端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。

嵌入式远程数据采集与传输技术的研究与实现

RDC是一种低成本的现场可更换单元,作为综合模块化航空电子系统的一个组成部分,提供可扩展的远程数据采集与传输能力,其主要功能是通过系统数据总线为多种子系统传感器、做动器与核心处理机之间提供接口,系统总线可采用AFDX AS5643或ARINC429。

高频保护通道故障分析及处理

作为线路两端主保护装置联系的"纽带"高频通道能否正常运行,正确传送高频信号,决定着高频保护的运行水平。当系统出现故障时,如果线路保护的高频信号不能通过通道正常传送,则有可能出现保护拒动和误动的现象,影响系统安全、稳定的运行。搞好高频信号专用通道的维护,是保证高频保护正常投入运行,保证系统安全稳定运行的前提。

基于铁电存储器的事务型文件系统

事务型文件系统可跟踪文件系统最终的稳定状态,保证在掉电环境下仍可正常工作。针对铁电存储器的特点,给出基于铁电存储器事务型文件系统的设计方案、底层驱动及应用接口设计,并对基于不同存储器的事务型文件系统进行性能比较。实验结果表明,基于铁电存储器的事务型文件系统文件管理方便、写入速度快,同时数据存储不受突发断电的影响,无需在重启时进行冗长的磁盘检测,降低了应用程序编写难度,加快了重启时间。

端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNAhTERT的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westorn Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT/U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从G1期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强。

miR-29通过ITGB1抑制胃癌侵袭、转移的分子机制

目的观察miR-29对胃癌细胞体外侵袭力的影响,探讨miR-29通过ITGB1调节胃癌侵袭和转移的具体机制。方法通过基因芯片筛选胃癌与癌旁组织中差异性表达的miRNA;采用生物信息学预测ITGB1调控相关miRNA,通过比对上述2个结果,筛选出miR-29;进一步以miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29后,用Western blot检测胃癌细胞中ITGB1的表达变化;采用双荧光素酶实验分析miR-29与ITGB1的作用机制;采用Transwell侵袭实验及划痕实验检测miR-29慢病毒感染后细胞体外侵袭能力的变化;qRT-PCR检测60例胃癌患者癌组织和癌旁组织中miR-29的表达差异,并分析miR-29的表达与肝癌患者临床病理之间的关系。结果基因芯片及生物信息学预测发现miR-29在胃癌组织里高表达,同时又可能调控ITGB1;双荧光素酶实验证实miR-29可以结合在ITGB13'UTR,miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29都能在蛋白水平下调ITGB1;qRT-PCR结果显示miR-29家族3条miRNA在胃癌组织中的相对含量均低于癌旁组织[miR-29a:癌旁(32.01±10.38),癌(14.16±6.25);miR-29b:癌旁(26.95±5.05),癌(9.82±1.86);miR-29c:癌旁(53.56±8.05),癌(16.79±1.97),P<0.01];进一步统计学分析表明,miR-29a与淋巴结转移有关(P<0.05),miR-29b在具有远处转移的病例组织中C/P比值较无远处转移的病例组织明显降低(P<0.05)。结论miR-29可以在转录后水平调控ITGB1的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。

人肿瘤转移相关抗原肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及初步鉴定

目的预测并鉴定肿瘤转移相关抗原肝素酶来源的HLA-A2.1限制性CTL表位。方法采用超基序、量化基序和分子模拟相结合的方法,对肝素酶HLA-A2.1限制性CTL表位进行预测,合成候选表位肽;利用T2细胞的特点,对合成的候选肽与HLA-A2.1分子进行亲和力分析,初步验证预测结果;利用标准51Cr释放试验检测特异性CTLs诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)可在体外有效诱导肝素酶特异性CTLs的产生,对肝素酶阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ细胞具有明显的杀伤效应。结论Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)有可能是肿瘤抗原肝素酶HLA-A2.1的限制性CTL表位。

人肝素酶RNAi序列的筛选及鉴定

目的筛选及鉴定有效人肝素酶(heparanase,Hpa)RNA干扰(RNA interference)序列。方法通过在线网络软件选择3个Hpa RNAi的靶点,再设计1组无关序列作阴性对照。通过基因重组技术,把3个干扰片段及阴性对照片段分别克隆入质粒pGenesile-1,脂质体法稳定转染至HepG2肝癌细胞;经G418抗性筛选后各挑选2个阳性克隆进行扩大培养;Western blot检测不同克隆肝素酶蛋白的表达水平,并进一步采用RT-PCR验证筛选克隆肝素酶mRNA的表达水平。结果通过在线网络软件设计3个RNA干扰序列,分别为Hpa/RNAi-1:GGCTATCTCTTCTGTTCAA,Hpa/RNAi-2:TCCT-GTCCGTCACCATTGA,Hpa/RNAi-3:CTCAGTTGCTCCTGGACTA及阴性对照序列Hpa/RNAi-N:CTACCGTTGTATAGGTGT;测序证实克隆入pGenesil-1载体的3个干扰序列及阴性对照序列与设计序列完全一致;经G418抗性筛选后形成的阳性克隆采用Western blot检测其肝素酶蛋白的表达,结果表明3个干扰序列对HepG2细胞人肝素酶蛋白的表达均有抑制作用,其中Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3干扰链的抑制效果最好,分别达到57%和71%;RT-PCR检测结果亦表明Hpa/RNAi-1和Hpa/RNAi-3序列在mRNA水平对肝素酶有较好的抑制效果。结论成功筛选出有效的人肝素酶RANi序列。

胃黏膜癌变过程中hTERT和相关基因表达的变化及其临床意义

目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜(normalmucosa,NM)、肠化(intestinalmeta-plasia,IM)、异型增生(dysplasia,DYS)、早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)和进展期胃癌(advancedgastriccancer,AGC)中的表达水平、相互联系及其临床意义。方法经手术或胃镜病理证实的不同病变胃黏膜组织132例为研究对象(其中NM20例、IM30例、DYS15例、EGC24例、AGC43例),采用免疫组化SP法分别检测其hTERT、c-myc、bcl-2、NF-κB的表达水平,并对各指标阳性表达率、相关性及临床病理联系进行比较分析。结果在胃黏膜癌变过程中,除bcl-2外,hTERT、c-myc、NF-κB的表达随着胃黏膜病变程度的加重而逐渐增加,各组间比较差异显著;进一步分析表明hTERT与c-myc在IM、DYS、AGC等3组中具有显著的相关性(P<0·05),而hTERT与bcl-2、NF-κB在IM、DYS、EGC、AGC等各组中均无显著的相关性(P>0·05);临床病理分析表明,hTERT在低分化及未分化中的表达显著高于高、中等程度分化(P<0·05),而与性别、年龄、肿瘤大小等无关。结论hTERT随着胃黏膜病变程度的加重,其阳性表达率逐渐增高,提示hTERT可能在胃黏膜癌变过程中具有重要意义,是胃黏膜癌变的早期事件;c-myc过表达可能是激活hTERT过表达的重要调节因素;hTERT不仅可以作为胃黏膜癌变的早期诊断指标,而且有可能成为胃癌或其他肿瘤基因治疗或免疫治疗的良好靶位。

小鼠肝素酶H-2K^b限制性CTL表位预测及其MHC-I亲和力分析

目的预测肿瘤转移相关基因肝素酶的CTL表位,为探索基于肝素酶的抗原表位的免疫治疗奠定基础。方法利用基于超基序、量化基序结合人工神经网络方案开发的H-2Kb限制性CTL表位预测软件,对小鼠肝素酶蛋白的CTL表位进行预测,然后人工合成相关待测表位肽,再对这些合成肽与MHC-I结合亲和力进行检测。结果采用机算机网络系统,预测了5条小鼠肝素酶抗原表位,即mHpa234~241(LGEDFVEL),mHpa351~358(FAAGFMWL),mHpa519~526(FSYGFFVI),mHpa386~393(VDENFEPL),mHpa398~405(LSLLFKKL),MHC亲合力实验表明,与阴性对照肽对比,随着预测肽浓度增加,H-2Kb的表达逐渐增加,与MHC-Ⅰ类分子的亲和力亦逐渐增强,当预测肽浓度达到30μmol/L时,其荧光系数(FI)均大于1.5。结论通过计算机软件预测到的5条小鼠肝素酶CTL表位与MHC-Ⅰ类分子均有较高的结合亲和力,为该表位的下一步体内鉴定及基于小鼠肝素酶抗原表位的肿瘤免疫治疗奠定基础。

64层与128层螺旋冠脉CTA在冠状动脉支架内腔再狭窄评估中的价值对比

目的分析在冠状动脉支架内腔再狭窄评估时,64层与128层螺旋冠脉CTA的价值差异。方法将50例2014年1月至2016年1月收治的冠状动脉金属支架植入术患者,分为64层螺旋冠脉CTA检查组及128层螺旋冠脉CTA组;以冠状动脉造影检测作为诊断金标准,比较两组扫描检查图像质量,比较两组诊断效能。结果128层螺旋冠脉CTA图像质量评分高于64层螺旋冠脉CTA扫描,且差异存统计学意义(P<0.05);128层螺旋冠脉CTA检查时共12例阳性、13例阴性,64层螺旋冠脉CTA检查时共21例阳性、4例阴性;128层螺旋冠脉CTA诊断特异度、阳性及阴性预测值和诊断准确率均显著高于64层螺旋冠脉CTA诊断,128层螺旋冠脉CTA检测的图像质量优于64层螺旋冠脉CTA图像。结论 128层螺旋冠脉CTA的诊断效能显著高于64层螺旋冠脉CTA。

长期规律运动对老年大鼠心肌细胞线粒体功能的影响

探讨运动对老年大鼠心肌线粒体功能的影响。方法：将２０只２４月龄ＳＤ大鼠平均分成两组，１组为对照组，２组进行有规律的游泳训练，９０ｍｉｎ／次，６次／周，８周后测定大鼠心肌线粒体呼吸功能和电子传递组分的变化。结果：２组运动后呼吸控制率、碳氧比值明显增加，电子传递组分的活性显著升高。结论：长时间有规律的游泳运动能明显提高老年大鼠心肌线粒体的功能，可能是运动改善了老年动物心脏功能的能量基础。

电力系统及其自动化和继电保护的关系研究

随着时代的不断进步,各个领域实现了自动化建设,尤其是电力领域在社会中的发展与普及,自动化在其中发挥 的作用是不言而喻的。要先是电力系统运行的稳定性获得保障,必须要了解电力系统、自动化与继电保护三者之间的关系。 对此。

肝素酶CTL表位负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(Hpa)多肽疫苗体外能否诱发肝素酶特异性CTL反应,为肝素酶多肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法5条HLA-A2限制性肝素酶抗原表位[Hpa(525-533)(PAFSYSFFV)、Hpa(353-361)(PLLSDTFAA)、Hpa(277-285)(KMLKSFLKA)、Hpa(400-408)(PLPDYWLSL)、Hpa(405-413)(WLSLLFKKL)]分别负载正常人外周血来源(PBMC)的树突状细胞(DC),诱导肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应,采用ELISPOT方法检测肝素酶表位肽负载的DC疫苗刺激的效应细胞IFN-γ的释放。结果5条肝素酶多肽表位中,只有Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)体外可以诱导肝素酶表位特异性CTL反应,对Hpa阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应,对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但对转染了HLA-A2的HepG2细胞和转染了肝素酶质粒的MCF-7细胞恢复杀伤效应,对自体淋巴细胞不具有杀伤效应,进一步研究表明,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)表位肽可以促进CTL细胞IFN-γ的释放。结论人肝素酶特异性抗原表位Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)不仅能激发机体特异性的抗肿瘤效应,而且还能诱导一个非特异性抗肿瘤的良性循环,这种肝素酶多肽疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点,为肝素酶表位多肽疫苗的临床应用提供了理论依据。

CT与MRI医学图像融合算法及结果分析

随着影像设备的发展及各种医学成像模式的出现,多模医学图像融合技术已成为影像医学发展过程中一项重要研究,并逐渐应用到诊断、治疗领域。针对医学诊断过程中常见的CT与MRI图像采用了加权平均法、傅立叶变换及小波变换的数学方法进行了融合实验,并对实验结果进行了分析,对各种算法的优缺点进行了比较。

肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响

目的利用筛选出的肝素酶有效干扰细胞株HepG2/RNAi/1和HepG2/RNAi/3研究肝素酶RNAi对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Transwell侵袭实验、裸鼠成瘤实验分别检测HepG2肝癌细胞肝素酶RNAi后生长速度、单个细胞形成克隆能力、侵袭能力及成瘤能力的变化。结果MTT实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组细胞增殖能力明显低于HepG2组和HepG2/RNAi/N组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2/RNAi/N细胞相比,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3 G0/G1期细胞比例增加,而增殖指数下降;平皿克隆形成实验表明HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2/RNAi/N组相比显著降低[分别为(34±4)、(26±5)和(138±7)、(123±22),P<0.05)];Transwell体外侵袭实验表明,HepG2/RNAi/1与HepG2/RNAi/3细胞穿膜数较HepG2和HepG2/RNAi/N细胞穿膜数明显减少[分别为(85.1±9.1)、(78.1±10.4)和(182.2±9.7)(、183.5±9.3),P<0.05)];裸鼠成瘤实验显示,HepG2、HepG2/RNAi/N细胞成瘤率为100%,虽然HepG2/RNAi/1细胞成瘤亦为100%,但裸鼠皮下肿瘤体积较HepG2、HepG2/RNAi/N细胞明显缩小[分别为(0.099±0.030)和(0.585±0.135)(、0.690±0.099),P<0.01)],而HepG2/RNAi/3细胞裸鼠皮下未见肿瘤形成。结论肝素酶RNA干扰可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞克隆形成能力、体外侵袭能力以及裸鼠皮下成瘤能力。

基于PowerPC的单板计算机监控程序研究

基于PowerPC的单板计算机在电信和工业控制领域有广泛用途,为其设计一个简单易用的监控程序对其开发过程有重要的意义。本文介绍的监控程序仅依靠CPU内部的寄存器和程序存储器即可脱离仿真器支持全速运行,可以用于调试和测试外部SDRAM和其它外部设备。包含的FLASH写入程序可以将应用程序加载并固化到FLASH中。

人肝素酶蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的构建人肝素酶蛋白的原核表达载体,表达并纯化重组人肝素酶蛋白和制备其单克隆抗体。方法将人肝素酶cDNA克隆至原核表达载体pET30a(+),经大肠杆菌表达、纯化后,获得的肝素酶纯化蛋白免疫小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,制备能产生肝素酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用Western blotting、ELISA等技术对制备的单克隆抗体进行初步鉴定。结果原核表达重组质粒在大肠杆菌中能高效表达人肝素酶蛋白,并进一步从10株杂交瘤细胞中选取了3株能稳定分泌人肝素酶单抗的杂交瘤细胞株。结论成功制备了3株人肝素酶特异性单克隆抗体。