白能被TsLDH-A重组蛋白免疫的SD大鼠血清、感染了猪带绦虫的病人血清及猪血清识别,表明其具有较好的免疫原性和免疫反应性。结论应用生物信息方法从猪带绦虫成虫cDNA文库中筛选出了TsLDH-A的全长序列并预测得到其编码蛋白的结构与功能方面的信息,该基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的表达。
关键词
猪带绦虫
乳酸脱氢酶A
序列分析
克隆表达
免疫学特性
Keywords
Taenia solium lactate dehydrogenase A sequence analysis cloning and expression immunogenicity
分类号
R383.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPII抗原的应用研究
被引量:
3
2
作者
吕刚
谢协驹
余新柄
陆家海
林琼莲
莫燕娜
机构
海南医学院寄生虫学教研室
海南医学院病理生理学教研室
广州中山医科大学寄生虫学教研室
出处
《海南医学院学报》
CAS
2000年第2期72-74,共3页
基金
卫生部九五重点攻关课题合作项目
文摘
目的 :建立一种简易快速 ,适于基层或流行病学调查的自测式胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测恶性疟原虫中 H RPII抗原 ,判定是否现症感染。方法 :用 GICA测试条检测全血及滤纸血样中的 H RPII抗原。结果 :40例恶性疟全血及滤纸血 H RPII抗原阳性检出率均为 1 0 0 ,与镜检结果相符合 ;2 5例间日疟均为阴性。结论 :GICA检测血中恶性疟原虫 H RPII抗原特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,滤纸血的应用使样本的采集、保存和运输更为便利 ,适合大规模流行病学调查和基层使用 ,有广泛应用价值。
关键词
恶性疟原虫
HRPⅡ抗原
胶体金层析法
Keywords
Plasmodium falsiparum
HRPⅡ antigen
collodial Gold Immunochromatography Assay
分类号
R531.304 [医药卫生—内科学]
R446.62 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪带绦虫乳酸脱氢酶基因的序列分析、克隆表达和免疫学分析
杜武英
黄江
胡旭初
余新柄
徐劲
廖兴江
戴佳琳
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
10
下载PDF
职称材料
2
胶体金层析法检测恶性疟原虫HRPII抗原的应用研究
吕刚
谢协驹
余新柄
陆家海
林琼莲
莫燕娜
《海南医学院学报》
CAS
2000
3
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职称材料
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