荷斯坦奶牛初乳与常乳代谢物差异分析

【目的】基于非靶向代谢组学技术,对荷斯坦奶牛初乳和常乳中的代谢物进行鉴定与分析。【方法】选择年龄、体况及预产期相近、胎次相同的健康围产期经产荷斯坦奶牛12头,分别于分娩后1 h和21 d采集乳汁,离心并收集乳清,依次记为初乳组(C_0)和常乳组(C_21)。采用代谢组学技术对初乳组和常乳组乳清进行分析,结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和学生t检验,以变量投影重要度(variable importance in the projection,VIP)>1,P<0.05为标准筛选差异代谢物,并对筛选出的差异代谢物进行聚类分析、显著差异代谢物筛选和KEGG通路分析。【结果】在荷斯坦奶牛初乳组(C_0)和常乳组(C_21)共筛选到97种差异代谢物,通过聚类热图可以看出,大多数代谢物在初乳组的含量高于常乳组;差异代谢物随机森林图显示,排名靠前的9种显著差异代谢物分别为乌头酸、柠康酸、龙胆酸、泛酸、牛磺酸、氧戊二酸、柠檬酸、6’唾液酸乳糖和精胺。KEGG通路富集分析显示,8条主要的代谢通路分别为酮体的合成与降解、牛磺酸与次黄嘌呤代谢、丙酮酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢、氨基糖与核苷酸糖代谢、三羧酸循环和丁酸代谢。【结论】荷斯坦奶牛初乳中脂质、氨基酸和核苷酸代谢物的含量高于常乳,而常乳中糖类代谢物含量高于初乳,初乳与常乳中代谢物水平的差异为后续代谢物机制的研究奠定了理论基础。

葛根多糖对犊牛血清抗氧化、免疫指标及肠道菌群的影响

本试验旨在研究葛根多糖对犊牛血清抗氧化、免疫指标及肠道菌群的影响。试验选取(6.20±3.65)日龄和体重[(47.09±4.50)kg]相近的新生健康荷斯坦犊牛24头,随机分为对照组(C组)和试验组(T组),每组12头。T组犊牛每头每天按每千克体重于牛奶中添加400 mg葛根多糖,连续5 d;C组不添加。检测试验犊牛第7天血清抗氧化指标——超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫指标——CD4分子(CD4)、免疫球蛋白A(IgA)、分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、免疫球蛋白G(IgG)含量和肠道黏膜通透性指标——二胺氧化酶(DAO)活性以及肠道菌群多样性和相对丰度。结果显示:1)与C组相比,T组犊牛血清SOD、CAT、NOS和GSH-Px活性分别提高了10.16%、1.79%、7.05%和3.43%(P>0.05),血清MDA含量降低了2.27%(P>0.05)。2)与C组相比,T组犊牛血清DAO活性降低了2.38%(P>0.05),血清CD4、sIgA、IgA和IgG含量分别提高了2.47%、4.05%、8.91%和6.11%(P>0.05)。3)与C组相比,T组肠道中拟杆菌门、放线菌门和梭杆菌门相对丰度增多,厚壁菌门和变形杆菌门相对丰度降低。与C组相比,T组肠道中双歧杆菌属相对丰度显著增加(P<0.05),瘤胃球菌属相对丰度极显著降低(P<0.05),狭义梭菌属1相对丰度呈下降趋势(P=0.087)。由此可见,葛根多糖可提高犊牛抗氧化能力,增强免疫功能,调节肠道通透性,促进肠道有益菌生长,抑制有害菌增殖,从而有利于犊牛的生长发育。

围产前期补饲酵母硒对奶牛乳汁代谢物的影响

本研究旨在揭示围产前期补饲酵母硒对牛乳代谢组分的影响,从乳汁代谢物的角度阐述酵母硒的生物学功能。选择20头健康荷斯坦妊娠后期奶牛,随机分为对照组与试验组,每组10头。对照组奶牛饲喂基础饲粮,试验组于预产期前21 d在基础饲粮中添加0.15 g/kg DM酵母硒,分娩当天停止添加。在分娩当天和产后第21天采集2组奶牛的乳汁,基于超高液相色谱-串联质谱技术对乳汁代谢物进行检测。采用主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析和单因素统计分析(t检验、差异倍数)方法分析对照组与试验组在分娩当天和产后第21天乳汁中代谢物的差异性;以变量投影重要度(VIP)>1和P<0.05为条件筛选差异代谢物,并对筛选出的差异代谢物进行聚类分析和通路富集分析。结果表明:补饲酵母硒后,分娩当天的乳汁中共筛选出20种差异代谢物,其中L-苯丙氨酸、α-乳糖、半乳糖-1-磷酸及磷酸羟基丙酮酸等能量相关代谢物显著上调(P<0.05),差异代谢物主要参与的代谢通路为半乳糖代谢[通路拓扑分析的影响值(Impact值)>0.1且P<0.05];分娩第21天的乳汁中共筛选出20种差异代谢物,其中白三烯A4、植物鞘氨醇等炎症相关代谢物显著下调(P<0.05),差异代谢物主要参与的代谢通路为苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成(Impact值>0.1且P<0.05)。由此可知,奶牛围产前期补饲酵母硒后可以改变分娩当天乳汁营养成分并降低产后第21天乳汁中的促炎代谢物,间接影响犊牛的健康。

中药复方对免疫抑制模型小鼠细胞因子、免疫球蛋白及红细胞免疫黏附功能的影响

【目的】评价自拟中药复方对免疫抑制小鼠血清细胞因子、免疫球蛋白和红细胞免疫黏附功能的影响。【方法】通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型。试验组免疫抑制小鼠分别按20,10和5g/kg剂量灌胃自拟中药复方,同时设置模型对照组(灌胃等体积生理盐水)、健康对照组(灌胃等体积生理盐水)和黄芪多糖对照组(灌胃剂量66mg/kg),连续7d,试验第0,3,7天采集血样,用血细胞自动分析仪测定小鼠血细胞数,用酶联免疫吸附试验测定血清IL-2、IgG、IgM、IL-4和IFN-γ含量,并计算IL-4/IFN-γ,用红细胞C3b受体花环(C3b RR)及免疫复合物花环(ICR)试验分析红细胞免疫黏附功能。【结果】通过腹腔注射环磷酰胺(80mg/kg,1次/d,连用3d)成功建立了免疫抑制小鼠模型。所用中药复方和黄芪多糖可显著提高免疫抑制模型小鼠WBC,其中以10和20g/kg剂量中药复方效果显著;10和20g/kg剂量中药复方可显著提高免疫抑制模型小鼠血清中IgG和IgM含量,提高或恢复免疫抑制模型小鼠血清中IL-2含量,并可促进免疫抑制模型小鼠血清IL-4和IFN-γ含量、IL-4/IFN-γ、红细胞C3b RR率恢复至健康小鼠水平;所用中药复方和黄芪多糖对免疫抑制模型小鼠红细胞ICR率的影响不明显。【结论】自拟中药复方通过调控细胞因子和免疫球蛋白生成,对环磷酰胺介导免疫抑制模型小鼠的细胞免疫、体液免疫和红细胞免疫黏附功能发挥正向调节作用,其中以10g/kg剂量效果明显。

小鼠胚胎干细胞建系技术研究进展

目前,对小鼠胚胎干细胞的研究较为深入,并已成为研究细胞分化及信号转导、新基因发现及功能鉴定、器官发生、人类疾病和药物开发等的有效手段。胚胎干细胞建系是一项基础性工作。虽然技术日趋成熟,有些品系小鼠的胚胎干细胞建系已是常规技术,但不同品系小鼠胚胎干细胞的建系效率仍有很大差异,建系途径和方法各有特点,一个品系胚胎干细胞的建系方法不一定都适用于其他品系。本文从小鼠胚胎干细胞建系的途径、分离操作技术、培养体系等方面进行综述,并就与之相关的有些问题提出思考和对策。

无血清分离昆明系小鼠胚胎干细胞

以昆明系小鼠胚胎为研究材料,以丝裂霉素C处理的胎鼠成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEF）为饲养层,在胚胎干细胞（Embryonic stemcells,ESCs）培养液中添加血清替代物（Knockout serumreplacement,KSR）以替代胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）,并与添加FBS的培养液进行对比,研究了昆明系小鼠胚胎贴壁、ICM（Inner cell mass,ICM）集落形成以及ESCs分离的情况。结果表明,在添加KSR的培养液中,胚胎在培养3~5 d贴壁,胚胎贴壁率显著低于添加FBS的培养液;5~7 d形成ICM集落,集落未分化形态可维持2~3 d,培养10 d ICM集落仍可保持典型的未分化形态;ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率与添加FBS的培养液相比差异不显著（P〉0.05）,但2~5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS的培养液,其中有2株ESCs在添加KSR的培养液中传到7代;所分离细胞显示碱性磷酸酶染色强阳性,Oct-4、Nanog的免疫组化染色阳性,具有ESCs的特点。结论：在ESCs培养液中添加KSR比添加FBS更有利于维持ICM集落及ESCs的未分化状态。

丝裂霉素C处理后鼠胚成纤维细胞活力分析

为了探讨丝裂酶素C处理后鼠胚成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblast，MEF）活力的变化规律，试验用10μg／mL丝裂酶素C处理MEF，研究丝裂酶素C处理时间及其处理后细胞接种量、血清浓度和细胞代次对MEF活力的影响。结果表明，用10μg／mL丝裂酶素C处理2和3h，MEF活力比处理4h的稳定，处理2h的MEF活力与处理3h的没有显著差异；用10μg／mL丝裂酶素C处理3h后，MEF以（0．8～1．6）×10^4／孔接种96孔板，其活力比2．0×10^4／孔和4．0×10^4／孔接种的稳定；用含体积分数10％犊牛血清培养液培养的MEF活力，比用含体积分数2％，5％，15％和20％犊牛血清培养液培养的稳定；第1，3代MEF活力比第5，7代的稳定。表明，用10μg／mL丝裂酶素C处理2～3h，第1，3代MEF以（0．8～1．6）×10^4／孔接种96孔板，用含体积分数10％犊牛血清培养液培养，是利用丝裂酶素C制备MEF饲养层的适宜条件。

獭兔金黄色葡萄球菌和波氏杆菌混合感染的诊治

四川某獭兔养殖场2001年2月～3月底爆发一种以呼吸道症状为主的疾病,表现为流鼻涕、鼻塞、喷嚏、咳嗽,严重者流脓性鼻液,采食量长期低于正常水平,但没有死亡,发病率85%～90%,兔消瘦,被毛粗糙。以病兔鼻液、气管黏液、肺组织为病料分离细菌,经过对分离细菌镜下形态、培养特性和生化试验,确认为葡萄球菌和波氏杆菌的混合感染,经药敏实验筛选敏感药物氧氟沙星、红霉素配合治疗,取得较好疗效。

干细胞标志分子在猪脐带组织中的表达

【目的】研究干细胞标志分子,如干细胞"干性"调控关键基因及胚胎阶段特异性抗原(Stage-specific embryonic antigen,SSEA)在猪脐带组织中的表达状况,为猪脐带来源细胞的利用提供参考。【方法】以猪脐带为研究材料,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法,分析干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1以及SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中的表达。【结果】RT-PCR分析显示,干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1在所有猪脐带样品中阳性转录,但Nanog mRNA的相对表达量显著低于Oct4mRNA、Sox2mRNA和Rex1mRNA,而后三者之间无显著差异;免疫组化分析显示,Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中呈阳性染色,表达这些蛋白抗原的阳性细胞主要分布于脐带华通氏胶,且多集中于血管附近。【结论】从基因转录和蛋白水平证实猪脐带组织表达干细胞标志分子,SSEAs表达谱与猪胚胎生殖细胞相符,提示脐带组织中含有早期未分化的多潜能细胞。

鹿化脓性淋巴结炎病原菌的分离与鉴定

2002年2月,四川某一动物园白唇鹿出现食欲降低、腹泻、进行性消瘦,症状持续一个多月后,有4只鹿先后死亡.尸体剖检表现为下颌淋巴结、肩前淋巴结肿胀,硬固,中心化脓,脓汁黏稠呈乳白色,淋巴管增粗、充盈,淋巴液乳白色黏稠;肠系膜淋巴结肿大,淋巴结表面和切面有淡黄色或灰白色点状坏死灶,部分淋巴结中心化脓,脓汁为乳白色;脾脏肿大,表面可见大小不一的点状坏死灶,肝脏肿大局部有出血.曾用许多抗生素长时间治疗,但效果不佳.作者以病变的组织器官为病料进行细菌分离,经过培养特性、生化试验确诊为伪结核耶氏菌感染,报告如下.

NOD1和NOD2基因在牦牛雄性生殖器官中的表达检测

为了解NOD1和NOD2基因在牦牛生殖系统中的表达情况,从脾脏组织总RNA中RT-PCR扩增牦牛NOD1和NOD2基因,半定量RT-PCR分析NOD1和NOD2 mRNA在牦牛雄性生殖组织的表达水平。结果显示,NOD1在脾脏、睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、输精管和阴茎中均相对低表达,而NOD2在脾脏、睾丸、附睾头、附睾体、附睾尾、输精管和阴茎中均相对高表达。结果表明,NOD1和NOD2在牦牛雄性生殖组织中广泛表达,提示其在牦牛生殖过程中可能发挥一定的作用。

肉鸭“三炎”综合症的病原分离

对 5～ 10日龄免疫过大肠杆菌─鸭传染性浆膜炎二联灭活苗 ,但仍发生以肝周炎、心包炎、气囊炎为主要病理表现的鸭群 ,以病鸭的肝、脾、心血和脑组织作为病料进行细菌分离 ,细菌分离阳性率为 :大肠杆菌为 83.2 % ,沙门氏菌为33.3% ,鸭疫李氏杆菌为 2 7.7% ;混合感染为 38.89% ,其中大肠杆菌和鸭疫李氏杆菌为 16 .6 7% ,大肠杆菌和沙门氏菌为 11.1% ,鸭疫李氏杆菌和沙门氏菌为 5 .5 6 % ,三重感染的为 5 .5 6 % ;大肠杆菌。

CRISPR/Cas9基因组编辑技术及其在动物基因组定点修饰中的应用

CRISPR/Cas系统是细菌和古生菌中抵抗外源病毒或质粒入侵的获得性免疫系统,利用CRISPR RNAs(cr RNAs)引导Cas核酸酶沉默入侵的核酸。通过分子生物学改造使Ⅱ型CRISPR/Cas系统成为一种高效的基因组定点修饰技术,并且比锌指核酸酶(Zinc-finger nucleases,ZFNs)和TALE核酸酶(Transcription activator like effector nucleases,TALENs)结构更简单,更容易设计和应用。文章主要介绍了CRISPR/Cas9系统成为高效基因组定点修饰技术的发展历程、Ⅱ型CRISPR/Cas的工作原理和改造过程以及在动物基因组定点修饰的应用,剖析了该技术存在的问题和现有改进方案,并与成功案例相结合展望了CRISPR/Cas9系统的应用前景,以期为动物性状改良和人类疾病动物模型的创立提供新思路。

黄芪多糖对泌乳期奶牛抗氧化能力的影响

本实验旨在研究黄芪多糖对泌乳期荷斯坦奶牛抗氧化能力的影响。试验选取年龄、胎次和体重接近的泌乳期荷斯坦奶牛35头,随机分为5组(每组7头),各组每天分别在精料中添加0、5、10、50、100 g黄芪多糖,连续饲喂14 d。分别在第0、14和24 d采血测定血清总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果显示:在日粮中添加适量的黄芪多糖显著提高(P<0.05)泌乳期奶牛血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,同时显著降低(P<0.05)血清中丙二醛(MDA)的含量。结果表明,日粮中添加黄芪多糖有提高泌乳期奶牛抗氧化能力的作用,适宜添加剂量在10 g^50 g/头·d。

中药制剂防治肉鸡肾性传染性支气管炎的实验研究

将某养殖场已确诊为肾性传染性支气管炎的 2 5日龄肉鸡 30 0只 ,随机分为 6组 ,应用研制的复方中药制剂——禽速康口服液按不同剂量组合进行治疗试验。结果表明 ,禽速康 (3m L/ kg)与肾舒宝 (40 m g/ kg)联合疗法 ,对肉鸡肾性传染性支气管炎有较好的疗效 ,用药 3d可控制发病鸡死亡 ,治愈率达 82 %。经大群推广试验表明 ,禽速康与肾舒宝联合防治肉鸡肾性传染性支气管炎 ,效果确实 ,防治有效率达 93.75 %。

乳酶LDH作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标的研究

为了筛选敏感的奶牛隐性乳房炎早期诊断指标,选择220头荷斯坦泌乳奶牛,分别采集乳汁进行体细胞计数和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定。结果显示,隐性乳房炎奶牛乳汁中LDH活性显著高于健康奶牛(P<0.05),乳汁体细胞数(SCC)与LDH活性呈正相关(r2=0.93)。选择LDH活性>100 IU/L作为隐性乳房炎的判定阈值,诊断的敏感性为70%,特异性为82.3%,Jouden指数为0.52。结果提示,LDH可作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标。

白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎疗效和血清炎性因子、免疫因子的影响

为观察不同剂量白头翁皂苷B4对临床型奶牛乳房炎的疗效,及对血清炎性因子和免疫因子的影响,将36头患临床型乳房炎的奶牛随机分为低、中、高剂量3个试验组,同时选择12头健康奶牛作为对照组。试验组每日分别于颈部肌肉注射白头翁皂苷B40.025、0.05、0.1 mL·kg^(-1),连续注射6 d,对照组不注射任何药物。试验期间,观察试验组各奶牛的有效率和治愈率,同时采集对照组任意一天,及试验组1、3、5、7 d静脉血进行炎性因子和免疫因子检测,分别采集试验组1、7、12 d患病乳区奶样进行乳汁体细胞数(SCC)计数和病原微生物检测,整个试验观察至12 d,统计临床疗效。临床疗效试验结果表明,白头翁皂苷B4低、中、高3个剂量组的临床治愈率和总有效率分别为75.00%、75.00%、91.67%和100%、100%、100%,平均治愈时间分别为6.33、6.11、6.91 d。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)降低临床型奶牛乳房炎SCC。治疗前,36份奶样有34份检测出病原微生物,检出率为94.44%,主要为支原体、球菌和大肠埃希菌等;治疗12 d后,病原微生物总转阴率为52.94%,其中,杆菌、产色葡萄球菌、溶血葡萄球菌和大肠埃希菌的转阴率均达100%,支原体、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和球菌的转阴率分别为69.23%、60.00%、50.00%和33.33%。白头翁皂苷B4可显著(P<0.05)促使临床型奶牛乳房炎血清炎性因子CRP、SAA、HP、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α和免疫因子IgA、IgD、IgE、IgG、IgM恢复到健康水平。

奶牛隐性乳房炎对牛奶品质的影响

为了探讨奶牛隐性乳房炎对牛乳品质的影响,在四川省洪雅市一大型奶牛场里,将70头荷斯坦泌乳奶牛6个月内所采的334个乳样,按乳汁体细胞数分成4组,分析各组间乳成分的变化趋势。以乳汁体细胞数超过每毫升50×104个作为判定隐性乳房炎的标准,结果显示,随着乳汁体细胞数的升高,特别是体细胞数超过每毫升50×104个时,乳蛋白比率、Na+和Cl-含量及乳过氧化物酶活性随体细胞数的升高都显著增加(P<0.05);乳脂、乳糖和干物质比率及K+、Mg2+﹑Ca2+含量则显著降低(P<0.05),P含量在乳汁体细胞数每毫升超过100×104个时显著降低(P<0.05)。

支持细胞功能状态调控精子发生的研究进展

精子发生是复杂且受紧密调控的过程,其中支持细胞在此过程中发挥着核心作用。支持细胞从不断增殖到形态数量基本不变,从为生殖细胞的发育增殖提供营养到维持生精小管内部微环境的平衡,都与睾丸正常发育以及性成熟后雄性生育力密不可分。本文主要讨论了支持细胞在正常和异常精子发生中的作用与调节,总结了支持细胞数量、结构、表达蛋白及分泌物质变化与精子发生之间的关系,同时也为研究男性不育基因治疗与男性避孕提供参考。