中药药理学贯通性实验的设计及应用——以凉膈散为例

目的 中药药理学是以传统中药学与现代药理学为主体的新兴交叉学科,迄今国内尚未有完善的中药药理学贯通性实验教学方案。方法 结合现有基础教学条件及中药药理学教学团队的教学改革实践经验,选择凉膈散(LGS)进行实验设计。结果 建立了完善的贯通性实验教学方案,并选取中药学和中药制药2个专业学生进行教学实践。结论 此研究为中医药院校及综合性院校的中药学专业进行实验教学改革提供模板及思路。

基于生物信息学与实验验证探讨凉膈散通过GSK-3β调控内毒素致急性肺损伤分子机制

目的探索凉膈散治疗内毒素所致急性肺损伤(ALI)的作用靶点,分析并验证其可能的作用机制。方法通过GEO、TCMSP和中医药整合药理学研究平台(TCMIP)获取凉膈散PI3K/Akt通路相关ALI疾病基因,采用单基因Meta分析识别凉膈散可能的作用靶点,通过脂多糖诱导的小鼠ALI模型对预测结果进行验证。结果生物信息学分析确定GSK3β、CDKN1A、NFKB1和MCL1为PI3K/Akt通路相关的ALI疾病特征基因,其中GSK3β是凉膈散治疗ALI的作用靶点。在脂多糖诱导的ALI小鼠模型中,凉膈散和GSK-3β抑制剂TWS119均可显著减轻小鼠肺组织水肿(P<0.001),下调GSK-3β基因表达,降低Th17细胞比例、Th17/Treg比值和白细胞介素-17含量(P<0.001,P<0.05),提高Treg细胞比例和转化生长因子-β含量(P<0.05)。加入GSK-3β激动剂Wortmannin处理后,凉膈散的上述作用被部分逆转。结论GSK-3β是凉膈散治疗ALI的作用靶点,凉膈散可通过抑制GSK-3β表达调节Th17/Treg免疫平衡,从而发挥治疗ALI作用。

基于斑马鱼炎症模型的凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗炎活性评价及作用机制

目的:采用脂多糖(LPS)诱导斑马鱼炎症模型,通过浸泡给药方式,评价凉膈散及其组分甘草不同极性部位的抗LPS活性。方法:利用相似相溶原理分离得到凉膈散及其组分甘草的不同极性部位,随机选择受精后3 d的斑马鱼,暴露于不同浓度的药物提取物中,进行为期24、48、72 h的毒性观察;斑马鱼卵黄囊显微注射0.5 g·L^(-1)LPS造模,浸泡给予不同浓度的凉膈散及甘草提取物,统计72 h内斑马鱼的生存数目并在显微镜下观察12 h时斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集情况;苏木素-伊红(HE)染色对LPS显微注射斑马鱼卵黄囊进行组织病理学分析;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)进一步探讨凉膈散及甘草体内抗炎作用及其可能的机制。结果:凉膈散及甘草提取物毒性随着极性升高而降低,药物的毒性大小依次为石油醚部位>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位;与LPS模型组比较,各提取物均能提高LPS斑马鱼炎症模型的动物生存率,抑制斑马鱼卵黄囊中性粒细胞的聚集及炎症细胞浸润,其中凉膈散水部位与甘草乙酸乙酯部位的效果最为显著(P<0.01);此外,与LPS模型组比较,凉膈散水部位与甘草乙酸乙酯部位降低了斑马鱼炎症模型中促炎细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达,抑制了LPS诱导的Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)的上调(P<0.01)。结论:凉膈散及其组分甘草的不同提取部位对LPS炎症均有保护作用,其机制可能与抑制TLR4和NF-κB信号通路相关;在斑马鱼模型中,浸泡给药方式适用于中药的抗LPS活性筛选,可用于单味中药、复方及其不同提取部位的抗内毒素活性评价。