应用巢式逆转录聚合酶链反应检测鱼类病毒性出血性败血症病毒(VHSV)

参照鱼类病毒性出血性败血症病毒序列,根据PCR引物设计的原则,设计巢式PCR引物,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对如何快速检测鱼类病毒性出血性败血症病的方法进行了较为系统的研究,并对RT-PCR的反应条件进行了优化。结果表明,巢式RT-PCR扩增获得279bp的特异性片断,阴性对照无扩增条带。巢式RT-PCR扩增出的特异性片段经测序分析,结果证实与报道的序列完全一致。该方法最低可检测出0.1pg的鱼类病毒性出血性败血症病毒RNA。初步建立了VHSV的巢式RT-PCR检测方法,该方法灵敏、特异,可为VHSV的检测提供一个快速、有效的手段。

从“抢油”事件谈“油荒”

加油站里“车”满为患，长龙一甩就是几公里，彻夜等待加油，加油数量被严格控制，这已经是对“油荒”的最生动诠释了。2007年11月14日，我市某加油站更是发生了200多人带铁桶，为争抢油枪加油而大打出手的事件。

宁波市南美白对虾主要病害流行特征及应对措施

近年来,南美白对虾养殖在宁波市发展很快,但由于集约化、高密度养殖,以及不当的病害防治技术,南美白对虾病害频发,已对该产业持续、健康发展造成了极大的威胁。在对近几年宁波市南美白对虾养殖主要病害进行监测的基础上,分析了宁波市南美白对虾养殖主要病害的流行特征及其发病原因,并结合宁波市南美白对虾养殖实际状况,寻求有效的应对措施。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)微卫星位点的分离和序列分析

采用磁珠富集法,利用生物素标记的(GT)15寡核苷酸探针从三疣梭子蟹基因组DNA的Sau3A1酶切的500—1000bp片段中筛选微卫星序列。洗脱的杂交片段克隆到PMD18-T载体上构建富集微卫星基因组文库后,通过PCR筛选检测出阳性克隆进行测序。在56条测序序列中有49条非冗余序列包含有重复次数不少于5次的微卫星位点,阳性序列比例达到87.5%。其中perfect类型微卫星最大的重复次数为47次。在47条非冗余序列中,共有40条(85.1%)微卫星重复序列两端有侧翼序列能够进行引物设计。本研究中筛选的微卫星位点将为下一步的三疣梭子蟹种群遗传结构分析、经济性状的QTL定位提供遗传标记。

宁波地区南美白对虾白斑综合征病毒(WSSV)的检测与分析

为了解浙江宁波地区南美白对虾白斑综合征病毒(WSSV)的流行情况,为科学防控该病提供参考依据,应用PCR方法对2004～2008年采自宁波地区对虾养殖场的1201份南美白对虾样品进行WSSV检测。结果表明,1201份样品中有364份样品呈阳性,总阳性率为30.31%;2004～2008年的WSSV年平均阳性检出率均较高,且呈不规律变化,其中以2006年南美白对虾白斑综合征发病最严重,阳性感染率达42.66%,但2006～2008年WSSV的年平均阳性检出率呈下降趋势。

宁波地区南美白对虾桃拉综合症病毒(TSV)的检测与分析

桃拉综合症病毒(Taura Syndrome Virus,TSV)是对虾养殖业危害较严重的病毒之一。应用RT-PCR技术,对2004～2008年在宁波地区收集的1201份南美白对虾样品进行TSV检测,旨在调查了解该地区TSV的流行情况,为科学防控该病的发生提供参考。结果表明,被检样品中,44份样品呈现阳性结果,总阳性率为3.66%,且2004～2008年南美白对虾TSV阳性检出率呈逐年降低的趋势。可见,宁波地区南美白对虾桃拉综合症已得到有效防制。

宁波市三疣梭子蟹主要病害流行特征及应对措施

宁波市人工养殖三疣梭子蟹已有近30年的历史,近十几年来发展十分迅猛,其养殖规模迅速扩大。但目前,三疣梭子蟹养殖产量普遍偏低,且病害频发,严重制约本市三疣梭子蟹养殖业进一步的发展。在对近几年本市三疣梭子蟹养殖主要病害进行监测的基础上,分析了本市三疣梭子蟹养殖主要病害的流行特征及其发病原因,并结合本市三疣梭子蟹养殖实际状况,寻求有效的应对措施。

Aβ_(1-42)对大鼠小胶质细胞酸敏感离子通道的表达和电生理特性的影响

Aβ_(1-42)与小胶质细胞之间相互作用诱发的神经炎症反应已被视为阿尔茨海默病(AD)的重要病理指征,酸敏感离子通道(ASIC)参与了小胶质细胞的炎症应答和神经炎症免疫调节。为了探究Aβ_(1-42)对小胶质细胞ASIC的表达和电生理特性的影响,本研究利用Aβ_(1-42)孵育原代培养的SD大鼠大脑皮层小胶质细胞,免疫印迹技术和免疫荧光技术检测小胶质细胞ASIC1、ASIC2a、ASIC3的蛋白表达和分布情况,全细胞膜片钳记录Aβ_(1-42)对ASIC电流特性的影响,钙离子成像技术分析ASIC钙离子通透性的变化。结果显示:Aβ_(1-42)处理小胶质细胞后,能够诱导ASIC1的蛋白表达量增加,且其在细胞浆和细胞核中均有明显增加;胞外pH值快速降低诱发的ASIC电流,小胶质细胞胞内钙离子浓度明显增强,这种增强效应可被ASIC非特异性抑制剂阿米洛利和ASIC1特异性抑制剂PcTx1抑制。本研究结果表明,Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞ASIC1蛋白功能性表达增加,使得ASIC1易于被胞外快速酸化激活而表现出明显增强的电生理特性,进而影响小胶质细胞的炎症应答和免疫调节作用,为后续探究小胶质细胞感应通路和应答调节及神经退行性疾病发生提供了思路和参考。

钒暴露对大鼠小胶质细胞炎症反应和迁移的影响

目的观察偏钒酸钠(Na VO3·2H2O)暴露对小胶质细胞炎症反应和迁移的影响,探讨钒神经毒性的相关机制。方法偏钒酸钠孵育原代培养的SD大鼠小胶质细胞,免疫荧光技术显示小胶质细胞形态的变化及其特异性标志物Iba1的表达,免疫印迹技术检测i NOS、COX-2、ERK和p-ERK蛋白表达,酶联免疫吸附实验检测炎症因子TNF-α,IL-1β的释放水平;构建划痕迁移模型,免疫荧光技术记录偏钒酸钠对小胶质细胞迁移的影响。结果偏钒酸钠孵育小胶质细胞后,神经小胶质细胞形态由静息态的分支状向吞噬细胞样形态转变,其特异性标志物Iba1表达显著增加;i NOS和COX-2的蛋白表达和TNF-α,IL-1β释放水平与对照组相比较均显著升高;偏钒酸钠促进小胶质细胞的迁移。结论偏钒酸钠显著促进了小胶质细胞的炎症反应和迁移。

一种SD大鼠高血脂模型建立方法的验证以及造模时长对相关指标的影响探讨

目的通过喂养SD大鼠高脂饲料诱导高血脂动物模型,比较造模8 d和14 d的差异,探讨模型中相关检测指标的变化规律,为降血脂评价体系中动物模型的建立提供参考依据。方法依照同一标准在相同环境条件下进行8 d和14 d两次造模,每次造模将72只雄性SD大鼠随机分为模型组和对照组,用喂饲法分别给予模型饲料和维持饲料,造模结束后测定动物各项指标。结果两次造模模型组动物血清中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白-胆固醇均高于对照组(P<0.01),高密度脂蛋白-胆固醇均低于对照组(P<0.01);模型组之间及对照组之间各项指标相关性趋势高度一致,但模型组与对照组比较,检测指标的相关性均存在较大差异;模型组之间动物血清中甘油三酯、高密度脂蛋白含量均有明显差异(P<0.01);造模8 d、14 d动物均出现不同程度的肝病理性改变。结论两次造模均成功,且同为混合型高脂血症动物模型;使用该方法建立的高血脂模型具有造模时间短、关键指标稳定及重现性好的特点。

异硫氰酸烯丙酯原药致突变作用研究

目的检测70%异硫氰酸烯丙酯原药的致突变作用。方法应用小鼠骨髓多染红细胞微核试验、鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)、哺乳动物细胞基因(TK位点)突变试验和哺乳动物细胞染色体畸变试验对70%异硫氰酸烯丙酯原药的致突变作用进行研究。结果 70%异硫氰酸烯丙酯原药各剂量组对小鼠骨髓多染红细胞微核率无增加作用。在Ames试验中,70%异硫氰酸烯丙酯原药各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照组的2倍,实验结果为阴性。对哺乳动物细胞基因(TK位点)无致突变效应,对哺乳动物细胞染色体无畸变作用,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在本实验条件下,70%异硫氰酸烯丙酯原药无明显致突变作用。

乳氟禾草灵原药的亚慢性经口毒性

根据《农药登记毒理学试验方法》(GB 15670—1995)进行乳氟禾草灵原药亚慢性经口毒性试验。结果显示,高剂量染毒组大鼠血WBC计数降低,血清天门冬氨酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶升高,雄鼠中性粒细胞比例升高,肾脏器系数偏高;中、高剂量染毒组大鼠单核细胞比例、血清尿素氮和肌酐升高,肝脏质量及脏器系数均偏高,雌鼠淋巴细胞比例降低。雌、雄大鼠亚慢性经口最大无作用剂量分别为3.81 mg/kg和3.50 mg/kg。

玛咖黄芪片增强免疫力功能实验研究

目的评价玛咖黄芪片增强免疫力的作用,为玛咖黄芪片作为保健食品的开发提供理论依据。方法将受试样品按0.333、0.667和2.000g/kg·bw 3个剂量给小鼠连续灌胃30d后开展免疫功能测定。试验项目为小鼠细胞免疫功能测定、体液免疫功能测定、单核-巨噬细胞功能测定和NK细胞活性测定。结果细胞免疫功能测定,0.667和2.000g/kg·bw 2个剂量组小鼠左后足跖肿胀度明显增厚,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);单核-巨噬细胞功能测定,2.000g/kg·bw剂量组单核-巨噬细胞碳廓清能力及0.333、0.667和2.000g/kg·bw 3个剂量组的小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能均明显增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论吗咖黄芪片具有增强免疫力作用。

金花茶花朵水溶性提取物毒理学安全性评价

金花茶(Camellianitidissima)为山茶科山茶属金花茶族植物,是中国8种国家一级保护植物之首,属《濒危动植物种国际贸易公约》附录物种[1-2]。金花茶为广西壮族传统用药,在《广西中药材标准》中记载用于治疗咽喉炎、肾炎、痢疾、肿瘤、便血、高血压和月经不调等病症[3]。它以叶和花入药,其叶主要用于咽喉疼痛、肾炎水肿、尿路感染、高血压和预防肿瘤等,其花主要用于便血、月经不调和降压减脂等。

粉唑醇原药的亚慢性经口毒性研究

目的研究粉唑醇原药亚慢性经口毒性作用,初步分析染毒后对大鼠血液、肝和肾功能的影响。方法按照GB15670-1995《农药登记毒理学试验方法》的要求进行实验,将80只清洁级SD大鼠按体重随机分成4组,每组20只,雌雄各半。分别用含37.5、150和600 mg/kg粉唑醇的饲料连续喂饲染毒90 d。观察各组大鼠的临床表现、摄食量、体重,实验结束时测定相关血液学指标、血液生化学指标、脏器重量、脏器系数及病理组织学改变。结果雌鼠各组实际染毒剂量分别为2.8、12.2、47.2 mg/kg,雄鼠各组实际染毒剂量分别为2.8、11.3、47.1 mg/kg。试验期间,各剂量组雌、雄鼠活动、进食、饮水基本正常,未见明显中毒表现。与相应对照组相比,高剂量组雄鼠白细胞计数(WBC)显著降低。中、高剂量组大鼠尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)显著升高,高剂量组雌鼠总胆红素(TBIL)升高;中、高剂量组雌鼠天冬氨酸氨基转换酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)显著升高;各剂量组雌、雄鼠各脏器重量和脏器系数与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)或无生物学意义。大体解剖未见明显异常,粉唑醇原药未引起SD大鼠各脏器病理性改变。结论粉唑醇原药长期暴露对大鼠的血液、肝、肾具有毒性作用和潜在的致病风险。其对雌、雄SD大鼠亚慢性经口毒性试验的最大无作用剂量均为2.8 mg/(kg bw·d)。

沙苑苁蓉组合物对小鼠抗疲劳作用的研究

目的探讨沙苑苁蓉组合物对小鼠抗疲劳的作用。方法将160只雄性小鼠分为负重游泳实验组、血乳酸测定实验组、肝糖原测定实验组以及血清尿素测定实验组,每组40只。组内小鼠按体质量均衡随机分为溶剂对照组和受试物低、中、高3个剂量组,每组10只。低、中、高剂量组小鼠分别以0.2、0.4、1.2 g/(kg·BW)的剂量灌胃给予沙苑苁蓉组合物,溶剂对照组小鼠灌胃给予纯净水。灌胃给药每天1次,连续30 d。末次灌胃30 min后检测各组小鼠的负重游泳时长、肝糖原含量及游泳后血清尿素、血乳酸浓度,分别记录给予受试物前和给予受试物后第1、2、3周以及给药结束时的小鼠体质量。结果与溶剂对照组比较,沙苑苁蓉组合物组小鼠负重游泳时长增加,差异有统计学意义(F=3.158,P<0.05)、游泳后血乳酸曲线下面积减少(F=3.314,P<0.05)、肝糖原含量升高(F=4.016,P<0.05),差异均有统计学意义。结论沙苑苁蓉组合物能提高小鼠运动耐力,并减少小鼠体内血乳酸堆积、增加肝糖原储备,具有抗疲劳作用。

啶酰菌胺原药安全性评价

啶酰菌胺为吡啶酰胺类化合物,因其杀菌谱广,几乎对所有类型的真菌病害都有活性,且作用机理独特、不易产生交互抗性、对作物安全而被广泛应用于用于油菜、葡萄、果树、蔬菜和大田作物等病害的防治。目前国内外有关啶酰菌胺毒理学安全性评价的报道甚少。本研究为该农药安全使用提供可靠的实验依据。

一种儿童型蛋白质粉增强免疫力功能实验研究

目的评价某儿童型蛋白质粉增强免疫力的作用。方法将受试样品按0. 825、1. 650、3. 300 g/(kg·BW) 3个剂量给予小鼠连续灌胃30 d后进行免疫试验。试验项目为细胞免疫功能试验、体液免疫功能试验、单核-巨噬细胞吞噬功能试验和NK细胞活性测定方法。结果 1. 650、3. 300 g/(kg·BW)两个剂量组Con A诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力较溶剂对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0. 05),3. 300 g/(kg·BW)剂量组单核-巨噬细胞碳廓清能力及小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能均明显高于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P<0. 05),1. 650、3. 300 g/(kg·BW)两个剂量组小鼠NK细胞活性(数据转换值)明显高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0. 05),1. 650 g/(kg·BW)剂量组小鼠抗体生成细胞数明显高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论某儿童型蛋白质粉具有增强免疫力作用。